(完整版)厦门大学遗传与分子生物学实验课程试卷

1、 厦门大学遗传与分子生物学实验课程试卷生命科学学院生物学系 2002 年级 各 专业主考教师： 章 军试卷类型：（a 卷/b 卷）一、填空题（每题 2 分，共 50 分）1. 果蝇具有丰富的外表型态差异，包括_、_、_，_与_。2. fish 技术的全称是_。3. 细菌转导实验中所用的菌株分别是：_和_ ,用的培养基是_培养基。4. 转座子引起的插入突变实验中所用的菌株分别是：_ 和_。5. 在 提 基 因 组 dna 时 ， 为 保 证 dna 的 完 整 性 应 该 采 取 的 步 骤有，。6. dna 凝胶电泳可以以和为凝胶介质，当 dna 为bp 时， 用 作为介质。抽提，采用 体积；

2、沉淀 dna 用bp 时,用作为介质，当 dna 为7. 抽提 dna 纯化时，一般采用体积 ；洗涤沉淀时用，。8. dna 纯度一般用比值来衡量，当比值在表示 dna 很纯，当表示不干净，当表示含过多。9. 衡量 dna 得率或浓度时应该用10. 进行电泳加样时，要将 dna 样品与值来进行计算，公式表示为混合，其主要成分为。，如要加样10ldna 要加l 混合。11. 在提取 dna 时，酚氯仿的作用是，其比例应为，可选择使用酚，在使用酚时应注瓶子来装。氯仿异戊醇意，酚的饱和是用，一般用的酚需要 酚，要用12. 酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞 dna 时，具有两方面的作用：(1)(2)13.

3、 提质粒 dna 时，加入 ste 的作用是。；加入溶液的作用是，现，象；加入溶液作用，现象，成分主要为，现象提供环境；加入溶液作用是，成分主要是，目的是。14. 质粒 dna 有以下状态、，进行电泳时，最后为色枪头， l 用跑的最快在最前面，其次为、。15. 实验过程中常用的枪头有以下几种：l 用色枪头，l 用_色枪头。处理，转化细菌时需要进行16. 转化时用的感受态细菌需要用秒，目的是， 时间为。17. 胶回收 dna 时需注意，应尽量将足够小彻底， 其中加入与，质量比应为，。洗涤液中含有，洗脱液可以用代替。18. 酶切 dna 时，如 dna 不纯可通过，进行克服。，连接反应时体系常19

4、. 连接反应时，外源 dna 与质粒 dna 的摩尔比例应为用。20. 在 酶 切 反 应 管 加 完 各 种 反 应 物 后 ， 需 要 离 心 2 秒 钟 ， 其 目 的 是_和_。21. 用乙醇沉淀 dna 时，通常要在 dna 溶液中加入单价的阳离子，如 nacl 和 naac，其目的是。22. pcr 反应过程分为三个步骤，即23. pcr 反应受24. 部分酶切可采取的措施有：(1)(3) 等。，和。，等因素的影响。(2)25. 限制性内切核酸酶通常保存在二、简答题（每题 5 分，共 40 分）26. 请列出雌雄果蝇主要特征。浓度的甘油溶液中。27. 简述染色体组型分析的分组排队原

5、则。28. 噬菌体效价和转导频率如何计算？如何计算tn5 易位插入突变总频率？29. 为了选择下面两种突变型，应对只含有葡萄糖、硫酸铵以及无机离子的基本培养基作何调整?leu，亮氨酸营养缺陷型；gal，不能以半乳糖作为唯一碳源的突变型。30. 请你用 hind设计一个质粒的 dna 酶切反应体系。31. 简述一个完整外源 dna 的克隆过程。32. 一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉索基因中有识别位点的消化。消化物与酵母 dna 连接后转化对两种抗生索都敏感的e coli菌株。(l)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞?(2)怎样区分接受了插入酵母 dna 的质粒的克隆?e

6、cor33. 你打算扩增下图所示的两段序列之间的 dna，请设计一对引物序列。5-gacctgtggaagc-catacgggattg-33-ctggacaccttcg-gtatgccctaac-5三、实验设计（10 分）种子在储藏过程中发生了某种变化，使得长成的水稻很容易被一种病原菌感染。据推测可能是某一化学诱导的突变导致一个具有抗菌功能的关键酶丢失。请设计一个实验验证这种推测是否正确，如何使种子重新获得对这种病的抗性?提示：根瘤农杆菌(agrobacterium tumefaciens)具有通过其 ti 质粒将细菌 dna 带入植物基因组的独特功能。附加题：谈谈你对该门实验课的建议或意见。

7、 参考答案：一、 填空题1眼色、眼形、翅形、刚毛的形状和数目2荧光原位杂交技术3gal 、gal 、 emb+-4tn5、 fd10065低温、动作轻柔、抑制酶活6琼脂糖、聚丙烯酰胺，100、琼脂糖、100、聚丙烯酰胺7苯酚、一倍、无水乙醇、两倍、70%乙醇8od /od 、1.8-2.0、1.8、dna、1.6、蛋白质2602809od、dna 浓度（g/ml）=（od260-od330）50g/ml稀释倍数（100）10 上样缓冲液、溴酚兰、111 蛋白质变性、24：1、25：24：1、tris、防止氧化、饱和、棕色12 蛋白质变性、细胞破壁13 缓冲液、溶菌、溶液浑浊、细胞破壁蛋白变性、

8、溶液变粘稠、sds、碱性、中和、絮状沉淀、乙酸、使染色体和蛋白质变性沉淀，使质粒 dna 析出14 ccc、oc、lc、l、ccc、oc、lc、l15 1000、蓝、200、黄、10、白16 cacl 、42热激、90、使质粒 dna 转化入细胞217 去除杂质、提高得率、dna 胶切块、溶解、胶块、溶解液、1：3、70%乙醇、无菌水18 酚抽提、乙醇沉淀、加 rna 酶19 1：1、t dna 连接酶420 混匀、浓缩21 中和 dna 电荷促沉淀22 变性、退火、延伸23 温度、mg 、dntp、模板、引物+24 降低反应温度、缩短时间、减少用量25 50%二、 简答题26雌果蝇 个体较大

9、 腹部末端较尖 腹部背面有五条黑条纹 外生殖器较简单，有阴道板和肛上板等结构 腹部腹面有 6 个腹片 无性梳雄果蝇 个体较小 腹部末端较钝 腹部背面有三条黑条纹，最后一条极宽，并延伸到腹面 外生殖器较复杂，有生殖弧、肛上板、阴茎等结构 腹部腹面有 4 个腹片 前腿跗节上有性梳27分组排队原则l 着丝粒类型相同，相对长度相近的分一组l 同一组的按染色体长短顺序配对排列l 各指数相同的染色体配为一对l 可根据随体的有无进行配对l 将染色体按长到短排队，短臂向上28效价(单位/ml)=斑数 x 稀释倍数 x 取样量转导频率=(转导子数/ml)/(噬菌体数/ml)x100%tn5 易位插入突变总频率=f因子上 lac 基因插入突变数（b 板上菌落数）/f因子转移数（a 板上菌落数）x100%29在培养基中添加亮氨酸进行负筛选；在培养基中以半乳糖代替葡萄糖进行负筛选305-gacc