麻布七中高乌甲素的含量测定论文

1、 四川理工学院本科毕业论文麻布七中高乌甲素的含量测定学 生：学 号：专 业：制药工程 班 级：制药2013卓越指导教师：穆祯强 四川理工学院化学工程学院二一七年五月四川理工学院本科毕业论文 ABSTRACT摘 要麻布七系毛茛科乌头属植物高乌头（Aconitum sinomontanum Nakai）的根，产自河北、甘肃和四川等地。其性温、味苦、有毒，具有祛风除湿，活血止痛的功效，用于风湿腰腿痛、胃气痛、跌打损伤的治疗。本文通过水提醇沉法和pH梯度萃取法得到麻布七生物碱部位，然后应用高效液相色谱，采用标准曲线法测定了生物碱部位中高乌甲素含量为36.54%，由此计算高乌甲素在麻布七中的含量为0.6

2、8%，从而为麻布七和含有麻布七药材的成药药品质量控制提供了参考，为麻布七在现有临床应用基础上的开发利用奠定了基础。 关键词：麻布七；高乌甲素；高效液相色谱；含量测定ABSTRACT Root of Tall Monkshood derived from Aconitum sinomontanum Nakai of root, a species of the Ranunculaceae in Aconitum Medical herbs. growing in Hebei, Gansu, Si chuan and other places. Its te

3、mperature, bitter, toxic, with dampness, relieving pain ect. It is used for the treatment of rheumatoid low back pain, Stomach, bruises. In this paper, the alkaloid parts of Root of Tall Monkshood were obtained by water extraction and pH gradient ext

4、raction, and then using HPLC, using the standard curve method to determine the alkaloid site in the high eugenol content of 36.54%. The calculated content of Lappaconitine in Root of Tall Monkshood was 0.68%. So as to provide a reference for the quality control of medicine and medicine containing Ro

5、ot of Tall Monkshood medicine, which laid the foundation for the development and utilization of Root of Tall Monkshood on the basis of existing clinical application.Key words: Root of Tall Monkshood; Lappaconitine; HPLC; Determination contentII四川理工学院本科毕业论文 目录目录摘 要IABSTRACTII第一章 绪论11.1 前言11.2 麻布

6、七的化学成分11.3 高乌甲素的药理作用21.3.1 镇痛作用21.3.2 局部麻醉作用21.3.3 降温消热作用21.3.4 抗炎消热作用21.3.5 抗肿瘤作用21.3.6 抗心律失常作用21.3.7 增强免疫力31.4 高乌甲素的市场前景31.5 麻布七的药理作用3第二章 实验部分52.1 实验材料与仪器52.1.1 实验药材52.1.2 实验试剂与仪器设备52.2 麻布七提取分离流程图62.3 生物碱的提取分离62.3.1 水提浓缩62.3.2 醇沉浓缩72.3.3 pH梯度萃取72.4 高效液相色谱测定麻布七中生物碱部分高乌甲素的含量82.4.1 供试品配制82.4.2 对照品配制8

7、2.4.3 高效液相色谱的条件和操作82.4.4 高效液相色谱系统适用性试验92.4.5 标准曲线的绘制102.4.6 含量测定10第三章 实验结果与讨论113.1 生物碱提取分离实验结果113.1.1 水提浓缩113.1.2 醇沉浓缩113.1.3 pH梯度萃取113.2 系统适用性结果113.2.1 理论塔板数113.2.2 分离度123.2.3 重复性实验123.2.4 拖尾因子133.3 标准曲线的绘制133.4 高乌甲素的含量143.5 实验讨论143.5.1 实验安全143.5.2 结果讨论14第四章 结论与展望154.1 结论154.2 展望15参考文献16致谢18附 录19 四

8、川理工学院本科毕业论文 绪论第一章 绪论1.1 前言麻布七为毛茛科乌头属植物高乌头的根，根长约20 cm，圆柱形，粗约2 cm，多生长于林中和山坡中，分布于四川、青海、甘肃、云南、湖北等省，近几年在甘肃地区已大量引种生产，并成为其主要商品药材之一。麻布七性温味苦，用于治疗心悸、胃气病、跌打损伤等症状，为我国民间常用草药1。麻布七中主要含有二萜类生物碱，对麻布七的化学成分研究到目前为止，从麻布七中共分离了28种化合物，其中为二萜类生物碱的共有26种，例如：高乌甲素、冉乌碱、乙酰冉乌碱、高乌亭甲等等，其中高乌甲素为麻布七根中含量最多的单体成分2，它不仅具有抗炎作用3，而且具有癌症疼痛治疗的作用。陈

9、银石研究4就表明长期服用高乌甲素类药物比服用哌替啶类药物治疗肝癌疼痛的疗效明显。麻布七具有抗炎、祛风除湿等作用，尤其是其镇痛效果作用于癌症及其他疼痛病症方面是有良好的作用，具有良好的市场前景。1.2 麻布七的化学成分在麻布七中，二萜类生物碱的占比很大。至今在麻布七根中，发现了28种化合物，经过鉴定，二萜生物碱占26种。主要类别为2,5：（1）C18二萜生物碱：高乌甲素(lappaconitine)、N-去乙酰高乌甲素(N-leacetyl-lappaconitine)、冉乌碱(ranaconitine)、N-去乙酰冉乌碱(N-leacetylranaconitine )、高乌宁甲(sinomo

10、ntanine A)、高乌宁乙(sinomontanine B)、高乌宁己(sinomontanine F)、高乌宁辛(sinomontanine H )、高乌碱甲(sinaconifine A)、高乌碱乙(sinaconitine B)、刺乌宁(lappaconine)、刺乌定(lappaconidine) 、excelsine、8-O-acetylexcelsine、高乌宁庚(sinomontanine G)、ranaconi-dine、高乌宁丁(sinomontanine D)、高乌宁戊(sinomontanine E)；（2）C19二萜生物碱：高乌宁丙(sinomontanine C)

11、、高乌宁壬(sinomontanine I)、高乌亭甲(sinomon tanitine A)、高乌亭乙(sinomontanitine B) 、去亚甲光飞燕草碱(demethylenedelcorin)、硬飞燕草碱(18-0-methylgigactonine)；（3）C20二萜生物碱：septatisine、来本宁(lepenine)；（4）其他部分：N-( chloromethyl) taspine、牛扁酸单甲酯(lycaconitic acidmonomethyl ester)。1.3 高乌甲素的药理作用1.3.1镇痛作用刘铭佩6以大鼠进行实验。实验结果表明：用高乌甲素为实验对象灌胃，

12、发现实验对象的炎症性疼痛得到改善，表明高乌甲素的具有镇痛效果。用高乌甲素为原料制成的氢溴酸高乌甲素，虽然它的镇痛作用赶不上吗啡7，但是它的镇痛作用与哌替啶的阵痛作用相当，更是解热镇痛药氨基比林的7倍之多8。不仅如此，高乌甲素在手术后镇痛作用也是有良好的效果，不但可用它来协助患者机体的功能得以恢复，使患者尽快的走出病房出去活动，而且在预防手术之后的并发症中发挥着重要而积极的作用9。1.3.2 局部麻醉作用将氢溴酸高乌甲素注射至硬膜外间隙之后，它将直接在神经根上发挥作用，阻滞从手术区段所引起的有害刺激。角膜局部麻醉用0.1%高乌甲素的作用就相当于0.84%可卡因的局部麻醉作用，它对小鼠的坐骨神经传

13、导阻滞作用分别达到可卡因和普鲁卡因的5.25倍和13倍10，因此，高乌甲素相对于可卡因和普鲁卡因，它用于浸润麻醉的镇痛效果更强。1.3.3 降温消热作用 高乌甲素注射入人体之后，将Na+通道阻膈和神经传导中断，在突触间隙上，去甲肾上腺素的量提升，这样间接影响了产热中枢，使它释放的P物质减少，最终能够降温消热。在临床实践中发现高乌甲素对中枢性产热功能具有较良好的抑制作用，因此，相对于阿司匹林类药物靠加速散热达到而达到退热的效果，高乌甲素明显具有很好的优势，患者的发热症状控制效果更为理想11。1.3.4 抗炎消热作用当多种炎症发生时，毛细血管的渗出会增加，通透性会也会得到提升，使用高乌甲素时，以上

14、现象会得到抑制。此外，肾上腺皮质功能也会变强，耳廓、足趾、下肢肿胀等得到有效的抑制12。1.3.5 抗肿瘤作用实验证明：对于抗小鼠肝癌、S180，高乌甲素具有一定的作用。作用于小鼠体内，不仅对其体重无任何明显的影响，而且对荷瘤小鼠的细胞免疫功能有显著增强的作用13。1.3.6 抗心律失常作用实验证明：以大鼠作为实验对象，使它诱发心律失常，然后将其注射氢溴酸高乌甲素，都能发现大鼠心律失常值降低。高乌甲素也能改善对犬结扎冠状动脉前降支所导致的缺血性心律失常14。1.3.7 增强免疫力氢溴酸高乌甲素使网状内皮细胞的增生得到有效的刺激，从而使白细胞、单核巨噬细胞所具有的吞噬能力增强，使其免疫力提高11

15、。1.4 高乌甲素的市场前景 癌症患者在中晚期时，它们会出现难以忍受的疼痛，它们就会迫切的希望能有一种镇痛的药物为之所用，吗啡和哌替啶虽然能够镇痛，但是它们的副作用大。现如今来说，高乌甲素不仅镇痛效果好，而且副作用小。通过硬膜外腔注射的高乌甲素比肌内和静脉注射等方法产生的疗效更好。虽然硬膜外腔注射吗啡也有镇痛作用，但是吗啡的副作用大，无形中给患者增加了不必要的麻烦。总而言之，我们在临床上可以使用高乌甲素进行硬膜外术后的镇痛作用15。高乌甲素对于轻中度疼痛有好的疗效，但是对于重度疼痛的效果不理想，出现这个问题应该与它使用的剂量有联系16，高乌甲素需要从中药制剂、增加剂量、联合其他中西药物等方向继

16、续深入研究。以更好的使其能够为临床应用服务。1.5 麻布七的药理作用1.5.1 治疗风湿性关节炎用麻布七风湿药酒和旭痹冲剂对比做治疗类风湿性关节炎的临床研究。分别对关节压痛（指数）、关节肿胀数、双手平均握力kPa、15米步行时间（S）、晨僵时间（h）、ESR、RF滴度、CRP、IgG、IgA、IgM等指数进行临床观察。研究表明，在使用麻布七风湿药酒的两个月时间里我们观察的各项指数都有明显的改善，其中ESR、CRP、RF等异常指数都向正常趋近，而关节压痛、关节肿胀及晨僵时间等指数的改善是最为明显的。和旭痹冲剂相比，麻布七风湿药酒的作用起效时间慢且药效作用相对比较温和，但对类风湿性关节炎患者的双手

17、握力和15米步行的作用强于旭痹冲剂17。1.5.2 外用辅助治疗局部癌性疼痛在进行临床研究时，将病人分为两组，一组使用麻布七温敏凝胶与阿片类镇痛药合用并且麻布七温敏凝胶是外用于痛处，另一组直接使用阿片类镇痛药。该研究是采用数字评分量表的分级对疼痛进行分级。通过记录两组患者每天的阿片类镇痛药的使用用量和发生不良反应的次数。不良反应的表现一般为便秘、恶心呕吐、头昏头晕。临床研究表明，两组患者在用药后的疼痛强度都有明显下降且下降的程度没有明显差异的时候，只使用阿类镇痛药的一组比麻布七温敏凝胶与阿片镇痛药一组的阿类镇痛药使用用量和发生不良反应的次数要多。当然药量的使用多少也影响着不良反应发生的概率。所

18、以麻布七温敏凝胶外用辅助局部癌性疼痛能有效的减少阿类镇痛药的药量，减少不良反应的发生18。1.5.3 治疗腰肌劳损腰肌劳损主要分为三种类型，分别是寒湿型、淤血型、肾虚型。在临床研究中使患者单独使用麻布七止痛片，以30天为周期，观察患者的治疗情况。研究表明，用麻布七止痛片治疗腰肌劳损的有效率达到了90%以上，能有效的治疗腰肌劳损并且在临床研究中未发现不良反应19。1.6 研究的目的和内容高乌甲素作为麻布七的主要生物活性成分，决定着麻布七的药理作用。所以要想了解麻布七的药理作用强度，检测麻布七中高乌甲素的含量是必不可少的环节。本文拟通过水提醇沉法和pH梯度萃取法得到麻布七生物碱部位，然后应用高效液

19、相色谱，采用标准曲线法测定了生物碱部位中高乌甲素的含量，并结合生物碱提取率计算麻布七药材中高乌甲素的含量。5四川理工学院本科毕业论文 实验部分第二章 实验部分2.1 实验材料与仪器2.1.1 实验药材麻布七，购自于陕西省商洛市。2.1.2 实验试剂与仪器设备表2-1 实验试剂编号实验试剂规格CAS生产厂家1乙醇（95%）分析纯64-17-5成都科龙化工试剂厂2甲醇分析纯67-56-1成都科龙化工试剂厂3二氯甲烷分析纯75-09-2成都科龙化工试剂厂4氢氧化钠分析纯67-56-1成都科龙化工试剂厂5盐酸分析纯7647-01-0成都科龙化工试剂厂表2-2 主要实验设备编号设备名称型号生产厂家1电磁

20、炉C21-SC011杭州九阳生活电器有限公司2旋转蒸发仪N-1100上海爱朗仪器有限公司3水浴锅OSB-2100上海爱朗仪器有限公司4油浴锅OSB-2100上海爱朗仪器有限公司5冷却水循环装置CA-1112A上海爱朗仪器有限公司6超声清洗仪AS5105B天津奥特赛恩斯仪器有限公司7离心机GL10MA盐城市凯特实验仪器有限公司8高效液相色谱仪LC3000北京创新通恒科技有限公司9电热恒温干燥箱DHG9245上海和羽良电子科技有限公司10电子天平Scout SE奥豪斯仪器（常州）有限公司（1）旋转蒸发仪a）旋转蒸发仪的主要组成部分旋转马达、蒸发管、真空系统、流体加热锅、冷凝管、冷凝样品收集瓶。b）

21、工作原理茄形瓶在水浴锅中恒温加热，通过一定的转速以增大蒸发面积。在真空泵的作用下，茄形瓶中溶液在负压下被旋转蒸发，对于加热的温度，我们可以利用瓶内溶剂的沸点进行加热。另外，在冷却装置的作用下，可以使蒸汽冷凝，从而加快了蒸发速率。（2）高效液相色谱仪a）高效液相色谱仪组成储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪。b）工作原理样品溶液通过进样器进入仪器，其之后被流动相带入固定相内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，当流动相和固定相做相对运动时，样品溶液经过多次的吸附- 解吸的过程，各组分的运动速率就会各不相同，最终会被分成单个组分，然后一一从色谱柱柱内流出。流出的每个组分都要经过

22、检测器，这样样品浓度被会被转换成电信号，通过记录仪处理，实验的数据会以图谱形式打印出来。2.2 麻布七提取分离流程图图2-1 麻布七提取分离流程图2.3 生物碱的提取分离2.3.1 水提浓缩将实验用的药材麻布七仔细清洗干净，准确称重麻布七4.3 kg，将其平均分成两部分，每一部分为2.15 kg，对每一部分都进行同样的操作，本阶段将利用煎煮法和旋转蒸发仪进行初步的浓缩提取。主要的操作步骤如下：（1）分配好的两个部分的麻布七和分别和2.15 kg水一起置于两铁桶内，让麻布七在水中浸泡12 h。（2）12 h之后，将第一部分浸泡好的麻布七放在电磁炉中加热至沸腾，沸腾之后的两小时停止加热使其冷却，冷

23、却之后通过过滤得到滤液，将其收集起来，剩下的滤渣再加入十倍量的水继续放在电磁炉中加热煎煮，同样的操作 共进行了三次，最终得到的总的提取液23.72 L；第二部分重复第一部分的实验内容，最终得到总的提取液27.07 L；因此，两个部分共得到50.79 L的提取液。（3）将得到的总提取液（50.79 L）通过旋转蒸发仪蒸发浓缩成浓缩液4.07 L。（注：蒸发浓缩时的温度设为50 ）小结：将麻布七和比其多十倍量的水混合12 h，是为了让麻布七完全浸泡，从而更好的为后续的煎煮将药材中的有效成分转移到水中做准备；利用旋转蒸发仪是为了使煎煮的药液浓缩，使药液没有水提提出来那么大的量，不仅为后面的实验工作减

24、少困难，而且也节省了一些化学试剂。2.3.2 醇沉浓缩醇沉浓缩是指用乙醇将浓溶液中的生物碱和盐溶解，使大分子物质的溶解度降低而形成沉淀，通过过滤而使二者分离得到清液，最终将清液通过旋转蒸发仪旋转浓缩回收乙醇而得到浓缩液。（1）向水提浓缩得到的浓缩液（4.07 L）加入约三倍的乙醇（12.21 L）静置12 h。（2）静置12 h之后通过过滤得到上清液10.78 L（乙醇浓度约为75%），从上清液中取出500 ml的清液进行蒸发干燥，最后称量得到17.2 g的样品，从而通过计算得出10.78 L的上清液中含370.13 g的样品。（3）将过滤出的沉淀加入足量乙醇（浓度为75%）充分的搅拌，之后静

25、置12 h，通过离心及抽滤得到了4.19 L的液体，同样从其中取出500 ml的清液蒸发干燥，最后称量得到了19.7 g的样品，可以得出4.19 L的液体中含165.47 g的样品。所以，水提浓缩液4.07 L共含有535.6 g的样品。（4）将（2）和（3）得到的清液（共14.97 L）通过旋转蒸发仪蒸发浓缩得到药液1.6 L。小结：通过醇沉并不能一次性得到全部提取液，因为沉淀中也含有我们需要的物质，所以我们需要对第一次过滤的沉淀药液进行抽滤处理，这样才能为后续的实验提供更高的准确度。2.3.3 pH梯度萃取pH梯度萃取：溶剂系统中pH的变化改变了各成分的存在状态（游离型或解离型），从而各成

26、分分配系数也会改变。通过适当的溶剂萃取，最终使各成分得以分离。（1）将醇沉得到的药液用水稀释，稀释至5 L。（2）用调配氢氧化钠（10 mol/L）改变药液的pH，使pH达到9-10。（3）向调好pH的药液混合二氯甲烷（5 L），置12 h之后，萃取得到二氯甲烷层通过旋转蒸发仪蒸发浓缩得到样品.（4）将旋转蒸发的二氯甲烷又加到水层萃取，重复（3）的过程5次。（5）最终测得生物碱样品79.4 g。2.4 高效液相色谱测定麻布七中生物碱部分高乌甲素的含量2.4.1 供试品配制取生物碱12 mg，将其与适量甲醇互溶之后经微孔滤膜过滤，之后将其定容至25 ml，得到样品浓度为0.48 mg/ml。2.

27、4.2对照品配制高乌甲素标准品4.7 mg，将其与适量甲醇互溶，之后将其定容至25 ml制成母液，从母液中分别取1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml至5 ml的5个容量瓶，用甲醇定容至刻度，得到5个标准品溶液，浓度（mg/ml）分别为：0.0376、0.0752、0.1128、0.1504、0.188。2.4.3 高效液相色谱的条件和操作（1）色谱条件见表2-3表2-3 HPLC的操作条件名称条件色谱柱型号Xtimate-C18色谱柱规格4.6×150 mm，5 m进样量20 L流动相75%甲醇/25%水（0.01%氨水）流速1 ml/min波长254 nm（2）色谱操作

28、a）将A泵和甲醇相连，B泵和水相连，开机之后再打开排气阀，将管及泵的气体赶出。b）将气体排尽后关阀，首先在A泵中，用甲醇冲洗色谱柱30分钟左右，在基线平稳后，其次打开B泵，再用水流动相让基线平稳。c）进样阀应扳至Load状态，用注射器进样时，应做到快速平稳，进样后，进样阀应马上从Load转到Inject位置，高效液相色谱仪开始采样工作。d）谱图采集成功后，找到数据分析系统，可以查询及编辑图谱。e）分析结束后，在A泵中，用甲醇冲洗色谱柱一小时。f）将高效液相色谱仪关机。2.4.4 高效液相色谱系统适用性试验（1）色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个参数。a）理论塔

29、板数理论塔板数n：色谱的柱效参数之一，用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。理论塔板数的计算公式： （式3-1）其中，是保留时间，是半高峰宽。b）分离度分离度R：相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，表示相邻两峰的分离程度。此次实验的分离度为主峰和距离最近峰的分离度读图可得。分离度的计算公式： （式3-2）其中，是保留时间，是峰宽。c）重复性实验标准偏差S：一种量度数据分布的分散程度之标准，用以衡量数据值偏离算术平均值的程度。标准偏差越小，这些值偏离平均值就越少，反之亦然。标准偏差的大小可通过标准偏差与平均值的倍率关系来衡量。相对标准偏差RSD：该值通常用来表示分析测试结果的精密（本实验

30、分别用生物碱样品的保留时间和峰面积计算RSD）。（式3-3）其中，Xi是峰面积，X是峰面积的平均值。（式3-4）（式3-5）其中，是保留时间，t是保留时间的平均值。（式3-6）d）拖尾因子拖尾因子T：通过计算5%峰高处峰宽与峰顶点至前沿的距离比来评价峰形的参数，目的是为了保证色谱分离效果和测量精度。拖尾因子的计算公式： （式3-7）其中，为5%峰高处的峰宽，为峰顶点至峰前沿之间的距离。（2）本实验将供试品连续进样3针，通过计算高乌甲素色谱峰的理论塔板数、与最近峰的分离度、峰面积和保留时间重现性、拖尾因子来考察系统适用性。2.4.5 标准曲线的绘制不同浓度的高乌甲素对照品溶液按浓度由低到高依次进

31、针进行高效液相色谱分析，进样量均为20 ul，根据各浓度对应的色谱峰面积绘制标准曲线，得出回归方程和相关系数。2.4.6 含量测定将供试品在同等条件下连续三次进样测定，根据三次色谱结果，把三次色谱峰面积的平均值带入标准曲线的回归方程中，于是求出了供试品溶液中高乌甲素的浓度。供试品溶液中高乌甲素的浓度与生物碱浓度的比值就是生物碱样品中高乌甲素的含量。15四川理工学院本科毕业论文 实验结果与讨论第三章 实验结果与讨论3.1 生物碱提取分离实验结果3.1.1 水提浓缩表3-1 水提浓缩过程的实验结果第一次第二次第三次合计两部分的浓缩液合计第一部分5510 ml9375 ml8835 ml23.72

32、L4.07 L第二部分9420 ml9060 ml8590 ml27.07 L总计14930 ml18435 ml17425 ml50.79 L3.1.2 醇沉浓缩表3-2 醇沉浓缩过程的实验结果茄型瓶质量旋蒸前旋蒸后样品质量各层质量清液样品249.3 g266.5 g17.2 g370.13 g滤渣样品248.6 g268.3 g19.7 g165.47 g总计497.9 g534.8 g36.9 g535.6 g因此，我们可以得到有效成分的提取率=有效成分的质量/麻布七药材样品质量。 3.1.3 pH梯度萃取表3-3 pH梯度萃取后浓缩的结果茄型瓶质量旋蒸前旋蒸后萃取生物碱质量249.3

33、g328.7 g79.4 g因此，我们可以得到生物碱的提取率（c%）=萃取的生物碱质量/麻布七药材样品的质量。 3.2 系统适用性结果3.2.1 理论塔板数根据色谱工作站对色谱图的自动计算结果（见图附3-1到图附3-3）供试品中高乌甲素的理论塔板数如下表。表3-4 供试品中高乌甲素的理论塔板数123供试品2608208221363.2.2 分离度根据色谱工作站对色谱图的自动计算结果（见图附3-1到图附3-3）供试品中高乌甲素与最近峰的分离度如下表。表3-5 生物碱样品的分离度123供试品0.900.760.783.2.3 重复性实验a）峰面积的重复性 从色谱图的自动计算结果（见图附3-1到图附

34、3-3）读取供试品中生物碱的峰面积如下表。表3-6 生物碱样品峰面积122供试品349266135072323474042 b）保留时间的重复性从色谱图的自动计算结果（见图附3-1到图附3-3）读取供试品中生物碱0的保留时间如下表。表3-7 生物碱样品的保留时间123供试品10.53010.46510.4523.2.4拖尾因子根据色谱工作站对色谱图的自动计算结果（见图附3-1到图附3-3）供试品中高乌甲素的拖尾因子如下表。表3-7 生物碱样品的拖尾因子123生物碱0.830.800.813.3 标准曲线的绘制不同浓度的高乌甲素标准品液相分析图（见图附3-4到图附3-8）0.01%峰面积如下。表

35、3-8 不同浓度高乌甲素标准品0.01%峰面积123450.01%峰面积76.7549147.3329229.9828300.8826371.7777高乌甲素标准品浓度（mg/ml）0.03760.07520.11280.15040.188由表3-8中0.01%峰面积为纵坐标y，高乌甲素标准品浓度（mg/ml）为横坐标作标准曲线如下图3-1。 图3-1 高乌甲素标准品的标准曲线图由标准曲线图可得出回归直线方程：y=1977.6x+2.2676，R2=0.9993，R=0.99963.4 高乌甲素的含量根据峰面积的重复性中求出的峰面积平均值3491311，将3491311/10000作为y带入回

36、归直线方程中计算得到供试品中高乌甲素浓度为0.1754 mg/ml。已知配制的供试品中的生物碱浓度为0.48 mg/ml，可求得生物碱中高乌甲素的含量为0.1754/0.48=36.54%。根据pH梯度萃取中已求出的生物碱提取率1.85%，因此，可计算出麻布七中高乌甲素的含量=36.54%×1.85%=0.68%。3.5 实验讨论 3.5.1 实验安全实验操作中难免会遇到一些有危险的化学试剂，比如本实验用到的二氯甲烷，它是无色液体，有类似醚类刺激性气味，不溶于水，且具有一定的毒性，因此，实验过程中要保持通风排气。当需要使用一些危险物品时，应该做好准备工作，比如提前了解它的理化性质，了

37、解它的危害，必要时还应戴上防毒口罩和防护手套等必要的安全措施。3.5.2 结果讨论中国药典规定系统适用性试验中的分离度R>1.5，拖尾因子在0.95与1.05之间。本次论文实验的分离度和拖尾因子的计算结果都不理想，也没有达到国家标准，在发现了这些问题之后，我们经过反复摸索，并尝试着更改了多次色谱条件，但由于实验室各条件的限制，最终还是不能得到更好的数据结果。四川理工学院本科毕业论文 结论与展望第四章 结论与展望4.1 结论本次论文实验将4.3 kg麻布七药材水提浓缩得到了浓缩药液4.07 L，再将浓缩药液经过醇沉浓缩过程后计算得到共535.6 g有效成分，然后通过pH梯度萃取法得到麻布七

38、生物碱79.4 g。应用高效液相色谱，采用标准曲线法测定了生物碱部位中高乌甲素含量为36.54%，由此计算高乌甲素在麻布七中的含量为0.68%。4.2 展望系统适应性试验的结果中，分离度和拖尾因子的结果并不理想，可能是因为实验室条件的限制，虽然我们反复摸索优化，但最终未能取得更好的效果，在后续实验中，建议在有条件的情况下，在流动相中加入缓冲盐溶液用，采用离子对色谱法分离，可能会有更好的效果。目前，麻布七中的高乌甲素主要用来制备注射用氢溴酸高乌甲素，对于其它新的剂型并没有什么新突破，通过本实验研究麻布七中高乌甲素的含量，实验也简单的表示了麻布七中生物碱的提取，以及生物碱中高乌甲素的测定，最终确定

39、麻布七中高乌甲素的含量，这些也都为高乌甲素的研究提供一些小小的思路，希望麻布七中的高乌甲素能够被人类研究透彻，能够生产出更多种类、副作用小的剂型，能够更好地为人类服务。当然不光对于麻布七，麻布七属于乌头属植物，我也希望大家能够对乌头属植物都能够引起足够的重视，开发它们，利用它们，研究出他们化学物质的药理活性，以提供科学理论，这样就能够有机会走出国外，为中医药赢得名声。四川理工学院本科毕业论文 参考文献参考文献1 朱海涛, 陈吉炎, 陈黎, 等. 麻布七的生药学研究J. 中药材, 2008, 31(1): 252-253.2 李芸, 苗小楼, 李剑勇, 等. 高乌头的研究进展J. 中药材, 20

40、15, 38(11): 3436- 2439.3 孙萍, 工怀宇, 韦俊. 氢浪酸高乌甲素中毒1例J. 西北药学杂志, 1997, 12(5): 198-200.4 陈银石. 28例肝癌疼痛应用高乌甲素与度冷丁的疗效对比观察J. 江西医药, 1994, 29(6): 367-369.5 徐斌, 张琴, 郭夫江, 李医明. 高乌头的研究进展J. 中药材, 2016, 38(4): 882-890.6 刘铭佩. 高乌甲素对炎症性疼痛的镇痛作用J. 中国药物与临床, 2003, 3(3): 244-245.7 Ono M, Satoh T. Phanmacological studies of la

41、ppaconitine. AnalgesicactivitiesJ. Arzneimittelforschung, 1988, 38(7) : 892-895.8 唐希灿, 朱梅英, 冯洁, 等. 刺乌头碱氢溴酸盐的药理作用研究J. 药学学报, 1983, 18(8): 579-584.9 高丽丽, 康爽. 高乌甲素在术后镇痛中的应用进展J. 黑龙江医学, 2015, 39(8): 990-992.10 辛蕊华, 程富胜, 胡振英, 等. 高乌甲素的研究概况J. 医药杂志, 2009, 28(2): 74-76.11 赵俊林. 高乌甲素的临床应用概述J. 海峡药学, 2012, 24(8): 7-9.12 刘铭佩, 鞠洋, 党月兰. 高乌甲素的抗炎作用J. 中药药理与临床, 2004, 20(4): 13-15.13 林妮, 肖柳英, 林培英, 等. 氢溴酸高乌甲素抗肿瘤的实验研究J