蔬菜水果中还原型Vc的测定(分光光度法)

1、食品中还原型Vc的测定（分光光度法）在蔬菜水果中含量丰富，易溶于水，酸性，以还原型抗坏血酸、脱氢型抗坏血酸、二酮古乐糖酸三种形式存在于食品中。测食品中总Vc含量的方法：荧光法和2，4二硝基苯肼法。测食品中还原型Vc的方法：分光光度法。新鲜食品中Vc主要以还原型的形式存在，因此，本实验学习食品中还原型Vc的测定。一、实验目的1.理解食物中维生素C的分布规律以及维生素C的理化特性。2.掌握分光光度法测定食品中还原型Vc的原理、操作步骤、注意事项二、实验原理在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼-2-羟基丁酰内酯衍生物。在最大吸收波长420 urn处测定吸光度，与标准系列比较定量。三、

2、仪器1.722分光光度计若干，提前20min打开预热2.10ml具塞玻璃比色管10个/组3.标签纸，记号笔若干4.组织捣碎机2个5.菜刀、菜板、一次性手套6.棕色容量瓶100ml，胶头滴管1个/组7.移液管0.5ml，2ml移液管1 ml，5 ml，吸小球2个/组1个/组8.漏斗、滤纸1个/组9.托盘天平，1个/组10.烧杯100ml2个/组四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。）1.乙酸溶液(2mol/L ：吸取11.6mL冰乙酸，加蒸馏水定容至100mL分装，1瓶/组2.乙酸溶液(0.5mol/L: 吸取2.9mL冰乙酸，加蒸馏水定容至100mL分装，1瓶/组3. EDTA二钠

3、盐溶液（0.25mol/L）： 称取9.3g 二钠水合EDTA二钠盐于蒸馏水中，加热溶液，放冷后定容至100mL。作用：是螯合剂，与金属离子螯合，避免有色的金属离子对实验的显色产生干扰。分装，1瓶/组4. 2 g/L固蓝盐B溶液（显色剂）：准确称取0.2g固蓝盐B，加蒸馏水溶液于100 ml棕色容量瓶中，稀释至刻度（室温下贮存可稳定3d以上）。分装，1瓶/组5. 抗坏血酸标准储备液（0.1 g/L）：精密称取纯Vc粉末0.2000g，加20 mL2mol/L乙酸溶液溶解后移入100 mL棕色容量瓶中并定容，摇匀。冷藏保存（10下冷藏保存稳定2d）。分装，1瓶/组6. 抗坏血酸标准使用溶液(0.

4、1 g/L:精密吸取5. 0 mL抗坏血酸标准储备溶液(2.0g/L于1 00 mL棕色容量瓶中，加5 mL乙酸溶液(2 mol/L，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于100g抗坏血酸。临用时配制。分装，1瓶/组7. 异戊醇：除生食物匀浆时产生的气泡2-3滴/次8. 蒸馏水1瓶/组五、实验步骤1. 蔬菜、水果:样品采来后，整棵菜（不掰开）洗净吹干，均匀取样，稍切碎。称取可食部分50.0 g于捣碎机内，加同倍量的乙酸溶液(2 mol/L捣成匀浆。用烧杯称取10.0 g 匀浆(含0.2 g /kg以下抗坏血酸于100m L棕色容量瓶内，加5mL乙酸溶液(2mol/L，用水稀释至刻度，混匀。滤

5、纸过滤，滤液备用。不易过滤的试样可用离心机离心后，上清液测定。2 标准曲线的绘制精密吸取0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.5, 2.0m L抗坏血酸标准使用液(相当于抗坏血酸0, 10.0, 20.0 ,40.0, 60.0, 80.0 ,100.0 ,150.0, 200.0µg，分别置于10 mL比色管中。各加0.3 mL EDTA二钠溶液(0.25m ol/L,0.5 mL乙酸溶液(0.5mol/L,1.25mL固蓝盐B溶液(2g /L，加水稀释至刻度，混匀。室温(20 -25下放置20 min后，移入1cm比色皿内，以零号管调节零点，于波长

6、420 nm处测定吸光度A，绘制标准曲线。3 试样的侧定精密吸取按1.0 mL样液(约相当于抗坏血酸200µg以下于10mL比色管中，以下按标准曲线测定方法依次加入其它试剂。加水稀释至刻度，混匀。室温(20 -25下放置20 min后，移入1 cm比色皿内，以零号管调节零点，于波长420 nm处测定吸光度A。从标准曲线上查出样液中抗坏血酸含量。六、数据记录管号012345678样液A420七、数据处理C               &#

7、160;X =  × 100                           v1                 m × × 1000V2式 中：X 试样中抗坏血酸的含