花药与花粉培养ppt课件

1、第第 五五 章章花药与花粉培育花药与花粉培育第一节第一节 花药与花粉培育的概念及意义花药与花粉培育的概念及意义一、花药与花粉培育的概念一、花药与花粉培育的概念 花药是植物花的雄性器官，包括二倍性的药壁和花药是植物花的雄性器官，包括二倍性的药壁和药隔组织以及单倍性的雄性性细胞药隔组织以及单倍性的雄性性细胞花粉粒。花粉粒。一花药培育：一花药培育： 是把整个花药接种到培育基上，在离是把整个花药接种到培育基上，在离体培育条件下，分裂、分化，最终发育成完好植株的过程。体培育条件下，分裂、分化，最终发育成完好植株的过程。花药培育的外植体是植物雄性生殖器官的一部分。花药培育的外植体是植物雄性生殖器官的一部分

2、。二花粉培育：二花粉培育： 是把花粉是把花粉( (小孢子小孢子) )从花药中分别出米，接种从花药中分别出米，接种到培育基上，在离体培育条件下，诱导构成单倍体的孢子体的到培育基上，在离体培育条件下，诱导构成单倍体的孢子体的过程。花粉培育是将花粉从花药中游离出来，成为分散或游离过程。花粉培育是将花粉从花药中游离出来，成为分散或游离态进展培育。态进展培育。二、花药和花粉培育的意义二、花药和花粉培育的意义 作物单倍体只具有单套染色体组，本身没有或很少有育作物单倍体只具有单套染色体组，本身没有或很少有育种价值，但经染色体加倍成为双倍体后，与常规育种有机结合，种价值，但经染色体加倍成为双倍体后，与常规育种

3、有机结合，就会显示出宏大的优势。而作物单倍体尤其是双单倍体与分子就会显示出宏大的优势。而作物单倍体尤其是双单倍体与分子生物学、基因工程的亲密结合，可使作物育种发生革命性的变生物学、基因工程的亲密结合，可使作物育种发生革命性的变化。化。 ( (一一) ) 作物育种能迅速获得纯合体作物育种能迅速获得纯合体 ( (二二) )物种进化研讨物种进化研讨 三体细胞交融三体细胞交融 ( (四四) )遗传分析遗传分析 ( (五五) )分子生物学研讨分子生物学研讨 ( (六六) )植物基因克隆挑选植物基因克隆挑选第二节第二节 离体条件下的小孢子发育离体条件下的小孢子发育一、离体小孢子发育途径一、离体小孢子发育途

4、径在自然条件下被子植物雄配子的构成过程是：在自然条件下被子植物雄配子的构成过程是： 孢原组织孢原组织 花粉母细胞花粉母细胞(减数分裂减数分裂) )四分孢子四分孢子单单核花粉粒核花粉粒(有丝分裂有丝分裂) )二核花粉粒二核花粉粒(1(1个营养核和个营养核和1 1个生殖个生殖核核) ) 生殖核再经过一次有丝分裂构成生殖核再经过一次有丝分裂构成3 3核的成熟花粉粒核的成熟花粉粒(1(1个营养核和个营养核和2 2个生殖核个生殖核) )或称雄配子体或称雄配子体 在离体培育条件下，由于改动了花粉原来的生活环境，在离体培育条件下，由于改动了花粉原来的生活环境，花粉的正常发育途径遭到抑制，由第一次分裂构成的花

5、粉不花粉的正常发育途径遭到抑制，由第一次分裂构成的花粉不再像正常发育过程中那样由生殖核再分裂一次构成再像正常发育过程中那样由生殖核再分裂一次构成2 2个精子核，个精子核，而是像胚细胞一样继续分裂增殖。根据对多种植物花药或花而是像胚细胞一样继续分裂增殖。根据对多种植物花药或花粉培育的察看，发现小孢子的发育途径主要有对称发育途径粉培育的察看，发现小孢子的发育途径主要有对称发育途径和不对称发育途径和不对称发育途径2 2类。类。 ( (一一) )对称发育途径对称发育途径 小孢子第一次有丝分裂为均等分裂，构成两个一样的核，并小孢子第一次有丝分裂为均等分裂，构成两个一样的核，并接着发生细胞壁经小孢子分割成

6、两个大小类似的细胞。这两个接着发生细胞壁经小孢子分割成两个大小类似的细胞。这两个细胞倘假设在以后的几次分裂中是同步的，那么大多数以胚状细胞倘假设在以后的几次分裂中是同步的，那么大多数以胚状体的方式构成花粉胚；倘假设这两个细胞再次分裂不同步，其体的方式构成花粉胚；倘假设这两个细胞再次分裂不同步，其中一个停顿分裂，另一个经过相当长时间的继续分裂，那么构中一个停顿分裂，另一个经过相当长时间的继续分裂，那么构成愈伤组织；再倘假设这两个细胞在进展多次核分裂的同时，成愈伤组织；再倘假设这两个细胞在进展多次核分裂的同时，发生核交融，其结果产生多倍体植株发生核交融，其结果产生多倍体植株 。( (二二) )不对

7、称发育途径不对称发育途径 同自然情况一样，小孢子第一次有丝分裂为不均等分裂，同自然情况一样，小孢子第一次有丝分裂为不均等分裂，在花粉内构成一个较大的营养核和一个较小的生殖核。根据在花粉内构成一个较大的营养核和一个较小的生殖核。根据两个核进一步发育情况，该途径又分为生殖细胞发育途径、两个核进一步发育情况，该途径又分为生殖细胞发育途径、营养细胞发育途径、营养细胞和生殖细胞并发发育途径营养细胞发育途径、营养细胞和生殖细胞并发发育途径3 3种：种：1 1、生殖细胞发育途径、生殖细胞发育途径 营养细胞经几次分裂后便停顿分裂，由生殖细胞继续分裂，营养细胞经几次分裂后便停顿分裂，由生殖细胞继续分裂，构成多细

8、胞的构成多细胞的( (或称多核或称多核) )花粉，进一步发育构成愈伤组织或胚状体花粉，进一步发育构成愈伤组织或胚状体2 2、营养细胞发育途径。、营养细胞发育途径。 生殖细胞经几次分裂后便停顿分裂，由营养细胞继续分裂，生殖细胞经几次分裂后便停顿分裂，由营养细胞继续分裂，构成多细胞的构成多细胞的( (或称多核或称多核) )花粉，进一步发育构成愈伤组织或胚状体花粉，进一步发育构成愈伤组织或胚状体3 3、营养细胞和生殖细胞并发发育途径。、营养细胞和生殖细胞并发发育途径。 营养细胞和生殖细胞分别进展分裂，构成多细胞的营养细胞和生殖细胞分别进展分裂，构成多细胞的( (或称多或称多核核) )花粉，进一步发育

9、构成愈伤组织或胚状体。花粉，进一步发育构成愈伤组织或胚状体。小孢子正常发育途径与离体培育条件下胚胎发育途径比较小孢子正常发育途径与离体培育条件下胚胎发育途径比较 A:A:第一次有丝分裂为非均等分裂，构成一个营养核、一个生殖核第一次有丝分裂为非均等分裂，构成一个营养核、一个生殖核 A-v: A-v:营养核反复营养核反复分裂而生殖核败育分裂而生殖核败育 A-G: A-G:生殖核反复分裂而营养核败育生殖核反复分裂而营养核败育 A-VG: A-VG:生殖核和营养核生殖核和营养核共同分裂共同分裂 C: C:营养核、生殖核分别或同时进展核内复制，有丝分裂后核交融分别构营养核、生殖核分别或同时进展核内复制，

10、有丝分裂后核交融分别构成二倍体、三倍体、四倍体胚成二倍体、三倍体、四倍体胚 B: B:第一次有丝分裂为均等分裂，构成两个类似的营第一次有丝分裂为均等分裂，构成两个类似的营养型核，进而反复分裂构成单倍体胚或先核交融然后反复分裂构成多倍体胚养型核，进而反复分裂构成单倍体胚或先核交融然后反复分裂构成多倍体胚 D: D:自自然条件下小孢子的第二次分裂、淀粉粒及萌生构成的花粉管即正常发育途径然条件下小孢子的第二次分裂、淀粉粒及萌生构成的花粉管即正常发育途径 二、影响离体小孢子发育的要素二、影响离体小孢子发育的要素 影响离体小孢子发育的要素主要有供体植株的基因型、供体影响离体小孢子发育的要素主要有供体植株

11、的基因型、供体植株的生长条件和生理形状、供体植株的年龄、小孢子发育时期、植株的生长条件和生理形状、供体植株的年龄、小孢子发育时期、培育基成分和培育条件等。培育基成分和培育条件等。一供体植株的基因型一供体植株的基因型 供体植株的基因型是影响花药和花粉培育的最重要的要素之供体植株的基因型是影响花药和花粉培育的最重要的要素之一。普通来说裸子植物比较困难，而被子植物相对比较容易；同一一。普通来说裸子植物比较困难，而被子植物相对比较容易；同一物种不同种类间，甚至同一种类的不同株系间，花药和花粉培育的物种不同种类间，甚至同一种类的不同株系间，花药和花粉培育的难易程度也大不一样。难易程度也大不一样。二生理形

12、状二生理形状 供体植株的年龄及其所处的生长条件也能影响花药对离供体植株的年龄及其所处的生长条件也能影响花药对离体培育的反响。普通来说，幼年植株的花药反响才干较好。在体培育的反响。普通来说，幼年植株的花药反响才干较好。在开花末季采集的花药不但构成孢子体的频率很低，而且发生反开花末季采集的花药不但构成孢子体的频率很低，而且发生反响的时间也较迟。在水稻和小麦等禾谷类植物中，大田植株比响的时间也较迟。在水稻和小麦等禾谷类植物中，大田植株比温室植株、主茎穗比分蘖穗花粉愈伤组织的诱导率高。温室植株、主茎穗比分蘖穗花粉愈伤组织的诱导率高。三培育基成分三培育基成分 花药和花粉培育所用的根底培育基以花药和花粉培

13、育所用的根底培育基以MSMS最为普遍，其次是最为普遍，其次是B5B5和和N6N6培育基，其中培育基，其中N6N6培育基特别适宜水稻的花药培育。培育基特别适宜水稻的花药培育。 不同植物种类及种类间所需的培育基成分存在很大差别。有不同植物种类及种类间所需的培育基成分存在很大差别。有些植物只需很简单的培育基，例如烟草的花药培育，即使在仅含些植物只需很简单的培育基，例如烟草的花药培育，即使在仅含有蔗糖和螯合铁的溶液中，也可诱导部分花粉启动、构成少量的有蔗糖和螯合铁的溶液中，也可诱导部分花粉启动、构成少量的胚状体。而对于大多数植物来说，那么需求较为复杂的培育基成胚状体。而对于大多数植物来说，那么需求较为

14、复杂的培育基成分。分。四药壁因子四药壁因子 大量的证听阐明，在花粉胚发育过程中花药壁起着重要的作大量的证听阐明，在花粉胚发育过程中花药壁起着重要的作用。用。 ( (五五) )花粉发育时期花粉发育时期 在花药和花粉培育过程中，小孢子所处的发育时期是影响在花药和花粉培育过程中，小孢子所处的发育时期是影响培育效果的重要要素。只需处于一定发育阶段的小孢子，才干对培育效果的重要要素。只需处于一定发育阶段的小孢子，才干对外界刺激较为敏感，从而改动其发育途径，由配子体转向孢子体外界刺激较为敏感，从而改动其发育途径，由配子体转向孢子体方向，从而产生愈伤组织或胚状体。方向，从而产生愈伤组织或胚状体。发育时期发育

15、时期物种物种四分孢子期四分孢子期葡萄等葡萄等单核早中期单核早中期油莱、大麦、天仙子、马铃薯等油莱、大麦、天仙子、马铃薯等单核晚期单核晚期荔枝、茄子、青椒、小麦、大白菜等荔枝、茄子、青椒、小麦、大白菜等单核中期到双核期单核中期到双核期水稻、烟草、甘蓝、南洋金花等水稻、烟草、甘蓝、南洋金花等四分孢子一双核早期四分孢子一双核早期玉米等玉米等 不同植物花药或花粉培育的取材时期 ( (六六) )预处置预处置 对花蕾或花药进展预处置，能有效地促进花粉愈伤组织对花蕾或花药进展预处置，能有效地促进花粉愈伤组织或胚状体构成，提高培育的胜利率。常用的预处置措施主要是或胚状体构成，提高培育的胜利率。常用的预处置措施

16、主要是低温处置和热激处置。低温预处置是指在培育之前，将资料置低温处置和热激处置。低温预处置是指在培育之前，将资料置低温条件下低温条件下(0(014)14)处置一段时间再进展接种。热激处置那么处置一段时间再进展接种。热激处置那么是指将接种后的花药或花粉置于高温条件下是指将接种后的花药或花粉置于高温条件下(30(3035)35)培育一培育一段时间，然后再移至正常温度下继续培育。段时间，然后再移至正常温度下继续培育。 ( (七七) )培育条件培育条件 1 1、温度、温度 对任何培育，细胞生长的最适温度都因物种而异。花药和花粉培对任何培育，细胞生长的最适温度都因物种而异。花药和花粉培育的温度普通以育的

17、温度普通以2525为宜，但也有些植物对温度有特殊的要求。为宜，但也有些植物对温度有特殊的要求。2 2、光照、光照诱导愈伤组织普通不需求光照，但光照有助于器官的分化。虽然诱导愈伤组织普通不需求光照，但光照有助于器官的分化。虽然在某些植物中，无论有无光照都能构成花粉植株，但在光照下植在某些植物中，无论有无光照都能构成花粉植株，但在光照下植株的构成频率较高，生长也更强壮。株的构成频率较高，生长也更强壮。3 3、植板密度、植板密度 花粉培育中，接种的花粉密度和分化培育时愈伤组花粉培育中，接种的花粉密度和分化培育时愈伤组织或细胞团植板密度对植株生根有很大影响。织或细胞团植板密度对植株生根有很大影响。第三

18、节第三节 花药与花粉培育的技术花药与花粉培育的技术一、花药培育的方法一、花药培育的方法 花药培育是指在离体条件下，对完好花药进花药培育是指在离体条件下，对完好花药进展培育的技术。从组织器官角度来说，它属于器官展培育的技术。从组织器官角度来说，它属于器官培育的范畴。花药培育的方法大致可分为以下几个培育的范畴。花药培育的方法大致可分为以下几个步骤：步骤：( (一一) ) 取材取材 是花药或花粉培育胜利的根底。大量的实验阐明，培育内含是花药或花粉培育胜利的根底。大量的实验阐明，培育内含减数分裂期至双核期花粉的花药，均有能够诱导构成单倍体植株，减数分裂期至双核期花粉的花药，均有能够诱导构成单倍体植株，

19、但最正确时期那么依物种类或种类不同而异，大多数为单核中、但最正确时期那么依物种类或种类不同而异，大多数为单核中、晚期。接种前，通常先用醋酸洋红染色压片法镜检，以确定花粉晚期。接种前，通常先用醋酸洋红染色压片法镜检，以确定花粉的发育时期，并找出花粉发育时期与花蕾大小等表观特征的相互的发育时期，并找出花粉发育时期与花蕾大小等表观特征的相互关系。然后取适宜时期的花蕾作为接种资料。关系。然后取适宜时期的花蕾作为接种资料。二预处置二预处置 适当的预处置可以显著提高花药的愈伤组织诱导率。适当的预处置可以显著提高花药的愈伤组织诱导率。常用的预处置方法是低温冷藏，详细的处置温度和时间长度常用的预处置方法是低温

20、冷藏，详细的处置温度和时间长度因物种而异：因物种而异：烟草烟草7 799，7 714 14 天；天； 水稻水稻7 71010，101015 15 天；天；黑麦黑麦1 133，7 714 14 天；天； 大麦大麦3-73-7，7 71414天。天。 但低温预处置对小麦效果不稳定，有时还有负效果。但低温预处置对小麦效果不稳定，有时还有负效果。( (三三) ) 资料灭菌资料灭菌 在无菌条件下，先将花蕾用在无菌条件下，先将花蕾用70%70%酒精浸泡酒精浸泡3030秒左右，秒左右，再用再用0.1%0.1%氯化汞外表消毒氯化汞外表消毒8 81010分钟，或用分钟，或用1%1%的次氯酸钠消的次氯酸钠消毒毒1

21、0101515分钟，然后用无菌水冲洗分钟，然后用无菌水冲洗3 35 5次。次。( (四四) ) 接种培育接种培育 无菌条件下将花药从花蕾中取出，直接接种到诱导培育基无菌条件下将花药从花蕾中取出，直接接种到诱导培育基上。取花药时，应留意尽量防止损伤花药，以免从受伤处产生药上。取花药时，应留意尽量防止损伤花药，以免从受伤处产生药壁愈伤组织；另外还要留意彻底去除花丝部分，由于接种与花丝壁愈伤组织；另外还要留意彻底去除花丝部分，由于接种与花丝相连的花药时，往往不利于花药内小孢子的启动，以及愈伤组织相连的花药时，往往不利于花药内小孢子的启动，以及愈伤组织或胚状体的构成。花药培育的方式有固体培育和液体培育

22、或胚状体的构成。花药培育的方式有固体培育和液体培育2 2种。种。 花药培育普通是先暗培育，待愈伤组织构成后，再转入光花药培育普通是先暗培育，待愈伤组织构成后，再转入光照条件下培育，促进器官分化。光照时间和培育温度因培育资料照条件下培育，促进器官分化。光照时间和培育温度因培育资料而异。而异。五壮苗和移栽五壮苗和移栽 花药植株非常柔嫩很难移栽，需采用逐渐过渡的方式，花药植株非常柔嫩很难移栽，需采用逐渐过渡的方式，使其适用从异养到自养，因此，要经过壮苗阶段。移栽的关使其适用从异养到自养，因此，要经过壮苗阶段。移栽的关键是坚持高空气湿度键是坚持高空气湿度80%80%90%90%1 12 2周和低土壤湿

23、度。周和低土壤湿度。选幼年树花蕾选幼年树花蕾取下花蕾取下花蕾3-5度低温冷处度低温冷处置置3-10天天取花药镜检取花药镜检消毒接种培育消毒接种培育再生再生单核期，或单核中晚期单核期，或单核中晚期花药培育流程花药培育流程二、花粉培育的方法二、花粉培育的方法 花粉培育小孢子培育，即未成熟花粉的培育，是指在花粉培育小孢子培育，即未成熟花粉的培育，是指在离体条件下，对游离的小孢子进展培育的技术。与花药培育相比，离体条件下，对游离的小孢子进展培育的技术。与花药培育相比，操作较为复杂，从组织器官角度来说，花粉培育属于细胞培育的操作较为复杂，从组织器官角度来说，花粉培育属于细胞培育的范畴。范畴。 花粉培育的

24、全过程除了资料的选择、灭菌与花药培育根本花粉培育的全过程除了资料的选择、灭菌与花药培育根本一样外，还包括小孢子的分别、纯化和培育一样外，还包括小孢子的分别、纯化和培育3个步骤。个步骤。( (一一) ) 小孢子的分别小孢子的分别 小孢子的分别有自然散落法、挤压法和机械法等小孢子的分别有自然散落法、挤压法和机械法等3 3种：种：1.1.自然散落法。自然散落法。 花药消毒后，无菌条件下取出花药，接种在液体培育花药消毒后，无菌条件下取出花药，接种在液体培育基中，当花药自然开裂、释放出花粉后，去除花药壁，继续基中，当花药自然开裂、释放出花粉后，去除花药壁，继续培育或离心搜集花粉后培育。培育或离心搜集花粉

25、后培育。2.2.挤压法。挤压法。 花药消毒后，置无菌培育皿或小烧杯中，参与少量花药消毒后，置无菌培育皿或小烧杯中，参与少量小孢子提取液或培育液，用平头大玻棒或注射器内管悄然挤小孢子提取液或培育液，用平头大玻棒或注射器内管悄然挤压，使花粉释放出来，此法简便易行，是少量分别小孢子常压，使花粉释放出来，此法简便易行，是少量分别小孢子常用的方法，但不适宜大规模游离小孢子的操作。用的方法，但不适宜大规模游离小孢子的操作。3.3.机械游离法。机械游离法。 有磁搅拌和小型搅拌有磁搅拌和小型搅拌2 2种，前者将花粉置于装有小孢种，前者将花粉置于装有小孢子提取液或培育液的三角瓶中，放入一根磁棒，至磁力搅拌子提取

26、液或培育液的三角瓶中，放入一根磁棒，至磁力搅拌器上，低速旋转使花粉释放出来。该法分别花粉比较彻底，器上，低速旋转使花粉释放出来。该法分别花粉比较彻底，但对花粉有不同程度的机械损伤。后者将花药放入小型搅拌但对花粉有不同程度的机械损伤。后者将花药放入小型搅拌器中，参与适量的小孢子提取液或培育液。经过高速运转，器中，参与适量的小孢子提取液或培育液。经过高速运转，带动花蕾花药高速运动而破碎，使小孢子游离出来。带动花蕾花药高速运动而破碎，使小孢子游离出来。( (二二) ) 小孢子的纯化小孢子的纯化 小孢子分别出来以后，需求经过纯化才干获得纯真的小孢子分别出来以后，需求经过纯化才干获得纯真的小孢子。纯化的

27、普通方法是将分别出的小孢子用一定孔径的尼小孢子。纯化的普通方法是将分别出的小孢子用一定孔径的尼龙网膜过滤到离心管里，于龙网膜过滤到离心管里，于500-1000r/500-1000r/分钟下离心分钟下离心2-32-3分钟，去分钟，去掉上清液；再参与小孢子清洗液，重新悬浮小孢子，离心掉上清液；再参与小孢子清洗液，重新悬浮小孢子，离心1-21-2分分钟，反复清洗钟，反复清洗2-32-3次，最后倒出上清液，向离心管中参与液体培次，最后倒出上清液，向离心管中参与液体培育基，用血球计数板计数，将小孢子调整到一定密度，进展分育基，用血球计数板计数，将小孢子调整到一定密度，进展分装、培育。装、培育。( (三三

28、) ) 小孢子的培育小孢子的培育 小孢子培育主要有浅层培育、平板培育、双层培育、看小孢子培育主要有浅层培育、平板培育、双层培育、看护培育、悬滴培育、条件培育等方法。护培育、悬滴培育、条件培育等方法。 其中，浅层培育和平板其中，浅层培育和平板培育培育2 2种方法较为常用。现简要引见双层培育和悬滴培育。种方法较为常用。现简要引见双层培育和悬滴培育。选幼年树花蕾选幼年树花蕾取下花蕾镜检取下花蕾镜检预培育数天预培育数天取花药取花药接种接种分别分别花粉花粉v药壁向花粉提供营养物质；药壁向花粉提供营养物质；v经过药壁吸收、储存和转化培经过药壁吸收、储存和转化培育基中的外源物质育基中的外源物质低温预处置低温

29、预处置消毒消毒过滤离心过滤离心再生再生花粉培育流程花粉培育流程 小孢子培育的优越性小孢子培育的优越性排除了药壁、药隔、花丝等体细胞组织的干扰，获得的再生植排除了药壁、药隔、花丝等体细胞组织的干扰，获得的再生植株都是来源于单倍体的小孢子株都是来源于单倍体的小孢子( (花粉花粉) )；花药培育中，有时会因花药中的某些物质而影响小孢子的启动花药培育中，有时会因花药中的某些物质而影响小孢子的启动分裂，而小孢子培育那么不存在这种问题；分裂，而小孢子培育那么不存在这种问题；小孢子培育中，由于小孢子是游离的单倍体细胞，除不受等位小孢子培育中，由于小孢子是游离的单倍体细胞，除不受等位基因影响外，能均匀地接触外

30、部环境条件基因影响外，能均匀地接触外部环境条件( (如化学、物理诱变如化学、物理诱变) )，因此是研讨转化和诱变的理想资料；因此是研讨转化和诱变的理想资料；便于系统察看小孢子在离体条件下的生长发育过程，是研讨发便于系统察看小孢子在离体条件下的生长发育过程，是研讨发育极好的资料体系：育极好的资料体系：小孢子培育从每个花药中能获得更多的再生植株。小孢子培育从每个花药中能获得更多的再生植株。三、三、 单倍体植株鉴定及染色体加倍单倍体植株鉴定及染色体加倍一单倍体植株鉴定方法一单倍体植株鉴定方法1 1染色体直接计数法：染色体直接计数法： 经过植株的根尖或茎尖等细胞分裂旺盛处的细胞染色经过植株的根尖或茎尖

31、等细胞分裂旺盛处的细胞染色体直接计数是最有效的方法。体直接计数是最有效的方法。2 2 细胞形状学鉴定法细胞形状学鉴定法 叶片捍卫细胞的大小、单位面积上的气孔数及捍卫叶片捍卫细胞的大小、单位面积上的气孔数及捍卫细胞中叶绿体的大小和数目与倍性具有高度的相关性。细胞中叶绿体的大小和数目与倍性具有高度的相关性。 3 3植株形状学鉴定法植株形状学鉴定法 不同倍性的植株在形状上有比较明显的差别，主要表不同倍性的植株在形状上有比较明显的差别，主要表如今子叶、真叶、花等的外形、大小和颜色，开花结实性，如今子叶、真叶、花等的外形、大小和颜色，开花结实性，花粉着色才干及大小，果实外形及种子的形状等。花粉着色才干及

32、大小，果实外形及种子的形状等。4 4流式细胞仪鉴定流式细胞仪鉴定 流式细胞仪可迅速测定叶片单个细胞的流式细胞仪可迅速测定叶片单个细胞的DNADNA含量，进而含量，进而根据根据DNADNA含量曲线图推断细胞的倍性。含量曲线图推断细胞的倍性。5 5生化或分子标志鉴定法生化或分子标志鉴定法 1 1 生化标志鉴定。生化标志鉴定。 主要是用同工酶对再生植株来源和倍性鉴定。主要是用同工酶对再生植株来源和倍性鉴定。2 2分子标志鉴定。分子标志鉴定。 可用来鉴定再生植株可用来鉴定再生植株 来源和倍性。近年来，随着分来源和倍性。近年来，随着分子生物学技术的开展，不断涌现的各种分子标志技子生物学技术的开展，不断涌现的各种分子标志技 术术( (如如RFLPRFLP、RAPDRAPD、AFLPAFLP、SSRSSR等等) )作为遗传育种的重要手段得到了作为遗传育种的重要手段得到了广泛运用。广泛运用。6 6杂交鉴定法杂交鉴定法 分为自交鉴定和测交鉴定。前者适用于自花授粉植物，自分为自交鉴定和测交鉴定。前者适用于自花授粉植物，自交后代群体分别那么该二倍体为杂合二倍体，否那么为纯合二倍体。交后代群体分别那么该二倍体为杂合二倍体，否那么为纯合二倍体。有时也利用四倍体自交结实率较低的特性鉴定四倍体植株。测交鉴有时也利用四倍体自交结实率较低