微生物的实验室培养

1、专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养一、基础知识一、基础知识1、微生物、微生物 一切肉眼看不见或看不清的微小生一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称。如病毒、细菌、真菌、原物的总称。如病毒、细菌、真菌、原生生物等。生生物等。HIV大肠杆菌大肠杆菌酵母菌酵母菌如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉真菌真菌变形虫变形虫草履虫草履虫2 2、培养基、培养基（1 1）培养基的类型）培养基的类型按物理按物理性质分性质分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基按化学按化学组成分组成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基按目的按

2、目的用途分用途分鉴别培养基鉴别培养基选择培养基选择培养基：用于菌种鉴定：用于菌种鉴定：用于菌种分离：用于菌种分离2 2、培养基、培养基（1 1）培养基的类型）培养基的类型按物理按物理性质分性质分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基常用的固体培养基：常用的固体培养基：琼脂琼脂固体培养基固体培养基微生物在固体培养基表面生长，可形微生物在固体培养基表面生长，可形成肉眼可见的成肉眼可见的菌落菌落。其中固体培养基用于其中固体培养基用于菌种保存及分离、鉴菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数定菌落、活菌计数等，液体培养基常用于等，液体培养基常用于发酵工业。发酵工业。用于菌种的分离用于菌种的分离菌落：菌落：

3、单个或少数细菌在固体单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的，会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。细胞群体，叫做菌落。不同的细菌的菌落特征不同不同的细菌的菌落特征不同菌落是鉴定菌种的菌落是鉴定菌种的重要依据重要依据。菌落细菌的菌落特征因种而异 液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔（2 2）按功能分：）按功能分：选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基。（2 2）按功能分类）按功能分类种类种类制备方法制备方法原理原理用途

4、用途举例举例培养培养基基依据某些微生物依据某些微生物对某些物质的抗对某些物质的抗性而设计性而设计加入青霉加入青霉素分离得素分离得到酵母菌到酵母菌和霉菌和霉菌培养培养基基依据微生物产生依据微生物产生的某种代谢产物的某种代谢产物与培养基中的特与培养基中的特定试剂或化学药定试剂或化学药品反应，产生明品反应，产生明显的特征变化而显的特征变化而设计设计伊红伊红美美蓝蓝培养基培养基可以鉴别可以鉴别大肠杆菌大肠杆菌选择选择鉴别鉴别加入某些化加入某些化学物质学物质加入某种加入某种试剂或化试剂或化学药品学药品从众多微从众多微生物中生物中分分离所需离所需的的微生物微生物鉴别鉴别不同不同种类的微种类的微生物生物选择

5、培养基选择培养基:从微生物群中选择具有从微生物群中选择具有特定表型的细胞特定表型的细胞.使之进行繁殖所用使之进行繁殖所用的培养基的培养基,称为称为选择培养基选择培养基. 加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: : 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: : 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : 分离固氮菌分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: : 分离自养型微生物分离自养型微生物 天然培养基有血清、天然培养基有血清、血浆、和组织提取液血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸（

6、如鸡胚和牛胚浸液）。液）。优点：优点：营养成分丰富，营养成分丰富，培养效果好培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限; ;成分成分复杂，影响对某些实复杂，影响对某些实验产物的提取和实验验产物的提取和实验结果的分析结果的分析; ;易发生支易发生支原体污染原体污染; ; 根据细胞生存所需物质根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方的种类和数量，用人工方法模拟合成的。法模拟合成的。 合成培养基主要成分合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一化合物、无机盐和其它一些辅助物质。些辅助物质。 优点：优点：标准化生产，组标准化生产，组分和含量相对固定分和含量相对固

7、定; ;成本低成本低 缺点：缺点： 缺少某些成分，缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生不能完全满足体外细胞生长需要。长需要。 合成培养基合成培养基: :天然培养基天然培养基：（3）按成分分：）按成分分：天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。（2 2）培养基的基本成分）培养基的基本成分水、碳源、氮源、无机盐水、碳源、氮源、无机盐、思考一：从细胞的化学元素组成来看，思考一：从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都会含有这些营养成培养基中为什么都会含有这些营养成分？分？ C C、H H、O O、N N、P P、S S是构成细胞是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量原生质的基本元素，约占

8、原生质总量的的9797以上。以上。碳源碳源：氮源氮源： 二氧化碳、碳酸盐等无机碳源二氧化碳、碳酸盐等无机碳源糖类（主要）、蛋白质、脂肪酸糖类（主要）、蛋白质、脂肪酸等有机碳源等有机碳源氮气、氨气、氨盐、硝酸盐等氮气、氨气、氨盐、硝酸盐等无机氮源无机氮源蛋白胨、牛肉膏等有机氮源蛋白胨、牛肉膏等有机氮源 不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳碳源源、和、和氮源氮源、 无机盐无机盐、等等营养物质，营养物质， 另外还需要满足微生物生长对：另外还需要满足微生物生长对：氧气的氧气的含量含量pHpH、特殊营养物质、特殊营养物质, ,特殊营养物质特殊营养物质即即：例如例如: :生长因子生

9、长因子(即细菌生长必需，而自身即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶) )血清中含有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种金属离子；多种金属离子； 激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。原等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培

10、养基（如血清）。（如血清）。1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分培养基组分提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g蛋白胨蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至定容至1000mL碳源、磷酸盐和维生素碳源、磷酸盐和维生素氮源和维生素氮源和维生素无机盐无机盐氢元素、氧元素氢元素、氧元素2.2.不同的微生物往往需要采用不同的不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方培养基配方 (参考教材附录内容参考教材附录内容)。思考二：思考二： 你有什么方法可以区分某一微生物你有什么方法可以区分某一微生物是自养生物还是异养生物吗？是自养生物还是异养生物吗？思考三：思考三：

11、你有什么方法可以将固氮菌从其他你有什么方法可以将固氮菌从其他微生物中分离出来吗？微生物中分离出来吗？ 培养基的配制原则培养基的配制原则： 目的要明确：目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。目的等确定培养基的类型和配制量。 营养要协调：营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比比例要适宜。例如：碳氮比4 1时，谷氨酸棒状时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3 1时，时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。

12、 pH要适宜要适宜：细菌培养基：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。培养基呈酸性。 细菌细菌pH为为：6.5-7.5； 放线菌放线菌pH为：为：7.5-8.5； 真菌真菌pH为：为：5.0-6.03、无菌技术、无菌技术（1）获得纯净培养物的关键是）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵（2）无菌技术主要包括哪些方面？）无菌技术主要包括哪些方面？（）（）消毒定义：消毒定义：指使用较为指使用较为温和的物理或化学方温和的物理或化学方法法仅杀死物体表面或内部一部分对人仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）（不包括

13、芽孢和孢子）2.2.消毒与灭菌消毒与灭菌 有些细菌在一定的条有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做椭圆形的休眠体，叫做芽芽孢孢。芽孢的壁很厚，对干。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。环境有很强的抵抗力。 例如，有的细菌的芽例如，有的细菌的芽孢，煮沸孢，煮沸3 3小时以后才死小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌形成一个细菌. .（2 2）灭菌的定义

14、：）灭菌的定义：使用使用强烈的理化因素强烈的理化因素杀死物体杀死物体内外内外所有的所有的微生物微生物，包括芽孢，包括芽孢和和孢子孢子，而达到，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。 灭菌消毒技术是微生物有关工灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。作中最普通也是最重要的技术。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min，如牛奶的消毒如牛奶的消毒3 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法: :用用70%70%酒精进行皮酒精进行皮肤消

15、毒肤消毒; ;氯气消毒水源氯气消毒水源石碳酸、煤酚皂溶石碳酸、煤酚皂溶液等液等4 4、紫外线消毒紫外线消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法3、无菌技术、无菌技术（5）灭菌的方法）灭菌的方法a、灼烧灭菌灼烧灭菌：接种环、接种针、试管口接种环、接种针、试管口微生物的接种工具（接种环、接种微生物的接种工具（接种环、接种针）或其他金属用具直接在火焰的针）或其他金属用具直接在火焰的灼烧灼烧3、无菌技术、无菌技术（5）灭菌的方法）灭菌的方法a、灼烧灭菌：、灼烧灭菌：b、干热灭菌：干热灭菌：接种环、接种针、试管口接种环、接种针、试管口160170 ；12h

16、能耐高温的需要保持能耐高温的需要保持干燥的物品干燥的物品（玻璃器皿、金属用具）（玻璃器皿、金属用具）3、无菌技术、无菌技术（5）灭菌的方法）灭菌的方法a、灼烧灭菌：、灼烧灭菌：b、干热灭菌：、干热灭菌：c、高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌：接种环、接种针、试管口接种环、接种针、试管口100kPa 121 15-30min通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。养基的营养成分

17、不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。，而空气中的其他微生物不能通过。 理化因素的作理化因素的作用强度用强度消灭微生物的消灭微生物的数量数量芽孢和孢子芽孢和孢子能否被消灭能否被消灭消毒消毒灭菌灭菌比较消毒和灭菌比较消毒和灭菌温和的物理或温和的

18、物理或化学方法化学方法强烈的理化因素强烈的理化因素杀死物体表面或杀死物体表面或内部一部分内部一部分杀死物体内外所杀死物体内外所有的微生物有的微生物否否是是思考四：思考四： 无菌技术除了用来防止实验室的无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？有什么目的？无菌技术还能有效避免操作者自身被无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。微生物感染。思考五：思考五：请你判断以下材料或用具是否需要消毒请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。法。培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培

19、养基与培养皿灭菌灭菌 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手实验操作者的双手消毒消毒灭菌灭菌 二、二、实验操作实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板思考思考1：为什么牛肉膏要用玻棒挑取，：为什么牛肉膏要用玻棒挑取， 并放在称量纸上称量？并放在称量纸上称量？ 牛肉膏比较黏稠牛肉膏比较黏稠（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板思考思考2：为什么称取牛肉膏时动作要迅：为什么称取牛肉膏时动作要迅 速，称后摇及时盖上瓶盖？速，称后摇及时

20、盖上瓶盖？ 牛肉膏（或蛋白胨）容易吸潮牛肉膏（或蛋白胨）容易吸潮（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板思考思考3：为什么要将称好的牛肉膏连同：为什么要将称好的牛肉膏连同 称量纸一同放入烧杯中加热？称量纸一同放入烧杯中加热？ 可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中，减小误差。能溶于水中，减小误差。（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板思考思考4：加琼脂的目的是什么？：加琼脂的目的是什么？ 作为凝固剂作为凝固剂二、实验操作二、实

21、验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板思考思考5：加入琼脂后，为什么要用玻棒：加入琼脂后，为什么要用玻棒 不断搅拌？不断搅拌？ 防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板思考思考6：在灭菌前，用牛皮纸或旧报纸：在灭菌前，用牛皮纸或旧报纸 包紧盛有培养基的锥形瓶的目包紧盛有培养基的锥形瓶的目 的是什么？的是什么？在灭菌时能避免水蒸气凝结时浸湿棉在灭菌时能避免水蒸气凝结时浸湿棉塞；在取出锥形瓶时，也起到

22、隔绝空塞；在取出锥形瓶时，也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。气中杂菌污染的作用。（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板思考思考7：培养皿能否用高压蒸汽灭菌？：培养皿能否用高压蒸汽灭菌？ 不能，因为培养皿要保持干燥，不能，因为培养皿要保持干燥，应该用干热灭菌。应该用干热灭菌。倒平板倒平板 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？估计培养基的温度？ 答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥

23、形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。的微生物污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结

24、水珠，凝固后答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。这个平板培养微生物。二、实验操作二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌 常用的接

25、种方法：常用的接种方法： 平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法和稀释涂布平板法。1.平板划线法 1. 1.为什么在操作的第一步以及每次划线为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；上可能存在的微生物污染培养物； 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，结束后，接种环上残留的菌

26、种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。渐减少，以便得到菌落。 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2. 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3. 3.在作第

27、二次以及其后的划线操作在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。而来的菌落。2.稀释涂布法稀释涂布法（1）系列稀释操作：）系列稀释操作：移液管移液管电动助吸器电动助吸器/电动移液器电动移液器移液枪枪头移液枪枪头微量移液器微量移液器

28、（2）涂布平板操作）涂布平板操作这个方法可用于细菌的纯化；这个方法可用于细菌的纯化；可选择最后一个稀释度的菌液进行可选择最后一个稀释度的菌液进行涂板。涂板。也可用于样品中活菌的数目；也可用于样品中活菌的数目；选择几个稀释度的菌液进行涂板。选择几个稀释度的菌液进行涂板。稀释涂布平板法（操作）稀释涂布平板法（操作） 涂布平板的所有操作都应在火焰附涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步应如何进行无步应如何进行无菌操作？菌操作？ 应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无无菌菌”。例如

29、，酒精灯与培养皿的距离。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。二、实验操作二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌 常用的接种方法：常用的接种方法： 平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法和稀释涂布平板法。（三）将接种后的培养基和一个未接种（三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入的培养基放入37恒温箱中培养恒温箱中培养12h和和24h后，观察并记录后，观察并记录三、结果分析与评价三、结果分析与评价1.斜面

30、保藏斜面保藏临时保存临时保存菌种的保藏菌种的保藏2.甘油保藏甘油保藏长期保存长期保存斜面保藏四、课题延伸四、课题延伸四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 2 d d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则大小基本一致，并符

31、合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同会有明显不同本课题知识小结本课题知识小结: :练习1.外科手术器械和罐头食品的处理，要外科手术器械和罐头食品的处理，要以能够杀死什么为标准以能够杀死什么为标准A 球

32、菌球菌 B 杆菌杆菌 C 螺旋菌螺旋菌 D 芽孢芽孢D2.某学校打算开辟一块食用菌栽培基某学校打算开辟一块食用菌栽培基地地,以丰富学生的劳动技术课内容以丰富学生的劳动技术课内容,首先首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理对食用菌实验室进行清扫和消毒处理,准备食用菌栽培所需的各种原料和用准备食用菌栽培所需的各种原料和用具具,然后从菌种站购来各种食用菌菌种然后从菌种站购来各种食用菌菌种.请回答以下问题请回答以下问题:对买回来的菌进行扩大培养对买回来的菌进行扩大培养,首先制首先制备试管培养基备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源

33、的主要是其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是琼脂的作用是_，它不提供营，它不提供营养。养。牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏凝固剂凝固剂微生物在生长过程中对各种成分所微生物在生长过程中对各种成分所需量不同需量不同,故制备培养基时各成分要有故制备培养基时各成分要有合适的合适的_,在烧杯加入琼脂后要不在烧杯加入琼脂后要不停地停地_,防止防止_.比例比例搅拌搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂琼脂糊底引起烧杯破裂将配制好的培养基转移到锥形瓶中，将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放加棉塞后

34、包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入入_中灭菌，压力为中灭菌，压力为_，温度为温度为_，时间，时间_，灭，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力菌完毕拔掉电源，待锅内压力 _，将试管取出。，将试管取出。 高压灭菌锅高压灭菌锅100KPa121 15 30min自然降至零后自然降至零后 使用高压蒸汽灭菌锅时注意使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅先向锅内倒入内倒入 _，把锅内水加热煮沸并，把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.适量水适量水从一支试管向另一支试管接种时注从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯意，接种环要在酒精灯_焰灭菌焰灭菌.并且并且待接种环待

35、接种环_后沾取菌种，试管口不后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管将接种的试管放入放入_冰箱中保藏冰箱中保藏.外外冷却冷却43 3、不同的微生物对营养物质的需要各不相同。、不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以下列有关一种以CO2CO2为唯一碳源的自养微生物为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是营养的描述中，不正确的是A.A.氮源物质为该微生物提供必要的氮素氮源物质为该微生物提供必要的氮素B.B.碳源物质也是该微生物的能源物质碳源物质也是该微生物的能源物质C.C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D.D

36、.水是该微生物的营养要素之一水是该微生物的营养要素之一4 4、下列所述环境条件下的微生物，能正常生、下列所述环境条件下的微生物，能正常生长繁殖的是长繁殖的是A.A.在缺乏生长素的无氮培养基中的圆褐固氮菌在缺乏生长素的无氮培养基中的圆褐固氮菌B.B.在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌C. C. 在新配制的植物矿质营养液中的酵母菌在新配制的植物矿质营养液中的酵母菌D.D.在灭菌后的动物细胞培养液中的禽流感病毒在灭菌后的动物细胞培养液中的禽流感病毒5 5、通过选择培养基可以从混杂的微生、通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏物群体中分离出所需的微生

37、物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入放线菌；在培养基中加入10%10%酚可以抑酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中的微生物群体中分别分离出分别分离出（多选（多选 A.A.大肠杆菌大肠杆菌 B.B.霉菌霉菌 C.C.放线菌放线菌 D.D.固氮细菌固氮细菌DBCDBC6 6关微生物营养物质的叙述中，正关微生物营养物质的叙述中，正确的确的A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量D7 7下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要