脑出血患者TNF-α的表达及其临床意义

1、脑出血患者tnf- a的表达及其临床意义摘耍冃的观察脑出血患者tnf-a蛋白的表达悄况，探讨tnf-a蛋白在脑出血患者 屮表达特点与脑岀血时间的关系和意义。方法应用免疫组化方法检测65例脑出血患者岀血 灶周围脑组织tnf-a蛋口的表达。结果65例脑出血灶周边脑组织标本中,tnf-a蛋口阳性 表达率为84. 6%(55/65), 10例正常脑组织中tnf-a蛋白阳性表达率为0(0/10),两者比较有 显著性差(p<0.01)o txf-a蛋白在脑出血后不同时间阳性表达率分别为出血后24h 83. 0%(39/47),出血后24h 88. 9%(16/18),出血组之间比较无差异(p>

2、0. 05)。结论 脑出血急 性期血肿周用纟r织存在tnf-a高表达，且有人量炎性细胞浸润，以屮性粒细胞、淋巴细胞为 主。tnf-a参与了脑出血脑水肿的病理生理过程，从而加重血肿周围脑组织的损害。关键词tnf-a蛋白；脑出血;免疫组化中图分类号r743. 34 文献标识码a 文章编号1673-9701(2010)06-36-02tnf-a expression in intracerebral hemorrhage and its clinica/1 significancc yang yanlilwet maofu2ltu jingwen21. third department of med

3、icine, dongguan municipal humen hospi tai, dongguan 523900, china;2. department of pathology, dongguan municipal humen hospital, dongguan 523900, chinaabstract objective to investigate the expression of tnf-a in intracerebral hemorrhage(thc) and find out its significanee and its correlation with the

4、 time of intracerebral hemorrhage. methods the tnf-a expression was assessed by immunohistochemistry staining. results in 65 cases of intracerebral hemorrhage, the positive expression rate of tnf- a was 84. 6%(55/65) and in 10 cases of normal brain tissue, it was 0 (0/10), significantly higher in in

5、tracerebral hemorrhage than that in normal brain ti ssue (p<0. 01). tnf- a positive expression rates were 82. 98% (39/47) less than 24h after intracerebral hemorrhage nnd 88. 9%(16/18) more than 24h after that, with no significant difference between the tnf-a expression and the time of operation

6、after intracerebral hemorrhage(p>0. 05). 0onclusion the high tnf- a expression appears in the surrounding tissue of cerebral hematoma after acute cerebral hemorrhage with a large number of inflammatory cell infiltration in it, mainly leukocyte and lymphocyte infiltration. tnf-a may be involved in

7、 the pathophysiologic process of brain edema after intracerebral hemorrhage, therefore, aggravating brain damage around hematoma.key words tnf-a ；intracerebral hemorrhage;tmmunohistochemistry脑出血仃ch)是神经内科很常见的疾病，死亡率和致残率较高。目前,脑出血导致脑水肿的 发病机制尚耒完全明了。很多学者认为导致脑水肿的原因与炎性因子密切相关，其中包括肿瘤 坏死因了 (txf-a ) o有研究表明tnf-a

8、在脑损伤示表达升高，其升高程度与脑损伤严重程度 关系密切1。我们采用免疫组织化学技术对65例脑出血患者和10例正常脑组织'p tnf-a 表达的情况进行研究，探讨tnf- a在脑出血灶周的表达特点及意义。1材料与方法1. 1标本来源收集陕西省延安市人民医院和延安大学附属医院2003年1刀2006年12刀期间进行手 术清除血肿的脑出血患者65例，男28例，女37例,年龄2583岁,平均48. 6岁。手术时机: 发病24h内手术者47例,24h后手术者18例，正常脑组织10例取自同期住院进行颅内减压的 患者。所有的病人入院时均行头颅彫像学检査进行证实。1. 2试剂及免疫纽化染色方法鼠抗人t

9、nf-a单克隆抗体、抗体稀释液及试剂盒均购白基因公司。其稀释度为1 : 50。 所有标本均用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋,4 u m连续切片，按二步法进行免疫组化染色， 染色前标本切片进行抗原修复处理，一抗在室温孵育lh,二抗在室温下孵育0. 5h, dab显色，苏 木索复染。用已知阳性的对照片作tnf- 抗体的阳性对照，用pbs缓冲液代替一抗作阴性对 照。1. 3判断标准所有免疫组化片子用奥林帕斯bx50显微镜进行定性和半定量评估。请三个高职称病理医 生在不知道临床信息的悄况下独立的对所冇免疫组化片了进行评佔。阳性判断标准为细胞核 或胞质出现黄色或棕黄色颗粒状，并川阳性片作为对照。每张切

10、片随机选择10个视野,40x 10 高倍显微镜下观察计数。参照文献2:根据染色强度、阳性细胞百分比分别记分:a:染色强度： 不着色为0分，淡黄色为1分,黄色为2分，棕黄色为3分。b:阳性细胞所占百分率:5%为0 分,5%25%为1分,25%50%为2分,50%75%为3分,>75%为4分。根据染色强度与阳性细胞 百分比得分之积分为4级,即为0分，弱阳性(+)为12分，阳性(+)为34分,强阳性(+) 为56分。将axb作为其染色的计数，只有axb >3分才算免疫反应阳性，并按乘积分数将 染色结果分为4个等级：-(02分)、+(35分)、+ +(68分)和+ + +(912分)。1.

11、4统计学方法统计学处理应用spss10. 0软件进行x2检验和fisher确切概率法,p<0. 05为差界有统 计学意义。2结果tnf-a主要表达于胞质屮。出血灶边缘及坏死区表达明显增多。65例脑出血灶周脑组织 tnf-a表达的阳性率为84. 6%(55/65);10例正常脑组织tnf-a蛋白表达全部呈阴性(0/10), 二者比较有显著性差异(p<0. 01);tnf-a在脑出血24h内阳性表达率为83. 0%(39/47),超过 24h阳性表达率为8& 9%(16/18),岀血后不同时间阳性表达率比较，两者比较无差异 (p>0. 05) o 见表 1。3讨论很多细胞

12、都能产生和分泌肿瘤坏死因子,按照其来源的不同,shalaby在1985年将其分为 tnf- a和tnf-p两个类型,tnf- a主要由巨噬细胞激活后分泌。肿瘤坏死因子的产牛经过启 动以及分泌两个阶段3。脑出血后继发的炎症反应在脑缺血损伤屮有重要的地位，炎症反应 在脑出血损伤中的作用受到广泛关注。肿瘤坏死因子(tnf-a )在介导此类炎症反应中有很重 要的作用,xue等4研究表明，脑出血发病后病灶中出现较多中性粒细胞浸润，渗出的中性粒 细胞可以释放多种细胞因子，例如ti-6.tnf-a等,这些细胞因子加重血肿周用神经元细胞损 伤。mayne等实验表明，抑制肿瘤坏死因子(tnf-a )的表达和中性

13、粒细胞的浸润，可以减少 血肿内和周围的神经细胞凋亡。肿瘤坏死因子-a是一种多效性的促炎症因子，在触发炎性反 m和神经元细胞损伤屮处于重要地位。本研究表叽出血急性期血肿周围纟f1织存在tnf-a高 表迟而且有大量炎性细胞浸润，以小性粒细胞和淋巴细胞为主。由此我们认为tnf-a参与了 脑出血脑水肿的病理生理过程，加重了血肿周围的脑组织损害，浸润脑组织的炎细胞产生的炎 症介质通过复杂的反应引起神经元细胞的损伤，其机制口 j能是肿瘤坏死因了直接促进中性粒 细胞向出血灶聚集,释放更多的炎症介质，从而加重脑出血后的脑损伤。参考文献1 castillo j, moro ma, blanco m, et al

14、. the release of tumor necrosis factor-alpha is associated with ischemic tolerance in human strokej. ann neurol, 2003, 54(6) :811 -819.2 liu wh, kaur m, wang g, et al. inverse pcr-based rflp seanning identifies low-level mutation signatures in colon cell and tumorsj. cancer res,2004, 64:2544-2551.3 gong c, hoff jt, keep rf. acute infl am matory reacti on fol lowing experimea ntal intracerebral hemorhage in rat j. brain res,2000,87 (1):57.4 xue m, del bigio mr intracerebral injection of autologous whole blood in rats: time course of inflammation and cel 1 deathj. neurosci lett, 2000, 283(