【毕业学位论文】(Word原稿)淡紫拟青霉菌剂研发及其对香蕉枯萎病防治效果的研究-有害生物检验检疫

分 类 号 ： 单位代码： 10389 密 级： 学 号： 1091514 福建农林大学硕士学位论文 淡紫拟青霉菌剂研发及其对香蕉枯萎病防治效果的研究 学 科 门 类：农学 一级学科名称：植物保护 二级学科名称：植物检疫 研 究 方 向：有害生物检验检疫 研 究 生： 指 导 教 师： 教授 研究员 完 成 时 间：二 O 一二年四月 对菌株 天直径（ 5 天直径（ 7 天直径（ 3 天直径（ 5 天直径（ 7 天直径（ he on in 2011 独创性声明 本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学校有权送交论文的复印件， 允许论文被查阅和借阅 ; 学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 不保密，本论文属于不保密。 学 位 （ 毕 业 ） 论 文 作 者 亲 笔 签 名 ： 日期： 指导教师亲笔签名： 目 录 中文 摘要 . I . 一章 绪论 . 1 福建农林大学硕士学位论文 香蕉枯萎病的发生与危害 . 1 2 香蕉枯萎病的生物防治研究进展 . 13 外研究进展 . 13 内研究进展 . 13 3 淡紫拟青霉研究进展 . 14 紫拟青霉的分类地位及生物学特征 . 14 紫拟青霉的生物防治研究 . 15 紫拟青霉的定 殖研究 . 16 4 淡紫拟青霉生物肥药概况 . 17 5 淡紫拟青霉菌剂研制 . 18 6 本研究的目的和拟解决的问题 . 19 第二章 淡紫拟青霉对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌的抑制作用 . 20 引言 . 20 1 材料与方法 . 21 验材料 . 21 验方法 . 21 2 结果与分析 . 23 紫拟青霉不同孢子浓度菌液对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌的抑制作用 . 23 同接菌浓度淡紫拟青霉菌液对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌的抑制作用 . 24 同初始 淡紫拟青霉菌液对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌的抑制作用 . 27 同温度处理的淡紫拟青霉菌液对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌的抑制作用 . 29 同紫外线 照射时间淡紫拟青霉菌液对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌 抑制作用 . 31 同 度的淡紫拟青霉菌液对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌的抑制作用 . 33 3 讨论 . 35 第三章 淡紫拟青霉的 发酵工艺 . 36 引言 . 36 1 材料和方法 . 37 验材料 . 37 福建农林大学硕士学位论文 v 验方法 . 37 2 结果与分析 . 38 紫拟青霉发酵过程菌体数的变化 . 38 紫拟青霉发酵过程菌丝湿重和干重的变化 . 39 紫拟青霉发酵过程粘度值的变化 . 39 紫拟青霉发酵过程 的变化 . 40 紫拟青霉各时间段发酵液次生代谢物质的 析 . 40 3 讨论 . 46 第四章 淡紫拟青霉菌剂生产工艺的研究 . 46 引言 . 46 1 材料和方法 . 47 验材料 . 47 验方法 . 47 2 结果与分析 . 48 同保存条件下淡紫拟青霉生物肥药中活菌数的存活动态 . 48 紫拟青霉生物肥药固体发酵培养基的优化 . 49 3 讨论 . 51 第五章 淡紫拟青霉制剂技术研究 . 53 引言 . 53 1 材料与方法 . 53 验材料 . 53 验方法 . 53 2 结果与分析 . 56 同包埋方法的筛选 . 56 藻酸钠包埋法不同包埋载体的筛选 . 57 同固化温度对包埋效果的影响 . 58 同保存条件对海藻酸钠包埋淡紫拟青霉的活菌数的影响 . 59 同包埋条件的优化 . 59 藻酸纳包埋淡紫拟青霉活菌数稳定性的测定 . 65 福建农林大学硕士学位论文 讨论 . 65 第六章 淡紫拟青霉对香蕉枯萎病的防治效果研究 . 67 引言 . 67 1 材料与方法 . 67 验材料 . 67 验方法 . 68 2 结果与分析 . 70 紫拟青霉菌液及其生物肥药对香蕉盆栽苗香蕉枯萎病防效的测定 . 70 紫拟青霉菌在香蕉土壤和植株的定殖 . 78 同浓度的淡紫拟青霉生物肥药对香蕉生长特性的影响 . 80 紫拟青霉菌液及其生物肥药对香蕉植株酶活性的影响 . 82 3 讨论 . 87 第七章 淡紫拟青霉对香蕉根际土壤微生态的 影响 . 89 引言 . 89 1 材料与方法 . 90 验材料 . 90 验方法 . 90 2 结果与分析 . 91 紫拟青霉菌液及其生物肥药对香蕉根际土壤酶活性的影响 . 91 紫拟青霉生物肥药对香蕉根际土壤微生物群落的影响 . 94 3 讨论 . 101 第八章 结论和展望 . 103 1 结论 . 103 2 展望 . 105 参考文献 . 106 个人简历 . 98 致谢 . 100 福建农林大学硕士学位论文 文 摘要 香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(起的毁灭性土传病害，造成香蕉产业的巨大损失。本文以 香蕉枯萎病生防 真菌淡紫拟青霉为基础，对该菌的菌剂进行相关的研发并研究该菌 及 其菌剂 香蕉枯萎病的防治效果。 利 用气相色谱 酵过程中的次生代谢物 进行了组分分析 。 共分离并鉴定了33 种 高匹配率的次生代谢物 ， 其 中 烷烃类最多 （ 17种 ） 、硅氧烷类 其次（ 8 种 ） 、苯 2 种、酚 2 种、烯烃1 种、丙腈 1 种、酯 1 种、羧酸 1 种。 发酵 0要次生代谢物为 硅氧烷类 ， 116要 次生代谢物为烷烃类 。 海藻酸钠包埋法是包埋淡紫拟青霉 菌 最好的方法 ，最佳固化温度为 4。 单因素 试验表明海藻酸钠包埋淡紫拟青霉 菌 的最佳固化时间为 2h， 最佳接菌量为 25%，最佳海藻酸钠浓度为 5%，最佳 度为 12%。 淡紫拟青霉的固定化颗粒在查式培养基中发酵 7 天可以增加活菌数。 包埋对淡紫拟青霉有良好的福建农林大学硕士学位论文 护 和增殖 作用 ， 淡紫拟青霉固定化细胞颗粒初始活菌数 107g， 在 4 冰箱中保存 60 天，活菌数为 107g。 淡紫拟青霉 菌 在分别添加米糠 、 花生饼粉 、 大米粉 、 地瓜干粉 、 面粉 、马铃薯 淀粉 、 菜籽粉的垫料中可以发酵 生长 ，其中在垫料 200g 中添加 60g 地瓜干粉发酵能力最强，初始活菌数为 106g，发酵 8天后活菌数 增加到 108g。 固体发酵后制备的生物肥药 在 4 和常温 条件下保存，淡紫拟青霉活菌含量均能很好的维持， 含水量为 30%和 50%的 生物肥药中 活菌含量最高 。 淡紫拟青霉 菌液 在不同浓度、不同 同紫外线照射时间和不同 度等不同条件下对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌都有较强的的抑制作用。但其中40条件下 处理 30 尖孢镰刀菌 尖孢镰刀菌 抑菌率分别 60条件下 处理可保持部分活性 ， 对 在 85 和 105条件下处理 基本失去活性。 淡紫拟青霉菌液 及其 菌剂 生物肥药对香蕉枯萎病的盆栽防效分别是 同时还 能显著促进香蕉植株根、茎、叶的生长 ， 其中 用量占土壤质量比 为 15%的淡紫拟青霉生物肥药对香蕉的促长作用最大。 该菌 可以在香蕉根际土壤和根围土壤定殖， 但 不能在 香蕉植株 的 根、茎、叶内定殖。 该菌 菌液 及其 生物肥药能提高香蕉 植株 对过氧化物酶（ 性变化没有影响。 淡紫拟青霉菌 液及其 生物肥药可以提高香蕉根际土壤的几丁质酶、脲酶和过氧化氢酶活性。 不同时间淡紫拟青霉生物肥药处理组和对照组香蕉根际土壤共检测到 45 种 记 。 整体上处理组微生物总量和细菌总量、真菌总量和 优势度指数、丰富度指数、多样性指数均大于对照组。 关键词： 生防菌剂；淡紫拟青霉；香蕉枯萎病；抑制作用；定殖；生物肥药 福建农林 大学硕士学位论文 is a a of of in as by to of of in a 3 by in 16h, 8 of 16of to . h, 5% , %, 2%. s a . 07g 107g 0 at 福建农林大学硕士学位论文 X 0% to . 106 g 108 g in it in 0% 0% of at 0 00 a 5 05 in of 5%, 30% , 45% of in of to 5% P. in of in P. PO OD in OD of of in P. 5 建农林 大学硕士学位论文 XI of of 一章 绪论 香蕉为芭蕉科芭蕉属植物，是著名的热带和亚热带水果，全球香蕉产量 1 亿吨，是世界上第二大水果作物，产量仅次于柑橘 1。我国是世界上生产香蕉的主要国家之一， 2003 年产量 662 万吨， 香蕉产量位居世界第 4。 1 香蕉枯萎病的发生与危害 香蕉枯萎病 也名为 香蕉巴拿马病 、黄叶病，是由尖 孢 镰 刀 菌 古 巴 专 化 型 (起的维管束坏死的一种毁灭性真菌病害和土传病害，是国际检疫对象 2。尖孢镰刀菌古巴专化型 (于半知菌，肉座目，镰刀菌属 ， 是一种土壤习居菌 3。 香蕉枯萎病尖孢镰刀菌 有 4个生理小种 ， 目前我国发现的生理小种主要有 1号和 4号生理小种 4自然条件下 香蕉枯萎病尖孢镰刀菌 1号生理小种可感染粉蕉， 不感染象牙蕉 。 生理小种 4号几乎能侵染所有香蕉品种，是目前香蕉栽培品种的主要威胁 ， 我国香蕉枯萎病主要由生理小种 4号侵染引起 6。 香蕉枯萎病是土传维管束病害，病原菌的厚垣孢子在土壤中存活周期较长，一般可以存活 3通过带菌种苗、土壤、 流水 和 耕作等传播途径进行传播 6。香蕉枯萎病危害 的田块有明显的发病中心 8，其主要特征是病株凋萎和维管束变色腐烂 7；香蕉枯萎病的典型症状为先从下部叶片开始发病，香蕉叶片福建农林大学硕士学位论文 12 在发病初期先变黄，慢慢发展到主脉，整片叶片枯黄甚至枯死 8；靠近叶鞘处病叶叶柄折曲、叶片下垂；病株除顶叶外，所有叶片自下而上相继变褐，外围假茎近地处开裂，裂口褐色，植株最后干枯；剖开假茎，维管束组织变褐、坏死 6；发病香蕉根部的木质部导管和根茎部褐变；发病后期香蕉根部变黑、干枯、全株枯死 9。幼龄蕉树感病后，表现生长不良，植株矮小，叶抽不出，生长停滞，叶片枯黄，植株甚至枯萎死亡 10。 香蕉枯萎病在亚洲、非洲、澳大利亚、南太平洋等地的香蕉产区分布广泛 11。现在香蕉枯萎病几乎在所有香蕉产区都有发生 159， 1967年中国台湾也报道该病的发生 12。 香蕉枯萎病 也 在我国广东、广西、海南、福建等香蕉主产区 有发生，并有快速扩展的趋势，严重威胁着我国的香蕉种植业 13。 香蕉枯萎病给我国和世界的香蕉生产带来极大的威胁，在 20世纪 40万 2007。 2000年 张绍升 14等人在福建省漳州粉蕉上首次发现香 蕉枯萎病，经鉴定为 1号生理小种，漳州地区因香蕉枯萎病造成 1333多 后泉州、莆田等地也相继发生。香蕉枯萎病造成香蕉产业的损失每年达 20%以上 15。 香蕉枯萎病是一种防治难度大的土传病害，很多研究人员筛选化学药剂来防治香蕉枯萎病 16 有些对香蕉枯萎病病原菌有抑制作用的化学药剂，但主