ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项

1、一一. .原理原理根据红细胞上有或无 A抗原或 B 抗原，将血型分为 A型、B型、AB型及()型 4 种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴 定 ABO血型。所谓正定型，是用已知抗一 A和抗一 B 分型血清来测定 红细胞上有无相应的 A抗原或 B 抗原；所谓反定型，是用已知 A细胞 和 B 细胞来测定血清中有无相应的抗一 A或抗一 B。二. 试剂和材料试剂和材料1. 抗一 A(B 型血)、抗一 B(A型血)及抗一 A十 B(0型血)分型血清(制备方法见本节附注)2. 5%A、B 及()型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3. 受检者血清；4. 受检者 5%红细胞盐水悬液，制备方法

2、见本节附注。三. 方法方法1.试管法(1) 取洁净小试管 3 支，分别标明抗一 A、抗一 B和抗一 A十 B,用 滴管分别加抗一 A、抗一 B 和抗一 A十 Bo分型血清各 1 滴于试管底部, 再以滴管分别加入受检者 5%红细胞盐水悬液 1 滴，混和。(2) 另取洁净小试管 3支，分别标明 A、B 和 0 细胞。用滴管分别加 入受检者血清 1滴于试管底部，再分别以滴管加入 A、B和 0型 5%试剂红细胞悬液 1滴，混和。(3) 立即以 lOOOr / min 离心 lmino(4) 将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上

3、，再 以低倍镜检查。(5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于 A、B亚型、类 B或 cisAB的发现。(6)凝集强度判断标准凝集强度判断标准4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞+-镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞MF混合凝集外观(mixedfield)是指镜下可见少数红细胞凝 集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。2.玻片法(1) 取清洁玻片 1 张(或白瓷板 1 块)，用蜡笔划成方格，标明抗 -A、

4、抗-B和抗-A 十 B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B 和抗-A十 B 分型 血清 1 滴于标明的方格内，再各加受检者 2%红细胞悬液 1 滴，混和。(2)另取洁净玻片一张(或白瓷板 1 块)，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、B细胞和()细胞，用滴管各加受检者血清 1 滴，再分别用滴管 滴加 A、B和0 型试剂红细胞悬液 1 滴。(3)将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连 续约15min,以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。如以玻片作试验时, 也可用低倍镜观察结果。四四. .结果判定结果判定ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者血清+试剂红细胞受检者血型抗-A抗-B

5、抗-ABA细胞B 细胞()细胞+A+B+0+AB注；“十”为凝集；“-为不凝集。五五附注及注意事项附注及注意事项1.分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细 菌污染。2试剂红细胞以 3 个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤 1 次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。3试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。4. 操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液， 以便容易核实是否漏加血清。5.按理 IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以 4C 为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰， 一般仍在室温 （20-24C） 内进行试 验， 37可使反应减弱。6. 离心时间

6、不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性 或假阴性结果。7. 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排 列的区别。8. 判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。正反定型结果不一 致的原因六六. .常见有技术性问题或红细胞和血清本身的问题常见有技术性问题或红细胞和血清本身的问题1. 分型血清效价太低、亲和力不强。如抗一 A血清效价不髙,可 将 A亚型误定为 0型，AB 型误定为 B型。2. 红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显, 误判为阴性反应。3. 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血 病或恶性肿瘤：以及类 B或 cisAB 等。4.

7、受检者血清中蛋白紊乱（髙球蛋白血症），或实验时温度过高， 常引起红细胞呈缗钱状排列。5. 受检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗一 B 抗体， 如丙种球蛋白 缺乏症。6. 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可 溶性血型物质中和了相应的抗体.7.由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不 符的原因。8. 血清中有意外抗体，如自身抗-1,常引起干扰。9. 老年人血清中抗体水平大幅度下降正反定型结果不一致的解决 办法如发现 ABO正反定型结果不一致，先要重复作试验 1 次。严格执 行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就 可解决明显的问题，对一些疑难问题

8、月必须进一步研究。检查步骤1.另从受检者采取 1份新鲜血液标本这样可以纠正因污染或搞错 样本造成的不符合。2将红细胞洗涤数次，配成 5%盐水细胞悬液，用抗一 A、抗一 B、抗一A1,抗一 A十 B 及抗 H做试验可以得到其它有用的信息。3. 对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细 胞已被抗体致敏。4. 用 A1、Az、B、0红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑 是抗一 I,用 0 型（或 ABO相合的）脐血红细胞检查。5. 如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和 4 工 放置30n）in,用显微镜检查核实。6. 如疑为 A抗原或 B 抗原减弱， 则可将受检红细

9、胞与抗一 A或抗 -B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作 A、B、H血型物质测定。 后者只对80%HAB分泌型的人有用。7. 如试验结果红细胞呈绢钱状排列，加等渗盐水 1 滴，混和，往 往可使绢钱现象消失。应注意不应先加盐水 1滴于受检者血清中而后 和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。8. 如受检者为 A型血而疑为有类 B 抗原时，可用下列方法进行鉴 别：(1) 观察细胞与抗一 A及抗一 B 的凝集强度，与抗一 A的反应要比与 抗一 B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗一 B 不凝集自 身红细胞上的类 B抗原。(3) 检查唾液中是否有 A、B物质，如果是分泌型，可检出 A物质而 无 B物质。(4) 核对患者的诊断，类 B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴 性杆菌感染有关。9. 如发现多凝集现象，