临床医学检验主管技师考试辅导151

1、最新修正版立克次体及检验考点共同特征生物学特性致病性微生物学检验一、立克次体一类严格寄生在细胞内的原核细胞型微生物。一斑疹伤寒群立克次体属(Rickettsia)斑点热群柯克斯体属立克次体东方体属埃立克体属L巴通体S立克次体的共同特征： 大多是人畜共患病原体，引起人类发热和出血性疾病； 以节肢动物为传播媒介或储存宿主； 大小介于一般细胞与病毒之间，革兰染色阴性，呈多形性主要为球杆状; 除极少数外均专性活细胞内寄生； 对多种抗生素敏感； 菌体内同时含有 DNA和RNA 以二分裂方式进行繁殖。二、生物学性状1. 形态与结构：形似小杆菌，具有程度不同的多形性。无鞭毛或荚膜。G-，不易着色，常用 Gi

2、emsa、Macchiavello 禾口 Gime nez法染色，Giemsa染呈紫红色，常显两端浓染， Maechiavello 染呈红色，Gime nez法染呈红色，背景为绿色。Macchiavello 和Gime nez法染色可以鉴别恙虫病立克次体与其他立克次体。在Macchia- vello 染色中,恙虫病立克次体呈蓝色，其他立克次体呈红色。Gime nez染色，恙虫病立克次体呈暗红色，背景为绿色。与G菌非常相似，脂类含量比细菌多，细胞壁弹性较大。各种立克次体在细胞内存在部位有所不同，以此可作初步鉴别。立克次体定位普氏立克次体胞质中恙虫病立克次体胞质近核处Q热立克次体胞质的空泡中斑点热

3、立克次体胞质外，核内埃立克体宿主细胞膜包被的空泡内2. 抗原组成构造： 群特异性抗原 种特异性抗原外斐反应：斑疹伤寒等立克次体与变形杆菌某些X株的菌体抗原（0X9、0X2、OXK抗原）具有共同的耐热性多糖类属抗原，用后者代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，作为人类或动物血清中有关抗体的检查。 用于立克次体病的辅助诊断。3. 培养特性:立克次体（除巴通体外）只能在活的真核细胞内生长。常用方法有鸡胚卵黄囊培养、细胞培养。接种豚鼠等动物可用于立克次体的初代分离。汉赛巴通体接种新鲜巧克力平板，在35C、5%C0环境中培养2周左右才长出菌落。三、致病性立克次体病以发热、头痛、皮疹及中枢神经系统症

4、状为其特征。发热多为 稽留热，伴剧烈头痛、肌肉痛；可伴恶心、呕吐；皮疹可为充血性皮疹或出血性皮疹；严 重时可累及中枢神经系统，出现神志不清、昏迷等症状。立克次体传播媒介所致疾病立克次体斑疹伤普氏立克次体体虱流行性斑疹伤寒寒群莫氏立克次 体鼠蚤或鼠虱地方性斑疹伤寒恙虫病立克次体恙螨幼虫恙虫病贝纳柯克斯体体）蜱或通过接触、呼吸道、消化道Q热。以出现肺炎和肝炎为其临（又称Q热立克次彳等途径床特征汉赛巴通体猫抓伤、咬伤杆菌性血管瘤-杆菌性紫癜和猫 抓病四、微生物学检验注：立克次体的传染性较强，实验室工作者应首先接种疫苗，必要时进行药物预防，以防止实验室感 染的发生。（一）标本的采集和处理1. 病人血液

5、：在发病初期或急性期较易检出病原体。病程第一周内并在使用广谱抗生素前采集510ml，立即在患者床边接种于动物。血清学检查标本一般采集 3份血液标本，分别取自病程早期、病后1014天及病后2128天。如患者已使用抗生素治疗，需采集第4份标本。2. 活检或尸检材料（二）标本直接检查1. 立克次体的染色法：多用于脏器标本的检查。 标本印片、固定后用荧光抗体染色或常规染色镜检。PCR技术和核酸探针检测。2. 核酸检测：针对特异性抗原基因的序列设计引物，采用（三）立克次体培养法1. 立克次体分离：斑疹伤寒、斑点热、恙虫病和Q热病原体分离多用动物接种。汉赛巴通体用人工培养基。埃立克体用细胞培养。2. 分离

6、株的大量繁殖及保存用鸡胚卵黄囊培养或细胞培养。（四）血清学试验研究立克次体的重要方法，也是立克次体病实验诊断和鉴定病原体的重要手段 病人双份血清的试验结果，有利于立克次体病现症诊断。1. 间接免疫荧光（IFA）试验、ELISA间接法是目前检测标本中特异性抗体的常用方法。单份血清滴度1： 128者有现症诊断意义，一般滴度在1: 16或以上即为阳性,4倍增长可作为立克次体病的现症诊断。2. 凝集试验：（1）特异性凝集试验：微量血凝试验（MA ：滴度1： 8以上者为阳性间接血凝试验（IHA）、乳胶凝集试验（LA）:滴度在1: 50以上有诊断价值。（2）非特异性凝集试验：外斐试验常用于立克次体属的三个

7、生物型的诊断，缺乏敏感性和特异性。損 病变形杆BSSI®OXjOXk+地方性斑疹饬塞+或+或+4+差虫擒+腺热一十+4倍增长才有诊断意义。SSS-2S-1 外 SfiS血清滴度达1： 160即为阳性，病程中双份或多份血清试验，至少效价有 斑疹伤寒立克次体（一）生物学特性1. 形态与结构比细菌小，呈多形性；在感染细胞内大多聚集成团分布在胞浆内。经Gime nez法染色后立克次体呈红色，背景为绿色。 细胞壁不含磷壁酸，与 G的肽聚糖成分相似。2. 培养特性鸡胚成纤维细胞、L929细胞、Vero细胞CC2条件下，繁殖一代需要 68小时。3. 抗原构造群特异性抗原：与黏液层的脂多糖有关。种特

8、异性抗原：与细胞壁外膜的表面蛋白成分有关。外斐反应（Wid-Felix reaction ）:大部分立克次体与普通变形杆菌某些X菌株的耐热多糖抗原有共同的抗原性，故可用这些 X菌株代替立克次体抗原进行非特异性凝集反应去检测抗体，可作为立克次体病 的辅助诊断。4. 基因组Madrid E 株染色体为1111523bp组成的环状 DNA G+ C含量为29.1mol%。Wilmington 株基因组全长为 1111496bp，为单链环状 DNA G+ C含量为28.9mol%。5. 抵抗力对热敏感，耐低温和干燥，在干虱粪中能保持两个月左右。对四环素和氯霉素类抗 菌药物敏感。磺胺可刺激其增殖。（二）

9、致病性地方性斑疹伤寒主要储存宿主啮齿类动物，主要传播媒介鼠蚤或鼠虱自然感染周期为鼠蚤-啮齿类动物-鼠虱、鼠蚤高热、头痛、全身皮疹为主要特征；有的伴有神经系统、心血管系统筹症状和实质性器官损伤（三）微生物检验血S标本、活检.尸检材料 厂发病血清学试验（抗体IS接橙查恙虫病立克次体（一）生物学特性1. 形态与结构多形性，但以球杆状或短杆状为常见革兰染色阴性，吉姆萨染色呈紫红色；Macchiavello 染色呈蓝色；Gime nez染色呈暗红色；背景为绿色分布在细胞质内，密集于细胞核旁2. 培养特性专性细胞内寄生动物接种、鸡胚接种、细胞培养3. 抗原成分耐热性多糖抗原、特异性抗原与变形杆菌OX株具有

10、共同抗原成分4. 基因组Boryong株：2007年，线性 DNA全基因组长 2127051bp，基因组 G+ C含量为30.5mol%。Ikeda株：2008年，环状 DNA全基因组长 2008987bp，基因组 G+ C含量为30%（二）致病性恙虫病疫区主要分布在东亚、南亚、东南亚太平洋岛屿、日本和我国的东南与西南地区。38天出现）；严重者致病因素：菌体死后所释放的毒素样物质。患者可表现为高热 （3841 C），寒战、头痛、肌肉痛；皮疹（一般在发病后常出现并发症，包括肺炎、肝炎、心脏的病变、肾功能损害、脑膜炎和脑炎等。（三）微生物学检验患者采集血液标本、活检或尸检材料作为检测标本。1. 直

11、接检测ELISA间接法是检测标本的特异性抗原或抗体的最常用方法。DNA水 平。1）抗原检测：2） PCR可以检测出20ng恙虫病立克次体2. 分离培养：接种小鼠分离病原。ELISA、补体结合试验等进行抗体检测。3. 抗体检测：外斐反应、间接免疫荧光试验、贝纳柯克斯体（一）生物学特性1. 形态与结构在细胞空泡中繁殖Giemsa染色呈紫红色个体较小，多为短杆状或球杆状，常排列成对，G，但着色不显；Gime nez法染色呈红色；有荚膜，呈绒毛状；有芽胞2. 培养特点1012天鸡胚是培养大量立克次体极好宿主，一般培养3. 抗原成分颗粒性抗原，表现为两相4. 基因组DNA5株贝纳柯克斯体被全基因组测序，

12、均为环状5. 抵抗力抵抗力强，7090C加热3060min尚难杀死，一般消毒剂杀灭该病原体较为困难 对乙醇、乙醚、三氯甲烷、氯霉素、四环素类敏感（二）致病性立克次体中唯一可不借助于媒介节肢动物通过接触，气溶胶经呼吸道、消传染源：受感染的牛、羊等 对人的感染力特别强，是化道等途径感染人及动物致病物质：脂多糖发热、头痛及肌肉痛外，以出现肺炎和肝炎为其主要的临床特征（三）微生物学检验«ISi鉴定血諳免S学血讀学武验（抗体 * 补体结合 徽fi鬣ft ELISA 间It免疫荧光血液标*, S检.尸檢财料a接检Bi* I免寢黄光楡测核酶松測埃立克体（一）生物学特性1. 形态与结构G，小球菌、呈

13、多形性Roma no wsky染色呈蓝色和紫色电镜下受侵细胞胞质内可见包涵体2. 基因组目前有5株埃立克体属菌株被全基因组测序。3. 抗原成分7种主要蛋白抗原，其中 22kD为热敏性，其他均为热稳定性。（二）致病性埃立克体属腺热埃立克体人腺热埃立克体病查菲埃立克体人单核细胞埃立克体病 人粒细胞埃立克体人粒细胞埃立克体病（三）微生物学检查厂 直接检查免疫荧光检测工测免疫印迹 ELISA 间接免疫荧光汉赛巴通体（一）生物学特性1. 形态与结构弯曲的杆状小体，常呈多形性G, Giemsa染色呈紫蓝色，镀银染色呈黄色初分离的汉赛巴通体有菌毛，初代后可消失2. 培养特性营养要求苛刻的需氧杆菌血或巧克力琼脂、活性炭-酵母浸液琼脂、心脑浸液等3537 C 5% C0 2环境下培养（二）致病性巴通体属内对人致病的一个重要病原微生物引起人类杆菌性血管瘤-杆菌性紫癜和猫爪病（三）微生物学检查血液标本.活检材料直接檢匿冲比鼻逾核醱检M Starry染色能査见多形性病原»血清学试验I驗胞列 反细ft瞬 化其儀删 做分脂E