消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全

1、 第三章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全李文姝 基本概念基本概念 消毒（消毒（disinfection）：杀死物体上或环境中的病原微生物、杀死物体上或环境中的病原微生物、 并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的 方方 法。法。 灭菌（灭菌（sterilization）：杀死：杀死 物体上所有微生物的方法物体上所有微生物的方法(包括芽包括芽 孢孢)。 清洁（清洁（cleaning）：除去尘埃和污秽以减少微生物数量的方法。：除去尘埃和污秽以减少微生物数量的方法。 无菌（无菌（asepsis）：不存在活菌的意思：不存在活菌的意思。 无菌操作无菌操作：防止细菌进入

2、人体或其他物品的操作技术。：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。 防腐（防腐（antisepsis）：体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法。：体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法。消毒灭菌消毒灭菌例：例： 外科手术外科手术 无菌操作无菌操作 内服抗生素内服抗生素 抑菌抑菌 接种环火焰烧灼接种环火焰烧灼无菌无菌 火化火化灭菌灭菌 局部皮肤局部皮肤75%75%酒精擦拭酒精擦拭 消毒消毒 一、消毒灭菌的方法 常用的消毒和灭菌方法可分为 物理和化学两种方法物理和化学两种方法( (一一) ) 物理灭菌法物理灭菌法热力灭菌法热力灭菌法辐射杀菌法辐射杀菌法滤过除菌法滤过除菌法干燥与低温抑菌法干燥与低温抑菌法 热力

3、灭菌热力灭菌 原理原理： 破坏菌体蛋白质与核酸，使其肽破坏菌体蛋白质与核酸，使其肽 链断裂，蛋白质链断裂，蛋白质 变性凝固，核酸变性凝固，核酸 解链崩解解链崩解, 导致细菌死亡。导致细菌死亡。 种类：种类： 常用热力灭菌法常用热力灭菌法种类种类方法方法效果效果用途用途干干热热焚烧焚烧用焚烧炉燃烧用焚烧炉燃烧灭菌灭菌废弃污物、尸体废弃污物、尸体烧灼烧灼火焰烧灼火焰烧灼灭菌灭菌接种环，试管口接种环，试管口干烤干烤红外线红外线干烤箱，热空气干烤箱，热空气160-170C 2h电磁波热效应电磁波热效应灭菌灭菌灭菌灭菌玻璃器皿等耐高温的物玻璃器皿等耐高温的物品品医疗器械医疗器械湿湿热热煮沸法煮沸法100

4、C，5-10分分钟，沸水钟，沸水消毒消毒饮水和食具饮水和食具高压蒸高压蒸气灭菌气灭菌法法高压蒸气灭菌器高压蒸气灭菌器103.4Kpa121.3C15-20分分钟钟灭菌灭菌耐高温耐高温耐湿物耐湿物品品巴氏消巴氏消毒法毒法种类种类效果效果 用途用途湿湿热热巴斯德创用，巴斯德创用，61.1-62.830分钟，分钟，71.7 30秒钟秒钟（常用）（常用） 消毒（消毒（杀死病杀死病原菌，不破坏原菌，不破坏营养成分）营养成分）牛奶，酒类牛奶，酒类方法方法流通蒸气流通蒸气法法100 蒸气蒸气1530分钟分钟消毒（杀死细菌消毒（杀死细菌繁殖体，不杀死繁殖体，不杀死芽胞）芽胞）不耐高温、高压物品不耐高温、高压物

5、品间歇灭菌间歇灭菌法法反复多次流动蒸气反复多次流动蒸气灭菌灭菌不耐高温、高压物品不耐高温、高压物品湿热效力大于干热湿热效力大于干热 原因原因 （1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固变性）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固变性 （2）湿热的穿透力比干热大）湿热的穿透力比干热大 （3）湿热的湿热的蒸汽蒸汽有潜热效应有潜热效应 辐射杀菌法辐射杀菌法 紫外线（紫外线（ ultraviolet ray,UV) : 260nm-266nm（最佳杀菌波长）（最佳杀菌波长） 杀菌原理杀菌原理：使：使DNA上相邻的上相邻的T碱基通过共价键结合成碱基通过共价键结合成 二聚二聚 体，干扰体，干扰DNA复制与转录，导致细菌死亡复制

6、与转录，导致细菌死亡 特点：特点： 穿透力弱穿透力弱 适用范围适用范围：适于空气和物体表面消毒适于空气和物体表面消毒 电离辐射电离辐射 如如 ： -ray， -ray 机理机理: 干扰干扰DNA 合成、破坏细胞膜、酶系统紊乱等合成、破坏细胞膜、酶系统紊乱等 适用物品：不耐热的物品（食品、药品及医疗用品）适用物品：不耐热的物品（食品、药品及医疗用品） 微波（微波（microwave) 机理：热效应机理：热效应 适用物品：非金属物品、食品适用物品：非金属物品、食品 滤过除菌法（滤过除菌法（filtrationfiltration） 机理：用物理机理：用物理阻留阻留的方法将液体或空气中的细菌除去的方

7、法将液体或空气中的细菌除去, , 以达到除菌目的以达到除菌目的 器具：滤菌器（器具：滤菌器（filterfilter） 适用物品：不耐高温物品（适用物品：不耐高温物品（血清、毒素、抗生素）以及血清、毒素、抗生素）以及 空气等的除菌空气等的除菌 干燥与低温抑菌法干燥与低温抑菌法在低温状态下真空抽去水分冷冻真空干燥法：用途：保存菌种用途：保存菌种 （二）化学消毒灭菌法（二）化学消毒灭菌法 消毒剂杀菌机理：消毒剂杀菌机理：1.使菌体蛋白变性和凝固使菌体蛋白变性和凝固 酚、醇、酸硷、醛类，酚、醇、酸硷、醛类， 重金属盐类（高浓度）重金属盐类（高浓度） 2 .干扰细菌的酶系统（酶失活）干扰细菌的酶系统（

8、酶失活） 氧化剂、氧化剂、重金属盐类（低浓度）重金属盐类（低浓度） 3. 损伤细菌细胞膜损伤细菌细胞膜 酚类（低浓度）、表面活性剂酚类（低浓度）、表面活性剂 按杀菌能力又可将消毒剂可分按杀菌能力又可将消毒剂可分消毒剂类型种类杀菌机理范围高效消毒剂高效消毒剂含氯消毒剂次氯酸钠等酶失活和氧化饮用水、地面等过氧化物类过氧化氢等酶活性丧失物品表面和皮肤醛类甲醛、戊二醛蛋白、核酸变性器械环氧乙烷环氧乙烷蛋白、核酸变性医疗器械中效消毒剂中效消毒剂含碘消毒剂含碘消毒剂碘酊、碘伏氧化、沉淀蛋白皮肤、体温计等醇类醇类乙醇或异丙醇蛋白变性皮肤、体温计等低效消毒剂低效消毒剂季铵盐类季铵盐类新洁尔灭表面活性剂地面、皮

9、肤等氯己定氯己定表面活性剂皮肤黏膜等高锰酸钾高锰酸钾高锰酸钾氧化餐具、水果等类别 作用机制 常用种类酚类 蛋白变性，细胞膜损伤 石炭酸醇类 蛋白变性 乙醇（70%-75%）氧化剂 氧化、蛋白沉淀 高锰酸钾、过氧乙酸 碘酒重金属盐 氧化、蛋白酶变性 红汞、硫柳汞表面活性剂改变细胞膜通透性 新洁尔灭染料 干扰氧化、抑制繁殖 龙胆紫烷化剂 菌体蛋白质及核酸烷基化 甲醛、烷氧乙烷常用消毒剂的种类（按化学成分）常用消毒剂的种类（按化学成分）常用消毒剂的应用种类种类使用浓度使用浓度用途用途石炭酸石炭酸3%5%地面、器具表面、皮肤消毒地面、器具表面、皮肤消毒乙醇乙醇70%75%皮肤、体温计消毒皮肤、体温计消

10、毒高锰酸钾高锰酸钾0.1%皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒红汞红汞2%皮肤、粘膜、小创伤消毒皮肤、粘膜、小创伤消毒硫柳汞硫柳汞0.1%皮肤消毒、手术部位消毒皮肤消毒、手术部位消毒过氧乙酸过氧乙酸0.2%0.3% 塑料、玻璃器材消毒塑料、玻璃器材消毒碘酒碘酒2.0%2.5% 皮肤消毒皮肤消毒新洁尔灭新洁尔灭0.41.6%手术洗手、浸泡手术器械手术洗手、浸泡手术器械龙胆紫龙胆紫2%4%浅表创伤消毒浅表创伤消毒生物灭菌法抗生素抗生素Antibiotic细菌素细菌素Bacteriocin 噬菌体噬菌体Bacteriophage 二、消毒灭菌的应用二、消毒灭菌的应用医疗器械物品的消毒

11、灭菌医疗器械物品的消毒灭菌室内空气的消毒灭菌室内空气的消毒灭菌手和皮肤的消毒手和皮肤的消毒黏膜的消毒黏膜的消毒病人排泄物和分泌物的消毒灭菌病人排泄物和分泌物的消毒灭菌病人污染物品的消毒病人污染物品的消毒饮水的消毒饮水的消毒环境的消毒环境的消毒根据消毒或灭菌对象，选择合适的消毒灭菌方法根据消毒或灭菌对象，选择合适的消毒灭菌方法消毒剂消毒剂微生物微生物 环境环境性质性质浓度浓度作用时间作用时间种类种类数量数量有机物有机物温度温度酸硷度酸硷度三、影响消毒灭菌效果的因素三、影响消毒灭菌效果的因素 级别级别处理对象处理对象一级一级对人体、动植物或环境危害较低，对人体、动植物或环境危害较低，不具有不具有对

12、健康成对健康成人、动植物致病的人、动植物致病的致病因子致病因子。二级二级对人体、动植物或环境对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危具有中等危害或具有潜在危险的致病因子险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，成严重危害，具具有有效的预防和治疗措施有有效的预防和治疗措施。三级三级对人体、动植物或环境对人体、动植物或环境具有高度危险性具有高度危险性，主要通过，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有通常有预防治疗措施预防治疗措施。四级四级 对人体、动植物或环境对人体、动植物或环境具有高度危险性具有高度危险性，通过气溶，通过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因胶途径传播或传播途径不明或未知