血型的鉴定方法及操作全解

1、红细胞血型系统及其检测,重庆医科大学临床血液教研室,血型的发现,1900,年,ABO,血型系统,1940,年,Rh,血型系统,Karl Landsteiner,血型,blood type,狭义地讲，存在于红细胞上的特异性同种抗原,广义地讲，是人类遗传多态性的一种表现，血,液中各种成分都有其各自型别,红细胞血型（系统，抗原,是存在于红细胞上的化学结构，化学本质是糖,和多肽，是红细胞膜上的,跨膜蛋白,存在于红细胞膜上（完全抗原），也存在于上,皮细胞以及各种体液和分泌液中（半抗原,RBC,存在于体液、分泌液中,红细胞血型抗体,天然抗体、免疫抗体,规则抗体、不规则抗体,完全抗体，不完全抗体,同种抗体，

2、自身抗体,天然抗体和免疫抗体,天然抗体,ABO,血型系统中,A,型个体血浆中,天然存在抗,B,B,型个体血浆中存在抗,A,多,数天然抗体是,IgM,型，最佳反应温度为,室温,或,更低,免疫抗体：一般通过输血、妊娠、注射三种方,式接受抗原刺激，多数免疫抗体是,IgG,型，最,佳反应温度是,37,o,C,天然抗体和免疫抗体特性比较,规则抗体和不规则抗体,规则抗体,ABO,系统产生抗、抗是有规律的,Landsteiner,规律,型抗，型抗，型抗，抗,不规则抗体：除,ABO,系统外，其他系统产生的抗体,均不符合上述规律,正常人血液中一般没有不规则抗体,又称为意外抗体,unexpected antibo

3、dy,完全抗体和不完全抗体,完全抗体,在盐水介质中能凝集红细胞抗体，多为,IgM,抗体,不完全抗体,能使红细胞致敏，但在盐水质中不能凝集红细胞,需要通过抗球蛋白法或其他非盐水介质法进行检测，多为,IgG,抗体,抗,IgG,同种抗体、自身抗体,同种抗体：针对患者缺乏的抗原所产生的抗体,即为同种抗体，如,Rh,阴性者输血后产生的抗,抗体,自身抗体：针对自身抗原产生的抗体，如引起,自身免疫型溶血性贫血,红细胞血型,红细胞血型分类,ISBT,The International Society of Blood,Transfusion,2002,年,29,个系统,200,多个抗原,目前,30,个系统,3

4、00,多个抗原,一,ABO,血型系统,1. ABO,血型抗原和抗体特性,2.ABO,血型的遗传与生化,1,ABO,基因型与表型,A,型,AA,AO,B,型,BB,BO,AB,型,AB,O,型,O,A,B,是显性基因,O,是隐性基因,ABO,基因不是产生,ABO,抗原的遗传密码,2,ABO,血型的生化合成,H,基因,L,fucocyltransferase,19chr,A,基因,N-acetyl-0,galactosaminyltransferase,9chr,B,基因,galactosyltransferase,9chr,O,基因,无效基因，不产生转移,酶,O,型红细胞含有,H,物质,基因,酶

5、,合成抗原,思考,A,B,AB,型红细胞是否存在,H,物质,3,ABH,可溶性抗原形成,分泌型血型物质,ABH,抗原存在于红细胞,内皮细胞、血小板、淋巴细胞、上皮细胞等,也可出现在除脑脊液外的分泌液中,唾液中最,丰富,Se,se,基因,与体液分泌有关,Se,编码,L-fucocyltransferase,形成分泌液中的,H,抗,原,H,也可转化为,A,或,B,抗原,Se,不影响红细,胞上,ABH,形成,Se,为分泌型,se,为非分泌型,19chr,分泌型血型物质的意义,在,RBC,抗原弱表达个体中确定,ABO,血型,检测唾液、羊水中的血型物质，辅助鉴定血型,和预测胎儿血型,能中和天然抗体,Ig

6、M,，有助鉴别,Ab,性质,3,ABO,亚型,亚型：同一血型抗原的,结构、性能（质,或,抗,原位点数（量,存在一定差异,A,亚型,A1,A2,A3,Ax,Ay,Am,B,亚型,B1,B2,B3,Bx,Bm,二,Rh,血型系统,1940,年,Landerstein,和,Wiener,用恒河猴,rhesus,RBC,免疫家兔或豚鼠，得到一种,抗体，可与,85,白种人红细胞发生反应,Rh,系统有,50,个抗原，最复杂，重要性仅次于,ABO,血型,1,遗传与发育规律,胎儿早期充分发育，脐带血,新生儿红细胞同,成人,基因位于,1chr,分别命名为,RHD,RHCE,RHD,编码,D,抗原,RHCE,编码

7、不同组合的,CE,抗,原,ce,cE,Ce,CE,2,命名和种类,三种命名方式,Fisher-Race,数字命名法、现代命名法,Fisher-Race,命名法,CDE,命名法,3.Rh,血型种类,D,E,C,e,c,抗原的强弱次序,DECce,5.Rh,抗体,Rh,抗体产生,天然抗体罕见,主要通过输血和妊娠免疫产生,IgG,初次免疫后,36,月出现，再次免疫后,3,周达高,峰,Rh,抗体种类,抗,D,抗,E,抗,C,抗,c,抗,e,ABO,和,Rh,血型系统的临床意义,安全输血的主要保证,新生儿溶血病的诊断,器官移植的必要条件,其他：遗传学研究，法医学鉴定,四,ABO,和,Rh,血型鉴定,常用

8、方法,盐水介质法、酶介质法、抗人球蛋白法、聚凝,胺法,试管法、玻片法、微柱凝胶法,1,盐水介质法,salt medium test,原理：根据,IgM,类抗体与红细胞膜上特异性抗,原能发生凝集反应,正定型：已知血型抗体试剂,红细胞,反定型：已知标准红细胞,血清,鉴定红细胞上血型抗原,鉴定血清中抗体,反应条件：生理盐水介质，室温，肉眼可见凝,集反应,平板法，试管法，微孔板法,试管离心法最可,信赖,应用,ABO,血型定型,RhD,抗原定型,IgG+IgM,IgM,单克隆抗体,，交叉合血,结果判断,注意事项（一,标准血清,健康壮年人混合血清，培养细胞株,的单克隆抗体,要求,高效价：抗,A,抗,B1,

9、128,高亲和性,15s,内出现凝集,3min,后凝集块,1mm,2,单克隆抗体具有检出,A2,A2B,的能力,冷凝集素效价,1,4,无菌，病毒灭活,注意事项（二,红细胞试剂,三个健康者同型新鲜红细胞混合,用生理盐水洗涤三次,红细胞悬液不能过浓或过淡,5,生理盐水红,细胞悬液,注意事项（三,所有器材清洁干燥,一般先加血清，后加红细胞,反应温度,IgM,抗体反应最适温度为,4,0,C,为防,止冷凝集素干扰，采用室温,37,0,C,反应减弱,离心时间和速度,3000g,30s,反定型不宜用玻片法,结果核对，避免笔误,正、反定型结果一致才能报告，否则查找原因,正反定型不一致的可能原因（一,操作技术上

10、的错误：主要原因,离心过度或不足,细胞与血清反应比例不适当,阳性反应产生溶血现象而未能识别,漏加试剂、结果判读错误等,正反定型不一致的可能原因（二,出现假阴性的常见原因,某些白血病患者和难治性贫血等导致,ABO,抗,原减弱,免疫系统尚未健全的新生儿,4,月,6,月内婴儿,抗体水平下降的老人,亚型红细胞抗原性弱，难以检出,低丙种球蛋白血症患者，血清定型时不凝集或,弱凝集,正反定型不一致的可能原因（三,出现假阳性的常见原因,红细胞出现多凝集现象,严重肠道革兰氏阴性杆菌感染，可使红细胞获得类,B,现象,异常的血浆蛋白升高、白蛋白,球蛋白异常，高浓度纤,维蛋白原造成假凝集现象,待检血清中有不规则抗体存

11、在,右旋糖酐、静脉注射某些造影剂等引起红细胞,类似凝,集,方法学评价,简单，灵敏度低，只适合,IgM,抗体,试管法：需时短，离心增强凝集，可发现亚型,和较弱的反应，正、反定型皆适合,玻片法：适合大规模血型普查，反应时间长,有时漏掉弱反应，反定型不适合,2,酶介质法,enzymic medium test,原理和方法：主要用于,Rh,血型鉴定,IgG,抗体,蛋白水解酶,增强,IgG,抗体,的凝集作用,注意事项,Rh,血型不需作反定型,每次实验均需作阳性、阴性对照,方法学评价,简单经济,稳定性、准确性较差，不能检出,MN,Duffy,血,型系统,3,抗人球蛋白实验,Coomb,s test,原理和

12、方法,抗,IgG,待测红细胞,抗,RhD,IgG,抗人球蛋白,红细胞凝集,应用延伸,检测红细胞,同种抗体,的经典方法，新生儿溶血,病、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血,直接,Coombs,direct antiglobulin test, DAT,间接,Coombs,indirect antiglobulin test, IDAT,DAT,检查红细胞是否致敏,IDAT,检测血清中不完全抗体,4,聚凝胺介质法,polybrene test,原理和方法,低离子强度盐溶液,low ionic strength salt solution,LISS,降低介质离子强度，增加抗原抗体结合,聚凝胺,中和

13、红细胞表面负电荷，使红细胞发生非特异性,凝集,重悬液,resuspension,方法学评价,适于各类抗体,IgM,IgG,快速、灵敏、可靠,对检测,Kell,血型系统抗体不理想，不能用肝素,抗凝,5,微柱凝胶法,gel cards with microtubes,1986,年法国人,Dr. Yves Lappierre,发明,1994,年，获美国,FDA,认证,原理和方法,葡聚糖做成微型凝胶柱,上端为反应室，下端凝,胶柱为抗原抗体凝集反,应的介质,抗原与抗体结合后离心,经过凝胶分子筛作用,游离红细胞在凝胶底部,而与抗体结合凝集的红,细胞位于凝胶上部或悬,浮于凝胶中,反应室,凝胶柱,结果判读,阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中，和,或）出现溶血,注意事项,专用水平离心机,假阳性：镰型红细胞、巨幼红细胞,白细胞过多,纤维蛋白原未完全去除,细菌污染，血浆蛋白异常,假阴性：抗原抗体比例不合适,不适用于直接,Coombs,阳性的红细胞标本、酶,处理的红细胞标本,方法学评价,灵敏度和准确性高，实验结果重复性好，可长,时间保存,自动化程度高，实验过程标准化,ISO9000/CE,认证,成本高,应用延伸,用于,ABO,正反定型，交叉配血、其他血型,抗原检测,CcEe,不规则抗体检测,Coombs,实验,凝胶柱,中