CTAB法提取基因组DNA

1、CTAB法30 提取玉米（或其它植物）基因组 DNA1）取1 g 玉米叶片，加入液氮粉碎，加入 2mL 2% 65保温的 2CTAB抽提液， 混匀， 65保温 3060min。2）加入等体积的氯仿 /异戊醇（24：1），轻缓颠倒混匀， 10000r/min ，离心 5min3）取上清，加入 1/10 体积（约）的 65的 10 CTAB/NaCl溶液，颠倒混匀。4）用等体积的氯仿 / 异戊醇（ 24：1）抽提， 10000r/min ，离心 5min。5）取上清，加入（正好）等体积的 CTAB沉淀液，颠倒混匀，如沉淀可见，继续 做下步，否则， 65保温 30min。6）4， 2700 r/mi

2、n ，离心 5min。7）去上清，用高盐的 TE buffer 重悬（）。（可 65保温 30min，至大部分溶 解）。8）加入体积的异丙醇沉淀核酸，充分混匀， 4， 10000 r/min ，离心 15min。9）去上清， 80%乙醇洗涤沉淀，干燥，用尽可能少的 TE buffer 重悬。高盐的 TE buffer终浓度配制 50ml10mM ,(1M母液）0.1mM EDTA,(0.5M母液）1M NaCl1.8g室温可保存几年CTAB提取液终浓度配制 200ml2%(W/V) CTAB4g100mM ,20ml(1M母液）20mM EDTA,8ml(0.5M母液）1.4M NaCl10.

3、22g室温可保存几年10CTAB/NaCl溶液（10%CTAB/0.7M NaCl）在 80ml H2O中溶解 4.1g NaCl ，缓慢加入 10g CTAB，同时加热并搅拌。如果需 要，可加热至 65溶解。定容至 100ml。CTAB沉淀液终浓度配制 100ml1%(W/V) CTAB50mM ,10mM EDTA,1g5ml(1M2ml(0.5M母液）母液）室温可保存几年CTAB法提取植物干品（或真菌）基因组 DNA（自己改进版）10）取0.2g 叶片，加入液氮粉碎，加入 800L 2% 65保温的 2CTAB抽提液， 混匀， 65保温 3060min。11）加入 600L的氯仿/异戊醇

4、（24：1），轻缓颠倒混匀， 10000r/min ，离心 5min。12）取上清（约600L） ，加入 1/10 体积（约 60L）的 65的 CTAB/NaCl溶液， 颠倒混匀。13）用等体积（约600L）的氯仿/异戊醇（24：1）抽提，10000r/min ，离心 5min。14）取上清（约 450L） ，加入体积的异丙醇沉淀核酸，颠倒混匀， （如沉淀可见， 继续做下步，否则， -20 保温 1020min）。15）4， 12000 r/min ，离心 10min。16）去上清，用高盐的 TE buffer 重悬（约 100L），（可 65保温 30min，至大 部分溶解 , 加（1 L

5、） Rnase A （10 mg/mL） 37 30-60min 。17）加入体积的异丙醇沉淀核酸， 充分混匀（如没有沉淀， -20 保温 1020min）， 4， 12000 r/min ，离心 15min。18）去上清，70%乙醇洗涤沉淀， 干燥，用尽可能少的 TE buffer 重悬（3060L）。 以%琼脂糖凝胶电泳检测基因组 DNA大小及提取质量；紫外分光光度计法检测 DNA纯度（将 DNA稀释 50 倍后分别测 OD260 和 OD280，并计算 OD260/OD280 的比值）。CTAB法提取植物基因组 DNA（改进版）19）取0.2g 叶片，加入液氮粉碎，加到 2ml离心管，加

6、入 1000L 2% 65保温 的 2 CTAB抽提液，混匀， 65保温 30 60min。20）加入 900L的氯仿/异戊醇（ 24：1），充分混匀， 12000r/min ，离心 15min。21）取上清（约850L） ，加入 1/10 体积（约 85L）的 65的 CTAB/NaCl溶液， 颠倒混匀。22）用等体积（约850L）的氯仿/异戊醇（24：1）抽提，12000r/min ，离心 15min。23）取上清（约 700L） ，加入等体积的异丙醇沉淀核酸，充分混匀， （ -20 过夜）。24）4， 12000 r/min ，离心 20min。25）去上清，用高盐的 TE buffer 重悬（约 400L），（可65保温 30min，至大 部分溶解, 加（4-6 L） Rnase A （10 mg/mL） 37 30-60min 。26）加入等体积的异丙醇沉淀核酸，充分混匀（ -20 1-2h），4，12000 r/min ， 离心 20min。27）去上清， 75%乙醇洗涤沉淀，干燥，用尽可能少的 ddH2O重悬（ 3