巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告

1、巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告. 实 验目的1. 通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。2. 掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。3. 学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。. 实 验原理1. 向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量 巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害， 反而被“喂养”。连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细 胞。2. 台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤 后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼 蓝，因此台盼蓝会聚

2、集在溶酶体中。是一种溶酶体染色的方法。3. 当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显 微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程. 实 验材料及设备1. 实验材料：a) 连续 23 天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b) 鸡红细胞悬液c) 生理盐水2. 实验设备：a) 普通光学显微镜b) 载玻片、盖玻片若干c) 注射器d) 染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等10 / 7四 . 实验方法及步骤1. 小鼠处理与巨噬细胞采集a) 连续2-3 天(每天一次)向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。b) 选择已注射淀粉肉汤 3 小

3、时以上的小鼠一只。c) 一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射 1ml 鸡红细胞悬液。按摩小鼠腹部。d) 20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水(0. 9%NaCl)按摩小鼠腹部。e) 3 分钟后，引颈法处死小鼠f ) 迅 速在腹腔剪开一个不大的开口(注意要剪开腹部的肌肉层)，用无针头的注射器吸取腹腔液。g) 在载玻片上滴2-3 滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。2. 观察在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞 的 巨噬细胞。注意避免玻片液体干涸。5 . 实验结果图2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜不染色）左上角示未知种类细胞100x物

4、镜放大倍数，光镜下可见随机分布的不同种类的细胞巨噬细胞体积最大，未吞噬鸡红细胞时呈边缘不规则的球状，可见 胞 质中存在不均匀分布内含物。部分巨噬细胞中可见一个或多个颜色更深的橄榄形鸡红细胞。小鼠红细胞呈现两面凹的圆饼状，并且存在一种外表呈不规则突出的细胞，大小和红细胞相似。巨噬细 胞较为固 定，可见小鼠红细胞在生理盐水中悬浮飘动。长时间录像观察可见巨 噬细胞伸出伪足缓慢移动6 .实验讨论1.实验结论：当小鼠腹腔中的巨噬细胞遇到鸡红细胞以后，鸡红细胞属于外源性抗原。非特异性识别作用使巨噬细胞迅速聚集并开始图2红细胞血小板巨噬细胞电镜观察吞噬鸡红细胞。在显微镜光镜下可见正在或已被巨噬细胞吞噬的鸡红

5、细胞。2.讨论一：在光镜下可观察到腹腔提取液中存在外表呈 不规则突出的细 ，它是什么细胞，为什么？ a）猜想一：该细胞为小鼠血小板查询资料可知：血小板是从骨 髓成熟的巨核细胞胞浆解脱 落下来的小块胞质。所以血小 板 并没有细胞结构，且体积远 小于红细胞。和观察结果不 符， 故不是小鼠血小板图3未知细胞、萎缩红细胞正常红细胞对比鼠红细胞，而左上为未知细胞。可见三者体积相似，颜色相似，左上未知细胞的伪似。同平整。和小3?讨论二：在巨噬细胞周围，有时 细胞“吐出”的透明空泡，这是什么原理？巨噬细胞除了非特异性识别外 来抗原和衰老死亡体细胞外，还兼有 分泌能力。在某些情况下，巨噬细胞 可以通过形成空泡

6、来将水解酶分泌偏b）猜想二：该细胞为部分失水的小鼠红细胞光镜下观察发现这样一组细胞（图三）：中下是正常的小鼠红细胞，右 上可以看出是略微有些皱缩的小足数量也和右侧失水皱缩红细胞凸角数相 时由图四可见该未知细胞有一个面较鼠红细胞扁平形状相对应。什图4可见扁形形状的未故此可推测出该细胞为 部分失水的小鼠红细 知细胞胞。产生的原因可能是载玻片上的生理盐水不断蒸发，导致边 缘的盐浓度升高，造成红细胞失水。观察到细胞外，抵抗病原体的侵袭，由于水解酶溶解时无色，故 时容易表现为一个透明的空泡。3 3壶组质粒pOsRc+MonomeYl/vacA 转槃THP? 1细胞24h后用电镜观察细腕老态结 JR(IOOOOX)I?细抱质中充满大小不一的空泡？细胞孩形态正常，2?堀胞质中充满大小不一的空泡？细起枝般挤到一边；3?细胞核染色质体蚣、积聚柱核周，呈早期漏亡改变$4?细胞核染色质固缩？碎裂？呈晚期凋亡改变且通过文献查询可知，部分巨噬细胞在凋亡期也会产生空泡 七.参考文献1李津婴，许燕群.红细胞形态学对溶血性疾病的诊断意义J.诊断学理论与实践,2010, (3): 214-217.2翟中和，王喜忠，丁明孝等.细胞生物学M.高等理科教育，2004(1):123-128.3解丽