中药制剂中各类化学成分分析.ppt

第六章中药制剂中各类化学成分分析,1生物碱类成分分析,概述理化性质物理性状（存在的形态，升华性，挥发性，光学活性）碱性溶解性沉淀反应沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子酸显色反应+酸性染料（磺酸肽类）有色配合物紫外光谱特征,游离易溶于CHCl3，Et2O，EtOH等有机溶剂生物碱盐水溶性增强,生物碱类成分的分离溶剂萃取柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱）定性鉴别沉淀反应、显色反应多肽、蛋白质、鞣质等假阳性反应麻黄碱、秋水仙碱等假阴性反应,马钱子散中生物碱成分的鉴别取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液12滴，即生成黄棕色沉淀。,定性鉴别薄层色谱鉴别吸附剂：氧化铝、硅胶展开剂：氯仿、苯等显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气等气相色谱麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱的含量测定液相色谱,含量测定总生物碱含量测定化学分析法分光光度法直接测定离子对萃取比色法酸性染料比色法BH十十In（BH十In）BH十In苦味酸盐比色法雷氏盐比色法异羟肟酸铁比色法（含有酯键结构的生物碱）,含量测定单体生物碱含量测定薄层色谱法高效液相色谱法液液分配色谱法（以反相为主，如ODS或C18）改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度的离子对试剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液）固定相改进（封尾技术）液固吸附色谱法离子交换色谱法（阳离子交换树脂）检测器气相色谱法,2黄酮类成分分析,概述理化性质物理性状（存在的形态，颜色，挥发性，光学活性）溶解性酸碱性酸性：与酚羟基的数目和位置有关7,4-二羟基7-或4-羟基一般酚5-羟基碱性,游离甙元易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等黄酮甙易溶于水、甲醇、乙醇,理化性质显色反应还原反应（盐酸镁粉反应）金属盐类试剂的配合反应（铝、铅、锆、镁盐）紫外光谱特征I带(300-400nm)B环桂皮酰基II带(240-285nm)A环苯甲酰基,黄酮类成分的分离溶剂萃取柱层析（聚酰胺柱）沉淀法定性鉴别显色反应盐酸-镁粉反应金属盐类配合反应,定性鉴别薄层色谱鉴别硅胶-分离弱极性黄酮展开系统：甲苯-甲酸乙酯-甲酸，氯仿-甲醇聚酰胺-分离含游离酚羟基的黄酮及其苷展开系统：醋酸，醋酸乙酯-甲酸-水等纤维素-分离多糖苷混合物展开系统：正丁醇-乙酸-水，甲酸，乙酸,含量测定总黄酮含量测定紫外分光光度法比色法高效液相色谱法正相色谱硅胶固定相没有羟基或乙酰化黄酮类成分反相色谱（C18或C8）流动相：甲醇-水-乙酸（磷酸缓冲液），乙腈-水检测器,银杏叶提取物总黄酮醇苷含量测定含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素酚峰与异鼠李素峰的分离度应大于1.5。对照品溶液的制备（略）供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮醇苷19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲醇10ml、25%盐酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45m）滤过，取滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮苷的含量。总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量）2.51,3三萜皂甙类成分分析,概述理化性质物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性）溶解性紫外光谱特征大多无明显的紫外吸收或仅在200nm附近有末端吸收,皂甙元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等皂甙可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等,甘草酸,人参皂甙(A型),理化性质显色反应醋酐-浓硫酸反应五氯化锑反应三铝醋酸反应冰醋酸-乙酰氯反应氯仿-硫酸反应金属盐类反应+铅、钡、铜盐沉淀酸性皂甙+硫酸铵/醋酸铅/中性盐沉淀中性皂甙+碱式醋酸铅/氢氧化钡/碱性盐沉淀,三萜皂甙类成分的分离溶剂萃取柱层析（大孔树脂柱）沉淀法定性鉴别泡沫反应显色反应,定性鉴别薄层色谱鉴别吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土展开剂：三萜皂甙氯仿-甲醇-水、正丁醇-醋酸乙酯-水等极性较大的体系三萜皂甙元-以苯、氯仿、己烷等为主要组分显色剂三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、磷钼酸、浓硫酸-醋酸酐、碘蒸气等,含量测定总皂甙含量测定重量法比色法显色剂：香草醛-硫酸，香草醛-高氯酸，酸酐-硫酸等等三萜皂甙类单体成分含量测定薄层色谱法高效液相色谱甘草酸、远志皂甙紫外检测器其他蒸发光散射检测器（ELSD）,概述理化性质物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性）溶解性酸碱性酚羟基酸性,游离溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等醌甙可溶于热水，易溶于甲醇、乙醇,丹参醌IIA,大黄素,4醌类成分分析,理化性质显色反应羟基蒽醌+碱橙，红，紫红，蓝+Pb2+/Mg2+配合物+对亚硝基二甲基苯胺紫，绿，蓝，灰,定性鉴别显色反应升华法薄层鉴别吸附剂：硅胶展开剂：多含甲醇或水的混合溶剂系统分离甙和甙元不含甲醇或水的混合溶剂系统分离甙元显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏,含量测定游离蒽醌的测定弱极性溶剂提取后，加碱比色结合蒽醌的测定极性溶剂提取，水解测甙元先酸水解后，非极性溶剂提取甙元后测定醌类单体成分含量测定薄层色谱法高效液相色谱,牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定混合碱液比色法对照品溶液测定：以1，8-二羟基蒽醌为对照品，精密称取10mg于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（100g/mL）。取1mL对照品液于10mL量瓶中，在水浴上蒸干，加5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱溶解并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm波长处测定。样品测定：游离蒽醌的测定：取牛黄解毒片10片，刮去糖衣，精密称定重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，称重，水浴上回流4小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量，滤过，吸取滤液50mL于分液漏斗中，用蒸馏水20mL洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿层用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次，直至混合碱液无色，合并碱液，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上加热数分钟至氯仿挥尽，冷却，移入100mL量瓶中，并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。,牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定混合碱液比色法总蒽醌的测定：精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一片置于150mL烧瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小时，放冷，加入氯仿20mL，水浴回流0.5小时，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用蒸馏水洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿液用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次，至碱液无色，合并，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿液。将碱液置水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入50mL量瓶中，用混合碱液稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。结合蒽醌的计算：每片含结合蒽醌量=每片含总蒽醌量每片含游离蒽醌量。,复方丹参片中丹参酮A含量测定高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270nm。对照品溶液的制备：精密称取丹参酮A对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含丹参酮A40g）供试品溶液的制备：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10L，注入液相色谱仪，测定，即得。,5挥发性成分分析,概述理化性质物理性状（气味，比重，折光性）溶解性：易溶于有机溶剂显色反应酚类+三氯化铁蓝，蓝紫，绿羰基+苯肼、羟胺结晶体醛类+硝酸银胺银镜内酯类+亚硝酰铁氰化钠+NaOH红色并逐渐消失奧类+浓硫酸蓝，紫,柠檬烯,薄荷醇,桂皮醛,5挥发性成分分析,定性鉴别化学反应氧化反应(高锰酸钾，铬酸）香草醛硫酸反应薄层色谱吸附剂：硅胶、氧化铝展开剂：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂或苯）显色剂气相色谱法GC-MS或GC-FTIR,5挥发性成分分析,含量测定总挥发油含量测定挥发油测定器蒸馏法单一成分含量测定气相色谱薄层色谱法高效液相色谱GC-MS或GC-FTIR联用技术,4其他类型成分分析,香豆素类显色反应异羟肟酸铁反应与酚羟基反应FeCl3Gibbs试剂（2,6-二氯苯醌氯亚胺）反应蓝色重氮试剂化反应,4其他类型成分分析,香豆素类定性鉴别化学反应法荧光法薄层色谱法,七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别取本品10g，研细，加醋酸乙酯20ml、盐酸0.5ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。薄层条件：硅胶G薄层板，展开剂正已烷醋酸乙酯（4:1），显色剂为10%氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯365nm下检视。,4其他类型成分分析,香豆素类含量测定分光光度法荧光光度法薄层色谱法高效液相色谱法气相色谱法,4其他类型成分分析,有机酸概述理化性质物理性状（存在的形态，溶解性，挥发性）提取分离有机溶剂提取法离子交换法水蒸气蒸馏法,4其他类型成分分析,有机酸定性鉴别吸附色谱分配色谱含量测定酸碱滴定法总有机酸分光光度法高效液相色谱法薄层色谱法其他方法,4其他类型成分分析,环烯醚萜类概述特殊的单萜理化性质物理性状（存在的形态，多苦味，稳定性）溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇薄层定性鉴别吸附剂：硅胶、聚酰胺显色剂：硫酸乙醇，茴香醛试液，香草醛硫酸试液，对二甲氨基苯甲醛硫酸试液,龙胆苦甙,4其他类型成分分析,环烯醚萜类含量测定高效液相色谱法薄层扫描法荧光分光光度法分光光度法,复方栀子冲剂中栀子甙的含量测定精密称取本品3g，置索氏提取器内，加甲醇回流提取6小时，回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水饱和正丁醇提取，提取液蒸干，以甲醇溶解，通过已处理好的活性炭-中性氧化铝柱，用甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。薄层条件：硅胶GF254薄层板，展开剂氯仿甲醇25%氨水（4:1:0.1），检测波长247nm，参比波长370nm。,4其他类型成分分析,单萜及二萜类含芍药甙中药制剂的分析薄层色谱高效液相色谱含穿心莲内酯中药制剂的分析薄层色谱回滴法比色法总内酯薄层扫描或高效液相色谱法单体成分,穿心莲内酯,4其他类型成分分析,多糖（polysaccharides）概述理化性质物理性状（存在形式，还原性）溶解性：溶于水，低浓度的酸碱，盐溶液，不溶于醇、醚、丙酮提取分离水提醇沉防止水解，注意消除酶、酸、碱等的影响,4其他类型成分分析,多糖（polysaccharides）提取分离金属盐沉淀法季胺氢氧化物沉淀柱色谱法（活性炭+等量的硅藻土）凝胶色谱法（葡聚糖凝胶sephadex，琼脂糖凝胶sepharose，聚丙烯酰胺凝胶Bio-gelP）制备型区域电泳,4其他类型成分分析,多糖（polysaccharides）定性鉴别薄层色谱（硅胶、纤维素、硅藻土）纸色谱展开剂：正丁醇、水混合体系显色剂：苯胺-邻苯二甲酸的正丁醇饱和水溶液等电泳法滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳高效液相色谱法气质联用酸水解中和柱前衍生GC-MS,4其他类型成分分析,多糖（polysaccharides）含量测定总多糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法棕红色（550nm）半微量定量法苯酚-硫酸法蓝绿色（480-490nm）蒽酮-硫酸法黄绿色(620nm)单体多糖的含量测定高效凝胶液相色谱法确定分子量高效液相色谱法确定组成色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱检测器：示差折光检测器,4其他类