小鼠免疫组织及免疫细胞的观察

1、小鼠免疫组织及免疫细胞的观察实验原理】免疫器官、组织及细胞是机体免疫系统的重要组成部分。中枢免疫器官包括 胸腺和骨髓，是 T 淋巴细胞及其他各类免疫细胞发生、发育和分化的场所，外 周免疫器官包括脾胀、 淋巴结和粘膜相关淋巴组织是免疫应答的场所。 各类免疫 细胞直接参与免疫系统对抗原类物质的免疫应答， 完善的免疫器官组织结构和正 常的免疫细胞种类和数量是机体免疫功能发挥正常的基本条件。【试剂和器材】 小鼠、棉签、解剖台、平皿、大头针、手术剪子、手术镊子、载玻片、瑞士染液、 细胞筛【操作方法】1. 取一只小鼠，采用颈部脱臼法处死，将小鼠放到解剖台上，沿腹中线剪开皮肤 且不破坏腹膜和胸膜， 剪开腹膜

2、，打开腹腔和胸腔， 观察胸腺所在的位置和形状。2. 分离脾细胞：取出脾胀，去除其周围的脂肪组织，用剪子剪碎脾脏，放入细胞 筛中，用载玻片清研脾胀，滴加生理盐水，使脾细胞分散成细胞悬液。3. 脾细胞染色观察：取少量细胞悬液置于载玻片上，与室温晾干，加瑞士染色液 甲染色1min，甩掉染液，用瑞士染色液乙染色 5min，用自来水冲洗，让染液漂 走，置于光学显微镜下观察染色脾细胞。【结果观察】小鼠脾细胞瑞士染色镜下观察【注意事项】1. 正确抓取小鼠，防止被鼠咬伤。2. 脾脏分离完整，清研轻柔。3. 染色时间不宜过长或过短。.【讨论】脾脏具有多种重要的生理功能，参与并调节血液、免疫、内分泌系统的运转,

3、绝非可有可无；脾脏功能在疾病的不同阶段扮演不同的角色 ，有时甚至完全相反, 即具有双向性、时向性的特点。1. 脾切除术后暴发性感染全脾切除术后 OPSI的发生率约为 1 %2.4 %。虽然OPSI的发生率不是很高,但脾脏切除后，在由肺炎球菌导致的感染 中毒性休克中，50 %患者的病情迅速进展，并最终导致死亡。 脾脏为全身最大 的淋巴器官，血循环相当丰富，且脾脏具有延缓微循环的作用，有利于清除和吞 噬多种抗原，减轻机体感染的发生。同时脾脏拥有大量重要的免疫细胞及免疫因 子，如T细胞、B细胞、K细胞、单核巨噬细胞、自然杀伤细胞、杀伤细胞、 淋巴因子活化杀伤细胞（LAK细胞）、树突状细胞。免疫因子包

4、括 tufstin因子、 备解素即 P 因子、纤维结合蛋白免疫核糖核酸 环磷酸鸟苷内源性细胞毒因子、 调理素和补体等。而脾切除后 ,脾脏所产生的免疫因子及免疫细胞消失 ,血浆中免 疫球蛋白 IgM 、IgG 下降 ,巨噬细胞活性下降 ,补体旁路活性下降及自身抗体活性 增强 , 使免疫系统失衡 ,导致机体易感性增加 ,甚发生 OPSI 。2. 关于 tufstin 是主要由脾脏产生的促吞噬激素 , N ajjar 于 1970 年首先发 现。是 IgG 分子 Fc 段的一种四肽 (T hrLy s -P ro -A rg), 通过激活中性粒细胞发 挥吞噬功能。 需要在白细胞激肽酶及内羧基肽酶的共

5、同作用下释放。 脾切除、 镰状红细胞贫血、特发性血小板减少性紫癜、 A IDS 及一些腹部疾病可使其水 平下降 , 脾移植后可使 tufstin 的水平升高。 虽然已发现其在免疫系统中的重要 作用 , 但具体机制仍不十分明了。 理论上讲上述情况 tufstin 活性减低的原因包 括低丫球蛋白血症、脾脏内中性粒细胞释放减少、白细胞激肽酶活性改变及 tufstin 分子异常。3. 脾脏的抗肿瘤功能 机体发生肿瘤的主要原因为免疫系统监控失调 , 而脾 脏作为人体免疫系统的重要组成部分 , 无疑与肿瘤的发生密切相关。 临床观察发 现 , 脾脏不仅自身很少发生原发恶性肿瘤且少有转移瘤出现 , 这也表明脾脏具有 抗肿瘤的作用。 目前大家较公认的观点为脾脏在肿瘤免疫中具有双向性、 时向性 的特点。表现为在肿瘤早期脾脏具有抗肿瘤作用 , 而在晚期则表现为免疫抑制 , 促进肿瘤生长。其抗肿瘤作用主要表现在 :可增强巨噬细胞的吞噬功能。 可 增强巨噬细胞溶解瘤细胞及其过氧化酶作用。 通过增强 NK 细胞活性发挥 抗肿瘤作用。Chu认为,tufstin的抗肿瘤机制不仅通过增加巨噬细胞的肿瘤 趋向性、吞噬能力和分泌能力 , 更重要的是增加巨噬细胞产生氧自由基超氧阴 离子的