Waters 600型高效液相色谱仪标准操作规程

1、Waters 600型高效液相色谱仪Waters 600型高效液相色谱仪标准操作规程 1、仪器组成及电源 1.1仪器组成 本仪器由Waters 600泵、Waters 486紫外检测器和Waters PC800工作站组成，三个部件均有电源插头。 1.2接通电源 将电源插头分别插入插座后，依次打开泵、检测器、PC800工作站的电源开关。 2、Waters 600泵操作 2.1 常规准备工作 包括：开通电源，溶剂脱气，泵头及溶剂管路除空气泡及泵的起动。 2.1.1 接通系统电源，控制器开通后进行自检，数秒后通过，接受操作指令。 2.1.2 溶剂瓶脱气 检查氦气瓶压力调节器，设定压力在5090psi

2、之间。按SETUPI调节后，按ISOCRATIC 或DIRECT，在需通气区打入初始值100mlmin，用ENTER输入，通气满15分钟，再按流动相情况分别将氦气流量设定在1030mlmin。 2.1.3 系统中气泡排除 泵启动时，调节所需通道流速为lmlmin，该通道如A调节为100。开启溶剂排放阀用针筒抽取10ml溶剂，关闭排放阀。柱前气泡如不能排除，则管路在不与色谱柱连接情况下，提高流速至9mlmin，数分钟后将流速减至lmlmin。 2.2 等度(1socratic)操作 用梯度控制器上ISOCRATIC调出等度操作屏幕。该屏幕可以控制：(1)溶剂流量设定；送入流动相溶剂组成；设定脱气

3、时氦流量；设定柱加热单元的温度，控制外接继电器开关及控制泵操作。 等度操作时需设定溶剂流量及流动相溶剂组成。后者通过光标选择在每个流动相中打入其百分比组成，各组成之和应为100，设定后用ENTER输入。 2.3 梯度洗脱操作 梯度洗脱需要编制梯度表和程序事件 ( Program event )表后，在OPERATE GRADIENT屏幕时运行。 2.3.1 梯度表的编制 步骤包括：(1)梯度表的设立；(2)梯度表的输入编辑；(3)梯度表的贮存；(4)自动启始操作的指定及(5)删除以前的梯度表。 2.3.1.1 梯度表的设立 在复印的梯度表中填入每梯度小段的流速、溶剂组成及速率改变曲线(见表1)

4、。共可设包括开始条件在内的14个小段。 表1 梯度表( GRADIENT TABLE )示例 时间(TIME) 流速(FLOW) A B C D 曲线(CURVE)开始(1NITIAL) 1.00 100 0 0 0 *30.00 1.00 0 100 0 0 635.00 1.00 100 0 0 0 650.00 0.00 100 0 0 0 11 2.3.1.2 梯度表的输入编辑 按照(2311)梯度表的内容用光标调节位置，将表号( Table# ) 及各项内容送入相应位置。流速改变曲线分凹，凸及线性，可借助HELP键调出有关资料参考。 编辑梯度表时删除行方法：将光标移至准备删去的行，按

5、 CLEARLINE。插入行时进将光标移至表末，打入时间及内容，表格即按本身时间重排。 2.3.1.3 梯度表的贮存 可以贮存的梯度表共15个，编号为115。欲贮存时按SAVE键、屏幕要求输入表号(115)，输入表号后按ENTER键。以前存入的程序号将被要求是否用新表取代。回答，1Yes，0No后即按要求处理。 2.3.1.4 自动启始操作的指定 用 PUMP SETUP屏幕设定延迟执行梯度时间。 2.3.1.5 删除以前的梯度表步骤：在Table# 区打入欲取代的号码，再按ENTER。如小量修改可直接在现有表上进行，再予以贮存。如改变甚大必须将旧表删除则按CLEAR TABLE删除全表。 永

6、久存贮区删除时：按SAVE，打入欲删除的表号，按ENTER。在“REPLACE WITHNEWTABLE?”出现时，回答1，该表即被删除。2.3.2 程序事件表 ( PROGRAME VENTS TABLE )的编制 程序事件表包括时间，事件及动作3个项目(见表2)。 表2 程序事件表示例时 间 事 件 动 作 启始(1NITlAL) 1 2 3.00 2 1 3.55 2 0 步骤：按PROG EVENT调出PROGRAM EVENT屏幕，在Table# 区打入所需号码(15)，在Time区打入时间及ENTER。再在EVENT处打入指定工作的代号，按ENTER，然后在ACTION 填入适当值

7、，按ENTER。 消除行时将光标移至该行，按CLEAR LINE。插入行时，光标移表末，打入时间，该表按本身时间重排。 2.3.3 梯度程序的运行 2.3.3.1 选择梯度事件表 按OPER GRAD，调出梯度操作(OPERATE GRADIENT) 屏幕，在Table# 区打入所需表号及ENTER，再按OPER GRAD。2.3.3.2 梯度事件表的运行 开始运行程序时按START RUN，运行至程序完成或中止运行或另一进样使程序重新开始。 运行过程中改变参数，在键盘未被锁住情况下打入新值后，按ENTER即可。 需要在运行中保持现状暂停执行程序时，可先按MORE，显示新屏幕，再按HOLD，屏

8、幕左下角表示该功能已被保持暂停。回复梯度时按RESUME RUN。停止送液可按STOP FLOW，恢复可用RESUME RUN。 操作时改为另表执行，可在TABLE# 区打入新表号，按ENTER。 运行时编辑表格，可在表号# 区打入欲取出的数字，按ENTER。修改表格后用其他表格号存入，再重新开始分析。 废弃梯度操作时，按ISOCRATIC ，用DPER GRAD回至程序，如再按ISOCRATIC， 则原梯度程序即被停止。 3、Waters 486紫外检测器参数设定 按“”键，输入所需波长，按Enter键即可。 4、PC800工作站参数设定 4.1启动工作站 在DOS提示符下键入“800”并按

9、Enter，进入主屏幕。 4.2数据采集参数：确定数据采集的通道数，采集数据的带率和运行时间。 4.3积分参数：在各参数项中填适当数值，积分参数（A）和（B）分别对应通道（A）和通道（B）。 4.4组分表的建立：可输入组分各、保存时间、作用通道以及组分是否将被定量等基本信息。 4.5样品序列：将要分析的标样和未知样的数目，使用“填写”下拉菜单中的“填写样品序列”选择项，将数据填入序列表中；选“设置菜单元运行流程”命令，指定本序列要完成的操作，按“确认”退出设置运行流程，最后在编辑样品序列画面按“确认”退到主画面。 4.6存入方法：从主屏幕选择框选“存储”，并输入一个文件名称，再选择“确认”选择框，则把方法存入磁盘。 4.7运行单一或序列样品：从“运行”下拉菜单选择“序列样品”或“单一样品”，此时可进样触发或按AltS键来触发开始进行数据采集。 5、测定操作 5.1按检测器Auto zero键置零，进样阀手柄置“LOAD”位置，将供试液注入进样阀。 5.2进样阀手柄迅速转到“INJECT”位置，注入样品，开始采集色谱数据