临床微生物大讲堂第五讲结核分枝杆菌检测之问题集锦

1、临床微生物大讲堂第五讲结核分枝杆菌检测之问题集锦1. 【多耐】李晓英成都 臭氧消毒可以杀死结核菌吗 回答：想法很好，但是我没有查到相关的文献支持臭氧可以杀死结核菌。2. 【多耐】卢先雷 成都五院4%NaOH 消化离心法现在还用吗？ 回答：此法国内现在还在使用，课件里介绍的方法是 tw 使用的。3. 【中敏】张江峰河南省医院 （58313037） 21:19:28 首先感谢范老师的精彩演讲， 针对潜伏性结核病的早期诊断， 相比较来说哪些检测适合？对 于 MTB 和 NTM ，用 MPT64 抗原检测能直接区分？回答：谢谢老师的认可。 目前潜伏性结核感染 （LTBI）的早期诊断， 比较好的方法还是

2、 IGRAs， 但要结合临床表现及影像学资料联合判断， 排除有活动性结核的可能。 TST 也可以作为 LTBI 的检测手段， 但是不能区分 BCG接种导致的假阳性干扰。 利用 MPT64 抗原检测结核分枝杆 菌培养液可以区分 MTB和 NTM ，但要注意某些 BCG 型别的假阴性，不可以鉴别 LTBI和活 动性 TB。4. 【低耐】周晓红 广州请问上述培养方法对于 NTM 能培养出来吗？ 回答：无论是固体培养（ L-J）还是 MGIT960 都是可以培养 MTB 和 NTM 的。5. 【高耐】李惠敏 上海 2015-8-11 21:18:502A 生物安全柜不可以用于结核实验室吗回答： 如果用

3、来结核菌涂片检测是完全可以的，但是做药敏（高浓度菌液或纯菌）的话建议还是使用 B2 级别的 100%外排式 BSC，同时配备负压环境，做好生物安全防护。6. 【中敏】王欣抚顺第四医院辽宁 （2366658092） 21:19:58 液体培养阳性的标本如果转做固体培养基呢？除了液转固的方法还有其他的好的方法吗？ 回答：首先，液体培养阳性 ,抗酸染色证实为抗酸杆菌 ,即可报告临床分枝杆菌培养阳性 ,不需 要转种固体培养基。 液体培养阳性的标本是可以转种固体培养基， 但是周期比较长。 目前培 养方法只有液体培养是最为理想的方法，能做结核培养的商业化系统主要是BD MGIT960 、TREK 两种，也

4、是 FDA 批准通过的两种系统（仅此两种） 。其他的血培养系统也是可以进行 结核血培养的。7. 【高耐】陆军 ?浙江衢州IGRAs 阳性肯定是潜伏性结核感染吗？ 回答：首先要明确一点的是，任何一种方法都有其局限性，不可能敏感性和特异性都达到 100%。IGRSs也不例外，只不过假阴性的比率非常的低而已。8. 【低耐】黄金伟温医附五院 临床工作中发现 T-SPOT 远没有宣传的好 回答： IGRAs不能区别 LTBI和活动性 TB，此法比较适合用于发达国家， TB 的发病率在发 达国家要相对的低很多，使用 IGRAs 主要是用来筛查 LTBI，进行干预治疗以实现消灭结核 的目的。我国是 TB 大

5、国，按照全球 1/3 感染的比例算，那我国的 LTBI可是个惊人的数字，所以会有很多 IGRAs 阳性的正常人。临床在诊断活动性TB 的时候不能单凭此检测结果就下结论，需要结合临床症状和影像学检查综合考虑。 因此，IGRAs 只能辅助性的诊断活动性 TB。9. 【低耐】王山梅河南省医 2015-8-11 21:21:30非常感谢， 请问 NTM 的生物安全要求是否等同 MTB ，也就是普通实验室是否可以处理 NTM 回答： NTM 的致病性要远远的低于 MTB ，所以一般实验室是可以处理 NTM 的，但毒力低 也不可以轻视，最好还是在 BSC 内操作。10. 【高耐】李惠敏 上海 (26014

6、1310) 21:18:502A 生物安全柜不可以用于结核实验室吗？只做涂片和染色。 回答： A2 级的生物安全柜做染色和涂片足矣。11. 【泛耐】邝俊 广西Y- 干扰素释放试验能否区分 NTM 和结核？回答： IGRAs是可以区分 NTM 的，虽然在一些 NTM 中也有表达 ESAT6和 CFP10 的，比如 堪萨斯、转黄、海分枝、斯赛格分支杆菌等，但可以导致人体发生免疫反应的只有堪萨斯， 而堪萨斯在临床很少发生感染，所以可以认为IGRAs 是高度特异的。12. 烤片机 65， 30 分钟能灭活结核杆菌吗？ 回答：烤片机 65也可以起到杀菌作用。13. 【多耐】曾吉 - 武汉T-spot 假

7、阴性有多高？有数据吗？回答： WHO 发布的指南中， IGRAs 诊断活动性 TB 的阳性率在 73%-83%，也就是说，有将近 1/4 的活动性 TB 被漏检。14. 【中敏】张江峰河南省医院 (58313037) 21:22:51针对 MPT64 抗原检测其灵敏度如何？该检测方法是否存在假阳性的结果？有哪些影响因素 引起假阳性？回答：大多数文献报道 MPT64 抗原的灵敏性在 95%以上，特异性在 98 以上。也有文献的报 道结果低于上述比率。 任何一个方法都会存在假阳性或假阴性。 文献中报道的假阳性， 更多但几率较低， 具BCG 的 4 个亚MPT64 的鉴定，的是出现在培养管污染的情况

8、， 正常培养阴性的管子偶尔也会出现假阳性， 体是什么原因导致的，原因不明确。如果培养管中的菌量较低，亦或是遇到 株( MPT64 缺失)会出现假阴性。 总之，尽量不要使用培养污染的管子进行 会降低检测的效力。15. 【多耐】鲁炳怀 北京pcr 检测结核如何评价？如何和痰涂片结核？ 回答：评价首先需要确立一个评价标准，寻找一个参比方法，通常是以培养结果作为标准， 将 PCR检测结果和痰涂片结果同培养结果进行比较，痰涂片也可以和PCR 结果进行比较。做好阴性和阳性对照， 严格按照操作规程操作是没16. 【高耐】闫立静 廊坊 浓缩法会不会有污染 回答： 保证浓缩法使用的溶剂是可靠的， 有问题的。17

9、. 【多耐】彭娟 - 吉首 2015-8-11 21:24:35 范老师你好，我们在做天骑科技夹层杯试验，你有对夹层杯法的评价吗？ 回答：抱歉，您说的这个夹层杯我没有使用过，不好做出评价。18. 【高耐】刘拥荣 宁乡县 老师好，我想问一下，我们用的是彭氏杯检测，平日里都在生物安全柜里操作，老师说房间 也需要保持负压，这样的要求对基层来说有点高回答： 我在课件里讲的是如果操作药敏， 强烈建议有负压环境，因为在药敏过程中，会制备 高浓度的 MTB 菌液，会产生大量的气溶胶， 再好的 BSC也不能完全保证不会有气溶胶外泄， 所以最好有负压环境， 保证气流的定量流动。 但如果只是做抗酸涂片和培养的话，

10、 没有负压 是可以的，但要做好个人防护。19. 【高耐】江鸿乐 黄山 2015-8-11 21:25:04 比较高压哪个比较方便一点？ 回答： 高压的效果是毋庸置疑的，高压后操作是绝对安全的，但是需要较长的时间。次氯酸钠浓缩法虽然可以杀死 MTB，但肯定是没有高压的结果可靠，不能保证所有的MTB 都被杀死，但已大大降低了生物风险。操作起来会比较省时方便。20. 【低耐】余蓉 许昌 谢谢老师的精彩讲解，范老师在课件中提到的 tw 涂片的方法，是现在用彭氏杯法的结核杆 菌集菌法吗？回答： 我没有使用过老师说的彭氏杯法， 但我想最终达到的目的都是一样的， 富集菌落提高 阳性率。21. 【高耐】邓起秀

11、 ?广西钦州 2015-8-11 21:25:27 谢谢范老师精彩演讲， 1、请问胸水有什么好的方法固定，平时染色到一半就掉完，到最后 镜检就什么都没有了？2、抗酸染色方法有热染和冷染，请问阳性率哪个高，热染抗酸杆菌永不褪色，冷然容易褪 色，平时工作我们应该用那种方法比较好？3、如果肺结核病人吃药大概一年，临床症状消失，痰涂片阴性，拍片提示还是肺结核，请 问这时候是以实验室检验结果为主还是以拍片结果为主，还需要继续治疗吗？ 回答：1.1.首先一点是涂片不要太厚， 最好用 NaOH 消化处理， 离心后再涂片， 玻片要脱脂。 钱雪琴老师的做法： 将胸水中的凝块絮状物吸到另外一只离心管， 剩余标本离

12、心沉淀， 去上 清，将沉淀物与之前的凝块合在一起，用 2 倍体积 2%-4%NaOH 消化半小时，用 3-4 倍 PBS 或蒸馏水中和，离心，弃上清，取一滴涂成 10mm*20mm 大小。消化时以絮状物和凝块完 全消失溶解为宜，要漩涡震荡。胸水离心后,如果不消化处理 ,要避免染色时脱落 ,涂片做到尽可能薄，最好紫外线照射 2 个小时，也是可以的 .2. 阳性率我没有做过比较，但效果应该是一样的，只是放久了冷染会褪色。至于使用 哪种方法，要综合多方面的因素，如果您所在的省份需要阳性 MTB 涂片保存时间很久，平 时标本量不多，那可以使用热染法，反之使用冷染比较好。3. 结核多数会形成空洞的钙化灶

13、，至于是活动性TB 还是治愈后存留的空洞，这个就不好说了， 要看阅片的临床医生的能力， 抗结核治疗一年已经基本可以治愈， 前提是在准确 药敏结果指导下治疗。 涂片转阴， 没有临床症状并持续 2-3 个月， 基本可以认为是治愈了。22. 【敏感】李晶晶 -临汾 (943759975) 21:26:04 胸水结核菌图片一定需要离心吗？是不是根据胸水性质而定？因为胸水中的菌载量通常是比较低的，50-100ml 为宜。回答： 胸水结核菌涂片最好是离心消化后再涂片， 色时易脱落 ,需要离心富集菌再进行检测。胸水量23. 【低耐】黄金伟温医附五院 (261118840) 21:26:06个人认为建议国内取

14、消 T-SPOT 检测，增加涂片检查，加强尤其脑脊液，心包积液，腹腔积 液的离心及标准化检测回答：取消 T-SPOT 肯定是不可能的，只是要合理使用。涂片毕竟也有局限性，结核的诊断 本就是复杂困难的，需要联合多种方法检测。24. 【敏感】杜帅先武汉协和结核 TSPOT检测， 有时候会碰到阳性阴性对照， 以及 A，B 抗原斑点都有很多点， 复查也一 样。尤其是风湿科和消化科的病人常见。请问老师们碰到这种情况怎么解释？回答： T-SPOT 检测结果判读是数细胞点数，如果遇到一些患者，特别是风湿科的患者，或 者是免疫性疾病的患者，其体内T 细胞释放的干扰素 - 的量会偏高，即本底偏高，致使阳性对照和

15、阴性对照都出现较多的斑点，造成结果判读的困难。25. 【高耐】陈志坚 -广西 (429327988) 21:26:29 范老师，想问：(1)有一病人去年上半年查出结核，痰涂片也找到抗酸杆菌治疗后好转，今 年 8 月初，又出现咯血， CT 看到新的结节状，但痰涂片找不到结核菌，为什么呢？(2)结核菌有没有排菌期？谢谢回答： 1.结核病治愈后是非常容易复发的，因为肺泡巨噬细胞很难将MTB 完全清除。还有就是有可能该患者又被传染而发病。 有 TB的症状但涂片阴性是常见的情况， TB 涂片阳性要 有一定的前提条件：首先，该患者必须是开放性TB， MTB 在患者咳嗽的过程中才能随痰液排出；菌量也是一个重

16、要条件， 涂片的敏感性或是检测下限在 5000cfu/ml ，如果低于此水平， 涂片是检测不出的。 另外，每次咳痰也不一定都是从病灶咳出的， 因为每次咳痰的力度不同， 痰液有可能从不同部位的肺段排出，就会出现时阳时阴的情况。26. 【泛耐】周惠娟 - 陕西请问胸水 ,有什么好的方法固定，平时染色到一半就掉完，到最后镜检就什么都没有了 回答：请参见问题 21.27. 【高耐】江鸿乐 黄山老师你好， 我们医院现在是高压之后离心涂片，然后镜检，比较次氯酸钠法离心涂片， 它们 的优缺点是什么？回答：高压后离心 ,标本没有达到真正的浓缩 ,会有很多沉淀，耗时长 ,优点是安全。次氯酸钠 法消化痰比较彻底，

17、 缺点是离心前不加水稀释，染色时痰膜易脱落。建议： 离心前用蒸馏水 稀释或不稀释，但要在沉淀中加1：15 的血浆 1滴。 (钱雪琴老师做法 )28. 【高耐】杨乐园 - 上海市一宝山分院我和吴庆老师问题一样 MPB64 和 MPT64 是指一种东西么？我们现在用的结核抗原检测培 养物是 MTB 还是 NTM 用的就是检测 MPB64 。回答： MPT64 又叫 MPB64 ，叫法不同。29. 【 MDR】卢先雷 成都五院 如何看待痰涂片抗酸杆菌阳性中的 NTM 的问题？ 回答： NTM 近年来的发病率程上升趋势，但多数是肺外的 NTM 感染。 NTM 抗酸涂片很难 通过镜下就将其同 MTB 区

18、分开，这需要经验非常之丰富的阅片人员，但也不能保证结果完 全正确，所以最好不要通过镜检来区分 NTM 和 MTB。30. 【 MDR 】卢先雷 成都五院 2015-08-11 21:30:02NTM 的比例大概占多少比例？回答： 2000 年全国第四次流调的结果是 NTM 总感染率为 11%， 2010 年第五次全国流调的 结果为 22.9%，10 年翻了一倍。31. 【 R】周川平陕西 2015-08-11 21:31:48 次氯酸钠法离心涂片和氢氧化钠处理后离心，它们的优缺点是什么？ 回答：次氯酸钠处理：1. 安全，2. 对痰的消化比较彻底3. 非特异性物质增加，对镜检有干扰4. 不易处理

19、胸腹水、脓、脑脊液和明显的血性穿刺液NAOH 处理：1. 菌是活菌，存在生物危险，2. 消化痰和尿的能力不如次氯酸钠3. 非特异性物质少，镜检背景干净，4. 对常见标本均能消化处理32. 【中敏】周志敏 许昌 高压灭菌与次氯酸钠处理相比较哪个效果更好？ 回答： 次氯酸钠好。参照问题 27 。33. 【敏感】张江峰河南省医院 谢谢老师的回答，还有问题， Xpert 检测方法，是一个盒子检测一种耐药吗？对利福平耐药 检测是针对 RRDR 耐药决定区设计探针，那就检测不出非RRDR 的利福平耐药检测？回答： Xpert 只能检测利福平耐药。其设计的探针也只能检测对利福平是否耐药。因对利福 平耐药的

20、MTB, 95%也对 INH 耐药，所以认为对利福平耐药的 MTB 基本就是 MDR 。34. 【 MDR 】卢先雷 成都五院 2015-08-11 21:33:25 快速生长 NTM 与缓慢生长 NTM 的药敏结果差异？ 回答： 快生长的 NTM 常见有偶发分枝杆菌复合群、 龟分枝杆菌 / 脓肿分枝杆菌、 转黄分枝杆 菌、齿垢分枝杆菌，其他的基本为慢生长 NTM 。慢速生长的 NTM 药敏通常使用 MGIT 960 TBeXiST检测，快速生长的 NTM 使用 CLSI M24-A2 中的 MIC 法。NTM 治疗通常比较困难， 往往需要几个月的治疗周期， 且结果不理想。 快生长 NTM 应

21、该做药敏的药物有： 阿米卡星、 头孢西丁、环丙沙星、克拉霉素、多西环素（或米诺环素） 、亚胺培南、利奈唑胺、莫西沙 星、复方新诺明、妥布霉素。慢生长的NTM，在 CLAI M24-A2 中有列出海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌病和鸟分枝杆菌复合群的药敏规则，都是不一样的。有一些 NTM 的药敏规则尚 未标准化。引自 CLSI M24-A235. 【S】马琼 河南省医 2015-08-11 21:33:57实验室对 NTM 的药敏试验有什么好的方法？回答： NTM 的药敏我没有做过，个人认为还是参照 CLSI-M24-A2 的要求来操作吧。36. 【高耐】陆军 ?浙江衢州 消化多长时间？ 回答：消化

22、15 分钟，时间要严格控制，不可过长，否则MTB 会发生菌体降解。37. 【敏感】黄晓霞 陕西 2015-8-11 21:33:29 5%次氯酸钠溶液是 84 液吗 回答：需要看包装上的说明，有效氯的浓度是多少，进行换算。可以用消毒片配置。最好是 现用现配，能够保证有效氯的浓度。38. 【低耐】林莎 长春 胸水图片，多少视野查到多少抗酸阳性菌算是阳性？胸水和痰液要求一样吗？ 回答：胸水涂片等同于痰涂片，找到3 条以上。抗酸染色 300 视野，荧光染色 50 视野。39. 【高耐】刘拥荣 宁乡县 一定要在负压房间吗？ 回答：请参见问题 18.40. 【高耐】张艳山西太原 钱老师消化后加水多少 回

23、答：加消化试剂不超过 15ml, 再加水至 50ml.41. 【低耐】杨茹 秦皇岛 以上讲的几种方法，都不能明确的区分是潜伏期结核还是活动期结核，是吗？ 回答：免疫学方法都无法区分 LTBI 还是活动性 TB。42. 【中敏】付先锋四川遂宁 老师们请问，谁知道多重耐药菌的耐药趋势图怎么做 回答：这个可以用 Excel 表格或是专业的绘图软件。43. 【敏感】柳丽娟福建传染 我们准备做结核培养，可是没有负压实验室，只配了 B2 安全柜和通风柜，需注意什么？ 回答： B2安全柜是 100%外排的，培养和涂片其实都是差不多的， 不会产生高浓度含 MTB 的 气溶胶，只要做好个人防护，如佩戴 N95

24、口罩，穿一次性反穿衣等，是可以实现自我防护 的。只有在做药敏的时候，强烈建议配有负压环境。44. 【高耐】张艳山西太原 (834935027) 21:37:43xpert 如何收费 回答：这个每个省的收费标准不一样，上海目前还没有收费标准，但计划是申请 950-1000/ 次。比较贵。45. 【敏感】柳丽娟福建传染 有人用过银科的药敏试剂吗？ 回答：我没有用过，您可以在群里面问问其他的老师。46. 【敏感】孙学慧 承德市中心医院 浓缩集菌后还有必要再紫外线照射吗 回答：如果使用 5%次氯酸钠的话没有必要。 如果使用 NaOH ，最好要照紫外， 在生物安全柜 中烤片也行。47. 【低耐】杨茹 秦

25、皇岛 固体培养基一般 4 周报阳，做药敏要取 2 周的菌苔，怎样做到？ 回答：从固体培养基上生长肉眼可见的菌落开始算起， 14 天内用于药敏检测，如超过这个期限菌龄较久，会影响药敏结果，特别是吡嗪酰胺的药敏。48. 【敏感】张江峰河南省医院老师好， 您介绍了许多针对 MTB 的检测技术， 针对 NTM 菌株的鉴定， 是否也有相对应的检 测方法呢？回答： 针对 NTM 的检测也有很多检测手段， 比如 HAIN GenoType Mycobacterium CM/AS ， 北京博奥公司的诊断芯片等。49. 【低耐】梁莉 宿州 我们是用 84 浸泡再离心取沉渣图片！ 84 对结果有影响么？ 回答：

26、84 消毒液的有效氯浓度大概在 5.5%-6.5%，浓度有点偏高，如果不稀释的话作用时间 要相应的缩短，但杀菌的效果需要做实验来验证。50. 【低耐】侯辰蕊 - 山西 请问现在市面国产结核 PCR 试剂所测序列都一样吗 ?我们结核 PCR 阳性与涂片不是很一 致，？ 回答：目前国产 PCR 试剂盒我没有使用过，但都应是 MTB 的保守序列，比如 rpoB，热休克 蛋白 65 基因等。 PCR结果与涂片结果不一致是正常的， 因为痰液里存在一些 PCR 反应酶抑 制剂，有时会导致假阴性。有时因为阅片的原因(漏检)涂片会假阴性，等等，都会导致两 种方法的结果不一致。51. 【敏感】孙学慧 承德市中心医院 胸腹水、脑脊液，可以也用次氯