G试验 侵袭性真菌病的辅助诊断方法ppt课件

湛江安度斯生物有限公司 1 唐丽娟内容目录 一 真菌感染概 一 真菌感染概述二 真菌与 葡聚糖三 鲎试验与G试验四 G试验 临床意义五 生物探针 介绍六 生物探针 操作流程七 生物探针 的临床比对八 G试验的影响因素 湛江安度斯生物有限公司是查尔斯河公司设在中国的子公司 是中国细菌内毒素检测试剂的最大供应商 也是中国细菌内毒素检测领域的技术领导者和创新先锋 世界著名的美洲鲎试剂 LAL 生产企业 美国CR恩度斯弗公司 CharlesRiverEndosafe Inc 也是查尔斯河实验室公司的子公司 湛江安度斯的简介 CharlesRiverLaboratories 作为全球最大的实验动物公司 CharlesRiverLaboratories一直是全球实验动物商业化繁育和市场供应的领导者 拥有分布在北美 欧洲和日本的15个分设施和遍布全球的销售网络 已成为一个生物医学前临床产品和服务的主要供应商 库珀博士 CREndosafe 恩度斯弗 公司是美国著名三大鲎试剂企业之一 有国际知名权威学者詹母斯弗 库珀博士 Dr JammesF Cooper 创建 库珀博士是细菌内毒素检查研究领域的先驱 1971年他与Lein及Banger等人提出以鲎实验法检查热源 并率先证明了鲎实验法作为注射药品热源检查的敏感方法的价值 1972年他协助美国 TheparentralDrugAssociation 的鲎试剂 他一直主持着美国非经肠道药物协会 TheparenteralDrugAssociatoin 的鲎实验应用促进工作 以及每年一届的美国南卡罗纳州查尔顿的鲎实验学术会议 库珀博士创建的Endosafe公司现以成为美国鲎试剂 LAL 市场最大的供应商 该公司的鲎试剂以其良好的稳定性 广泛的适用性以及优越的抗干扰性能享誉国际医药工业界 一 真菌感染概述 真菌感染 真菌感染在通常情况下我们最常见的是表皮的感染 例如头癣 体癣 甲癣等 由于侵犯的部位大都表浅 不会导致严重问题 因而叫浅部真菌感染 深部真菌感染则是真菌突破人体天然屏障导致组织脏器的感染 7 美国死于感染性疾病的十大原因 真菌感染的死亡率上升了3 4倍 死亡率 0 7 2 4 100 000 8 EORTC MSG原称侵袭性真菌感染 IFI 修订后改称IFD 是指真菌侵入人体 在组织 器官或血液中生长 繁殖 并导致炎症反应及组织损伤的疾病 是真菌感染致死的重要原因 侵袭性真菌病 InvasiveFungalDisease IFD 9 侵袭性真菌病已变得越来越常见 10 侵袭性真菌感染的诊断标准 G试验可作为拟诊病例的微生物学标志 11 主要可引发侵袭性真菌病的疾病 肿瘤类 胃癌 肝癌 肝内胆管癌 肺癌 多发性骨髓瘤 白血病 恶性淋巴瘤 12 二 真菌与 葡聚糖 2020 4 7 13 1 某些真菌的细胞壁结构 2 细胞壁含有 葡聚糖组分的真菌 1 是导致侵袭性真菌病 IFD 的常见真菌 2 细胞壁有 葡聚糖组分 2020 4 7 14 这类真菌有 念珠菌曲霉菌耶氏肺孢菌镰刀酶隐球菌接合菌 2020 4 7 15 北京301医院尸检结果 77 97年 肺真菌病发生率3 7 38 1027 隐球菌病 接合菌病占真菌病比例不高 16 当人体深部受这类真菌感染时 真菌在代谢过程会不断释放出 葡聚糖 检查患者的血液 血浆或血清 会发现 葡聚糖含量明显高于非感染者 因此 葡聚糖可作为具有这种细胞结构的真菌感染标识物 2020 4 7 17 三 鲎试验与G试验 1 鲎 H u 后 试验 2020 4 7 18 鲎是地球上最古老的海洋生物之一 已有三亿多年的历史 人们称它为 活化石 雌 雄 2020 4 7 19 研究发现 鲎的循环细胞 阿米巴细胞 中含有一种特殊的凝固酶原 这种凝固酶原可以被自然界广泛存在的两种物质激活为凝固酶 从而导致一系列的生化反应 这两种物质就是脂多糖 Lipopolysaccharide LPS 和 1 3 D葡聚糖 2020 4 7 20 人们利用鲎的阿米巴细胞溶胞物制备成了鲎试剂 LAL或TAL 通常称使用鲎试剂检测脂多糖 LPS 或 葡聚糖 G 的试验为鲎试验 LALTestorTALTest 2020 4 7 21 2 鲎试验反应机理 22 3 鲎试验的应用 应用I 细菌内毒素检查 BacterialEndotoxinTest BET 2020 4 7 23 研究发现 革兰氏阴性细菌的细胞壁都含有一种叫内毒素 Endotoxin 的组分 2020 4 7 24 内毒素是能够引起哺乳动物原反应的主要热原物质 革兰氏阴性细菌在新陈代谢过程不断地向环境释放内毒素 污染药品和医疗器械 因此注射药品和医疗器械都要求必须作细菌内毒素检查 BET 2020 4 7 25 应用II 革兰氏阴性菌脂多糖检测 2020 4 7 26 细菌内毒素的化学成分是脂多糖 当人体深部感染革兰氏阴性菌时 细菌会在体内不断释放内毒素 脂多糖 检查患者的血液 血浆 腹水 尿液及脑脊液 会发现脂多糖明显高于非感染者 脂多糖检测对败血症 严重器官衰竭的快速辅助诊断有临床价值 2020 4 7 27 应用III 真菌 1 3 D葡聚糖检测 2020 4 7 28 医学上通常把用于检测真菌 葡聚糖的鲎试验称为G试验 这是取葡聚糖的英文名称Glucan的首字母来命名该试验 2020 4 7 29 需要指出的是 隐球菌的细胞壁虽然有 葡聚糖组分 在隐球菌感染患者的血液中却检测不出 葡聚糖异常 这可能与隐球菌具有特殊的细胞被膜有关 因此G试验不适合对隐球菌感染的检测 2020 4 7 30 四 G试验 临床意义 31 G试验的临床意义 32 G试验的临床意义 33 34 35 G试验应用科室 36 五 生物探针 介绍 37 生物探针 介绍 38 生物探针 介绍 39 生物探针 介绍 40 生物探针 介绍 41 生物探针 功能 快速定量的临床检测方法 帮助临床医生早期诊断目前常规方法难以判断的侵袭性真菌感染 革兰氏阴性菌感染 便于对感染的早期诊断 早期治疗及对治疗的疗效判定 可检测标本 血浆 血清 尿液 腹水 脑脊液等 42 六 生物探针 操作流程 43 生物探针 操作流程 44 生物探针 操作流程 45 生物探针 操作流程 46 生物探针 操作流程 47 生物探针 操作流程 48 生物探针 操作流程 49 生物探针 操作流程 50 生物探针 操作流程 数据可接入LIS系统等 51 侵袭性真菌感染的临床检测方法对比 52 产品特点 灵敏度高快速 检测方法严谨 准确性高 特异性好 临床符合率高 53 七 生物探针 的临床比对 J厂家的 G试剂 LPS试剂均无特异性 54 最低检测限最低浓度重复性 厂商安度斯最低检测限10pg ml编号检测结果 pg ml 阴性 pg ml 检测日期110 3 1 33 6210 1311 049 859 8610 8710 1810 099 61010 3CV 6 85 1110 0129 81310 7149 81512 41610 3179 7189 6199 4209 9219 6 批内精密度 批间精密度 生物探针 的临床比对 评价结论 安度斯产品的综合性能具有明显优势 58 八 G试验的影响因素 2020 4 7 59 1 检测试剂的灵敏度1 1 葡聚糖的量值与标准品 2020 4 7 60 2020 4 7 61 目前G试验中 葡聚糖采用的单位为重量单位 pg pg是一个非常非常微量的单位 因此G试验是一项非常灵敏的生物检测 当然 越是灵敏精确的检测 越容易受到干扰 目前 葡聚糖没有公认的标准物质 没有国际标准品 没有国家标准品 也没有公认的行业标准品 只有企业的标准品 质控品 2020 4 7 62 各企业的 葡聚糖标准品的来源不一 有的来自茯苓多糖 有的来自香菇多糖 有的来自海藻多糖 不同来源的 葡聚糖对鲎试剂的活性不同 各企业的 葡聚糖标准品效价不一 你的1pg可能相当我的10pg 相互之间无可比性 2020 4 7 63 无统一的标准品导致不同厂家试剂盒有不同的参考值 有的是 10pg为阳性 有的是 100pg为阳性 对参考值的表示各厂家也有所不同 有的以全血含量来表示 有的以检测浓度来表示 2020 4 7 64 1 2试验器具对G试验有重要的影响 葡聚糖是自然界广泛存在的一种物质 极容易污染到试验器具 葡聚糖是一种非常稳定的物质 通常的蒸煮高压 辐照等灭菌手段不能彻底破坏 葡聚糖 很难找到真正意义的无 葡聚糖的器具 2020 4 7 65 G试验使用到的实验器具 采血针采血管 瓶 反应试管移液器具 吸头 最主要的污染来自采血管 2020 4 7 66 重要建议最好使用厂家供应的专用采血管 瓶 其次是用经厂家检测合格的采血管不能使用未经检测的实验器具 2020 4 7 67 尊重科学 为患者负责 无效试验是对患者最大的危害 2020 4 7 68 2 试剂的生物特异性如前所述 G试验的检测试验就是鲎试剂 鲎试剂可以对两种物质反应 用于不同的用途 如下图表示 检测内毒素 脂多糖用于革兰氏阴性菌检测鲎试剂检测 葡聚糖 G试验 用于真菌检测 2020 4 7 69 在检测试剂制备上 应根据试剂的用途制备生物特异性强的检测试剂 如 用于检测细菌脂多糖的试剂 不能对 葡聚糖产生反应 用于检测真菌 葡聚糖的试剂 不能对脂多糖产生反应 2020 4 7 70 遗憾的是 由于技术的原因 并不是所有厂家的试剂都具有生物特异性 有的试剂盒对LPS和 G都反应 有的试剂盒对非检测对象低浓度时可能不反应 较高浓度时会反应 无生物特异性的试剂盒不能区分细菌感染和真菌感染 不具有临床检测价值 2020 4 7 71 2020 4 7 72 鉴别试剂盒是否具有生物特异性的方法 用该试剂盒与LPS G的标准品 质控品 反应 3 某些药物对G试验的影响3 1临床应用发现 注射过香菇多糖注射液的供试者作G试验 其血液中 葡聚糖含量会显著增高 因此需要作G试验的供试者应在24小时内避免使用香菇多糖注射液 2020 4 7 73 3 2临床应用发现 使用过脂肪乳的供试者作G试验 包括作LPS检测 反应曲线形态会发生异常 致使检测值非常高 因此需要作G试验的供试者应