疫苗注册检验及质控方法要点

1、会计学1疫苗注册检验及质控方法要点疫苗注册检验及质控方法要点2生产工艺审查：生产工艺审查：“制造及检定规程制造及检定规程”是否符合基本要求是否符合基本要求 生产及检定记录：是否符合制造及生产及检定记录：是否符合制造及检定规程的描述检定规程的描述 制品原液、半成品、成品的检验项制品原液、半成品、成品的检验项目、方法、结果是否符合国家药品标目、方法、结果是否符合国家药品标准及企业标准的规定准及企业标准的规定 制品包装、标签、使用说明书是否制品包装、标签、使用说明书是否符合相关规定符合相关规定国产疫苗注册进口疫苗注册生产工艺审查：是否符合基本要求生产工艺审查：是否符合基本要求 制品原液、半成品、成品

2、的检验项制品原液、半成品、成品的检验项目及方法是否符合我国药典标准目及方法是否符合我国药典标准 新的检测方法是否合理，是否有方新的检测方法是否合理，是否有方法学验证数据法学验证数据按照企业注册标准检验，出具报告按照企业注册标准检验，出具报告书书出具复核意见：出具复核意见： 1. 质量标准（安全性、有效性）质量标准（安全性、有效性） 2. 检测方法的科学性，是否需要改检测方法的科学性，是否需要改进进 3. 其它问题其它问题出具专家意见，补充资料和检验出具专家意见，补充资料和检验试剂、参考品等材料，样品进口试剂、参考品等材料，样品进口修订进口注册标准，及修订依据修订进口注册标准，及修订依据按照修订

3、的进口注册标准检验按照修订的进口注册标准检验出具报告及复核意见出具报告及复核意见 34567鸡胚(911日龄)流感病毒工作种子批病毒接种鸡胚尿囊腔，培养4872小时病毒收获（尿囊液）单型病毒收获液合并病毒灭活病毒超滤浓缩鉴别，病毒滴度，血凝滴度，无菌，支原体内毒素，血凝滴度病毒灭活验证8病毒液层析纯化病毒裂解，超滤再纯化除菌过滤单价病毒原液三价半成品成品硫柳汞血凝素含量，无菌鉴别，裂解剂残留，无菌鉴别，血凝素，无菌，pH装量，硫柳汞，卵清蛋白，内毒素，残留甲醛，总蛋白异常毒性，外观91011体内攻击模型法体内攻击模型法体内功能性抗体检测体内功能性抗体检测体外免疫学方法检测体外免疫学方法检测体外

4、分析（理化）方法体外分析（理化）方法与临床效果的相关性与临床效果的相关性一致性更加明显一致性更加明显各类效力试验方法的意义比较12完全的体外方法完全的体外方法简单的体内法，简单的体内法，抗体为非功能性抗体为非功能性完整的体内法，完整的体内法，抗体为功能性抗体为功能性13优点缺点体内法可以发现潜在的抗原完整性的变化，尤其是当进行攻击试验或测定功能性抗体的情况下1.变异大（试验有效的比例较低）2.试验周期长（数周或数月）3.费用高4.不符合3R原则（replacement, reduction, refinement）体外法1.变异小2.试验周期短（数小时或数天）3.费用较低4.符合3R原则1.制

5、品原因，可能无法建立，或与体内法一致性差2.可能无法区分抗原完整性的微小差异。1415161718多价疫苗中的剂量效应曲线对所有抗原的剂量效应范围为0.1 g 0.5g19效期内下降值效期内下降值生产时目标生产时目标20212223参考品的制备需要全面考虑上述因素，制订合理的策略该简单的就简单，该复杂的就复杂2425一、用途：一、用途：用于评价国产卵清蛋白试剂盒，以取代国外试剂盒用于评价国产卵清蛋白试剂盒，以取代国外试剂盒26序号序号品牌品牌/级别级别/纯度纯度/来源来源配制配制浓度浓度进口试剂进口试剂复核复核Lowry法法复核复核1 1Sigma G1mg/ml1mg/ml1.1831.18

6、30.88310.88312 2Sigma G98%1mg/ml1mg/ml1.3671.3670.93890.93893 3Sigma G1mg/ml1mg/ml1.2241.2240.885320.885324 4Sigma G 99%1mg/ml1mg/ml1.5081.5081.018621.0186227 稀释液稀释参考品稳定性示意图00.511.522.52512.56.253.131.56卵清蛋白含量（ng/ml）O.D4373天377天28系列参考品理论值(ng/ml)实验室内参考品标示值实验室1(n=8)实验室2(n=8)实验室3(n=8)均值CV(%)均值CV(%)均值CV

7、(%)均值CV(%)1517.60118.02419.10617.96 31011.67612.20712.89212.25656.41116.6757.2956.7982.53.0473.0633.2333.1152930参考品准确度精密度编号标示量测量值回收率%CV%S117.96117.09954S212.251.5112.09993S36.791.146.09902S43.110.312.84915相关系数r20.9971单位：单位：(ng/ml)31参考品准确度精密度编号标示量测量值回收率%CV%S117.96116.99953S212.251.5112.08993S36.791.1

8、46.24925S43.110.312.94953相关系数r20.9967单位：单位：(ng/ml)32准确度精密度参考品标示值测量值回收率%CV%17.96118.36102612.251.5113.1610766.791.146.8310183.110.313.039712相关系数r20.9948单位：单位：(ng/ml)33准确度精密度参考品标示值测量值回收率%CV%17.96117.2396412.251.5112.2810056.791.146.469543.110.312.93946相关系数r20.9957单位：单位：(ng/ml)企业企业201020102011201120122

9、012北京天坛236.0 143.0 21.0 北京科兴42.026.0 24.0 雅立峰17.06.015.0 长春所75.011.0 8.0长春长生150.0 77.0 16.0 上海所11.0 4.02.0浙江天元143.0 24.0 40.0 华兰生物28.0 13.0 10.0 兰州所67.0 80.0/巴斯德37.063.0 61.0 史克10.08.08.0 诺华109.0203.0/苏威259.080.031.0应用效果20102012年流感疫苗卵清含量明显下降！检测结果为ng/ml, 药典标准500ng/ml353637选择毒株选择毒株生产制备生产制备正式标定正式标定稳定性考

10、核稳定性考核预标定预标定不含国际参考品，修订检测方法含国际参考品，按照统一方法38发放调查表（含标定SOP）获得反馈结果修改SOP发送候选参考品和国际参考品候选参考品预标定预标定结果汇总及分析正式标定（候选参考品国际参考品）正式标定结果汇总及分析39稀稀释释1#1#稀稀释释2#2#稀稀释释3#3#稀稀释释4#4#1 1支国际支国际参考品参考品（1ml1ml）NO1NO2NO3NO440参加单位参加单位麻疹麻疹（lgCCID50/ml ）风疹（风疹（lgCCID50/ml ）候选参考品候选参考品国际参考品国际参考品候选参考品候选参考品国际参考品国际参考品北京天坛北京天坛4.860.124.130

11、.144.290.263.910.14兰州所兰州所5.060.124.240.32/上海所上海所4.870.103.940.224.590.143.910.10武汉所武汉所4.880.463.910.12/中检所中检所5.140.224.290.084.810.124.050.26均值均值4.964.10标示滴度标示滴度4.34.563.96标示滴度标示滴度3.9SD0.130.170.260.16u麻疹国际参考品：麻疹国际参考品：NIBSC编号：编号：92/648, 标示滴度标示滴度4.3 lgCCID50/mlu风疹国际参考品：风疹国际参考品：NIBSC编号编号: : 91/688, ,

12、标示滴度标示滴度3.9 lgCCID50/ml每个实验室进行每个实验室进行8次独立检测次独立检测41u风疹疫苗国家参考品风疹疫苗国家参考品: : (2009)国生参字国生参字0032上限上限下限下限下限下限上限上限424344鸡胚(911日龄)流感病毒工作种子批病毒接种鸡胚尿囊腔，培养4872小时病毒收获（尿囊液）单型病毒收获液合并病毒灭活病毒超滤浓缩鉴别，病毒滴度，血凝滴度，无菌，支原体内毒素，血凝滴度病毒灭活验证45优点缺点体内法可以发现潜在的抗原完整性的变化，尤其是当进行攻击试验或测定功能性抗体的情况下1.变异大（试验有效的比例较低）2.试验周期长（数周或数月）3.费用高4.不符合3R原则（replacement, reduction, refinement）体外法1.变异