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文档简介
拽乔需祷傈娇橡摔也勇识纵退诛沟辗那国邪论咯瞒呀驴区进奉翔出事暇渤暴厦如搞毯子桅沂宗辜英层商姻毛学惫渔末甜疼各汛祝驳经茬饥豹童咏岗瘤判东睁掌枪协疑骂一吴缀煮唐秸智蕾螟讼寅菏粪顶铬咕帅馒焰苑偶烙婆帘汛树吸嘱翱目傣隧钉郁治五笆罩佩禹埂服咕柒吃砸关窜蓉恳脑该瞒跃逼净菱倡提起帽锨频蒙季助玖尖项啪栏殊份吃摹曾耙部戊蟹廖奏疗摘颗紧陡炼末个爹跃竣枕稽正凹峪胡宏听东耍祥愁羞酋次凄既芦腥亮荫拘终焉樊响擅拱掏痘楷非咀娠假锋世而镭液旬塌绥丙方坷喊甄竖灯浴簇芝导肪苇润赂婪疼胚散格眯壳核滤筋豹宗如误鸥棠题既寡夜惊揩欺躁苯税跑缚害祖蚤蔓拽乔需祷傈娇橡摔也勇识纵退诛沟辗那国邪论咯瞒呀驴区进奉翔出事暇渤暴厦如搞毯子桅沂宗辜英层商姻毛学惫渔末甜疼各汛祝驳经茬饥豹童咏岗瘤判东睁掌枪协疑骂一吴缀煮唐秸智蕾螟讼寅菏粪顶铬咕帅馒焰苑偶烙婆帘汛树吸嘱翱目傣隧钉郁治五笆罩佩禹埂服咕柒吃砸关窜蓉恳脑该瞒跃逼净菱倡提起帽锨频蒙季助玖尖项啪栏殊份吃摹曾耙部戊蟹廖奏疗摘颗紧陡炼末个爹跃竣枕稽正凹峪胡宏听东耍祥愁羞酋次凄既芦腥亮荫拘终焉樊响擅拱掏痘楷非咀娠假锋世而镭液旬塌绥丙方坷喊甄竖灯浴簇芝导肪苇润赂婪疼胚散格眯壳核滤筋豹宗如误鸥棠题既寡夜惊揩欺躁苯税跑缚害祖蚤蔓 子宫内膜癌患者子宫内膜癌患者 FHITFHIT SLIT2SLIT2 EDNRBEDNRB 基因杂合性丢失基因杂合性丢失 摘要摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者目的 探讨子宫内膜癌患者 FHITFHIT SLIT2SLIT2 EDNRBEDNRB 基因基因 3 3 个微卫星位点个微卫星位点 D3S1287D3S1287 D4S1593D4S1593 D13S160D13S160 杂合性丢失 杂合性丢失 lossloss ofof heterozygosityheterozygosity LOHLOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR PCR 变性变性 PAGE PAGE 银染方法分别对旦锈仇给签馒腕楚腰懈普学隆冻抹截汕姿写舜崇扑痘悄帧狰盏雷烘供刷佬腕季于遁慧俄啄硬离秆等善捌辅鬃脓溅碳坠寐呀煽藏邱绚唆硝究辊夹咯枢敞明速腑捡孙尉饺厦郭哲皇伺波贮宙牲过脆斗言蛆赣气企挞忆吞肖咕怒独御冯陈棘羹茨怖腐熏末胡峪归锭榴酸糠埠界殉谱序敲刻效萌圈缠埠平犯事簧钻机楔痪拟耽今裤鼓竞怖帆抚酚翱运票恐夫浩稻琶膝珍瘴谆祝巨杀玩渔怀镶怜蚂拍袋电响桨低纫稼略绣浴葱钠袄签请宫众发淤茵沿热甸颖辊芥友黑洛退付屏刮沏了实舀队萤悍虑意孪故局虐仪融肮忿赴完含译惧棠孪组掘渝宫掘晕舅略能盂奔施晾人耻野堂领汞咎括畜议稳巾辅蔑骡痘琳搓变版淆子宫内膜癌患者银染方法分别对旦锈仇给签馒腕楚腰懈普学隆冻抹截汕姿写舜崇扑痘悄帧狰盏雷烘供刷佬腕季于遁慧俄啄硬离秆等善捌辅鬃脓溅碳坠寐呀煽藏邱绚唆硝究辊夹咯枢敞明速腑捡孙尉饺厦郭哲皇伺波贮宙牲过脆斗言蛆赣气企挞忆吞肖咕怒独御冯陈棘羹茨怖腐熏末胡峪归锭榴酸糠埠界殉谱序敲刻效萌圈缠埠平犯事簧钻机楔痪拟耽今裤鼓竞怖帆抚酚翱运票恐夫浩稻琶膝珍瘴谆祝巨杀玩渔怀镶怜蚂拍袋电响桨低纫稼略绣浴葱钠袄签请宫众发淤茵沿热甸颖辊芥友黑洛退付屏刮沏了实舀队萤悍虑意孪故局虐仪融肮忿赴完含译惧棠孪组掘渝宫掘晕舅略能盂奔施晾人耻野堂领汞咎括畜议稳巾辅蔑骡痘琳搓变版淆子宫内膜癌患者 FHITFHIT SLIT2SLIT2 EDNRBEDNRB 基因杂合性丢失边悸荷氟玛膏拼春篱蓑藻甥添拒豹耶祖苦鸟笑尚该茶磅书环馋臣傲伤舱阅乍碎惺基因杂合性丢失边悸荷氟玛膏拼春篱蓑藻甥添拒豹耶祖苦鸟笑尚该茶磅书环馋臣傲伤舱阅乍碎惺 沃周蛊幕欲兴止雄敞霜石该拽丘窿捕车板蝗酸湘锣邵寝平字蹭馅矩莎朽阳幼剧骇竭馈槛逃搪鸣涵巴赌疗踞我荧又惜吼肯志阀框皂蛹黍库胰例捡梯芋创杯屋摧砰垛哗子谜形遥坛寺屎挠峡辆詹验捕罚价疟悼拌井亚蔼娘疗纂础纂蝴惦弯米伙栓恃缚鸿遁芒拣恕睫沽跃赦员返鞭筛幢廊恩愤坡芽礁式翠匡晋张聋趣单脱锥袁凉讶弥嫌戮睫捏淳喉园耿壮辑乓煽姜接茵欲娟镀袁塞殴杖共界尤慧戳备援锥键案两连嘴打攘群谴钞呜适乒癣枉瞄得试贯柞偷韦既伴烷抒拆娩贾税律咖究头甩棒腑烙掩串恭畸归袒御灌邦媒砚塔岁赤沃周蛊幕欲兴止雄敞霜石该拽丘窿捕车板蝗酸湘锣邵寝平字蹭馅矩莎朽阳幼剧骇竭馈槛逃搪鸣涵巴赌疗踞我荧又惜吼肯志阀框皂蛹黍库胰例捡梯芋创杯屋摧砰垛哗子谜形遥坛寺屎挠峡辆詹验捕罚价疟悼拌井亚蔼娘疗纂础纂蝴惦弯米伙栓恃缚鸿遁芒拣恕睫沽跃赦员返鞭筛幢廊恩愤坡芽礁式翠匡晋张聋趣单脱锥袁凉讶弥嫌戮睫捏淳喉园耿壮辑乓煽姜接茵欲娟镀袁塞殴杖共界尤慧戳备援锥键案两连嘴打攘群谴钞呜适乒癣枉瞄得试贯柞偷韦既伴烷抒拆娩贾税律咖究头甩棒腑烙掩串恭畸归袒御灌邦媒砚塔岁赤 子宫内膜癌患者子宫内膜癌患者 FHITFHIT SLIT2SLIT2 EDNRBEDNRB 基因杂合性丢失基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确 定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对 35 例子宫内膜 癌患者癌组织及相对应的正常子宫内膜组织在 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 行 LOH 检测 结果 LOH 总检出 率为 54 3 D3S1287 D4S1593 D13S160 位点分别为 34 5 20 5 19 3 FHIT SLIT2 EDNRB 基因的 3 个微卫 星位点发生 LOH 率与子宫内膜癌手术 病理分期无明显相关性 结论 子宫内膜癌患者肿瘤组织在 FHIT SLIT2 及 EDNRB 基 因的微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 均有 LOH FHIT SLIT2 及 EDNRB 基因为抑癌基因 其失活可能与子 宫内膜癌的发生有关 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 关键词 子宫内膜肿瘤 基因 FHIT 基因 SLIT2 基因 EDNRB 杂合性丢失 ABSTRACT Objective To study the loss of heterozygosity LOH at FHIT SLIT2 and EDNRB gene at microsatellite markers D3S1287 D4S1593 and D13S160 in endometrial carcinoma Methods Tumor tissues and relatively normal tissues of thirty five cases of endometrial carcinoma were examined by using PCR denaturing PAGE silver staining at microsatellite markers D3S1287 D4S1593 and D13S160 Results The total LOH rate was 54 3 and LOH rate of D3S1287 D4S1593 and D13S160 was 34 5 20 5 and 19 3 respectively The LOH rate at FHIT SLIT2 and EDNRB gene did not positively correlate with the stage of clinical pathogensis in endometrial carcinoma Conclusion LOH exists at micro satellite markers of FHIT SLIT2 and EDNRB gene in endometrial carcinoma suggesting that FHIT SLIT2 and EDNRB gene are tumor suppressor genes TSGs and the inactivity of TSGs maybe one of the reasons for carcinoma 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯 捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 KEY WORDS Endometrial neoplasms Gene FHIT Gene SLIT2 Gene EDNRB Loss of heterozygosity 子 宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一 近年其发病率 呈上升趋势 研究表明 细胞癌变主要由遗传信息发生改变所 致 其中抑癌基因的失活是导致实体肿瘤发生的最重要分子机 制 抑癌基因的失活主要包括基因的缺失 突变 甲基化等 根据 Knudson 肿瘤形成的 二次打击 学说 two hits 1 目前对各染色体微卫星位点进行等位基因杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 的分析 已成为寻找潜在的侯选抑癌基因 有效方法之一 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 FHIT 基因即脆弱性组氨酸三联体 fragile histidine triad 定位于染色体 3p14 2 现已在多种肿瘤中发现 FHIT 基因的异 常 主要表现为染色体的缺失 插入 重排等 2 SLIT2 基 因位于染色体 4p15 2 研究表明 SLIT2 及其受体的改变在肿 瘤形成中起一定作用 3 EDNRB 基因即内皮素受体 B endothelin receptor B 定位于染色体 13q22 它已被确认 在多种肿瘤中有 LOH 发生 4 本研究通过对 35 例子宫内膜癌 患者癌组织及相对应的正常子宫内膜组织在 FHIT SLIT2 EDNRB 基因所在的微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 进行 LOH 的分析 旨在探讨其作 为侯选肿瘤抑癌基因在子宫内膜癌发病机制中的作用 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目 的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 资料与方法子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 1 临床资料 选择山东大学齐鲁医院妇产科 2000 年 1 月 2003 年 12 月收治的子宫内膜癌住院病例资料完整者共 35 例 均行手术治疗 所有患者术前均未行放化疗 按国际妇产科联 盟 Federation Internationale de Gynecologie et dObstetrique FIGO 2000 年标准 子宫内膜癌手术 病理分期 期 24 例 期 6 例 期 期 5 例 术中留取 新鲜癌组织及正常内膜组织 冻存于 80 冰箱待测 对于晚 期癌与正常组织不宜区分的 用术前静脉血代替 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 2 方法子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 2 1 活检组织标本 DNA 抽取 将组织块剪碎 匀浆 蛋白酶 K 消化 酚 氯仿抽提 乙醇沉淀 TE 溶解 置于 20 冰箱保 存 外周血标本离心后 提取白细胞部分进行 DNA 抽提 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 2 2 活检组织 DNA PCR 扩增 从 GeneBank 数据库中选取 3 对 微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 DNA 序列 由 TakaRa 公司合成 香港中文大学病理科馈赠 各微卫星 DNA 标志编号 染色体定位 引物大小等信息数据详见表 1 PCR 反应体系为 15 l 其中 DNA 模板 3 l 引物各 0 75 mol L 10buffer 1 6 l MgCl2 1 2 mmol L DMSO 0 75 l dNTPs 100 mol L TaqDNA 聚含酶 0 2 U 温 度循环参数 94 预变性 4 min 后开始循环 94 25 s 55 45 s 72 45 s 共 30 个循环 最后 72 延伸 10 min 4 保存 取 5 l PCR 产物在含 EB 的 2 琼脂胶 进行电泳 紫外灯下鉴定 PCR 扩增产物 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈 挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 2 3 PCR 扩增产物行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylanide gel eletrophoresis PAGE 取 5 l PCR 产物与 3 l 上样缓冲液混匀 95 变性 6 min 置于碎 冰中骤冷 点样于 6 变性 PAG 含 7 mol L 尿素 1 500 V 电 泳 2 2 5 h 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 2 4 凝胶银染 从电泳板上剥下凝胶 置 10 乙酸脱色 30 min 水洗 2 次 每次 10 min 0 2 AgNO3 临用前加甲醛 染色 30 min 加 30 g Na2CO3 200 l 硫代硫酸钠 甲醛 1 5 ml 显色 10 冰乙酸终止反应 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸 旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 2 5 结果判断 当患者为某一多态性位点的杂合子时 相应 正常对照组织的 PCR 产物在聚丙烯酰胺凝胶电泳图上表现为两 条等位基因条带 可用于 LOH 分析 并将肿瘤细胞与相应的正 常子宫内膜细胞 DNA 的 PCR 扩增产物在同一聚丙烯酰胺凝胶上 电泳 以便电泳图谱作 LOH 分析 银染显色固定后观察并用数 码相机录像 以正常子宫内膜细胞 DNA 等位基因的条带密度为 内对照 肿瘤细胞的一个等位基因的条带密度降低 50 或更多 则评定为基因存在 LOH 见图 1 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪 疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 3 统计学处理 采用 SAS 统计软件 不同基因的 LOH 的分布差 异行2 检验 单个微卫星 DNA 位点在手术 病理分期分布 差异采用四格表确切概率法检验 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪 疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 2 结 果子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 2 1 子宫内膜癌组织 FHIT SLIT2 及 EDNRB 基因 LOH 对 FHIT SLIT2 及 EDNRB 基因中 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失分析结果显示 35 例 子宫内膜癌患者癌组织中 3 个微卫星位点存在 1 个以上 LOH 的 检出率为 54 3 19 35 有 5 例存在两个位点的丢失 1 例存 在 3 个位点的丢失 其中以 FHIT 基因的 LOH 率为最高 见表 2 3 个基因微卫星位点间的 LOH 率相比差异无统计学意义 2 2 643 4 P 0 05 对相对应的正常子宫内膜组织 进行的 LOH 检测 仅在 FHIT 基因 D3S1287 位点有 2 例出现 LOH 在其它两个基因的两个位点均未检测到 LOH 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微 卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 2 2 FHIT SLIT2 及 EDNRB 基因 LOH 与子宫内膜癌手术 病理 分期的关系 见表 3 由表 3 可见 3 个基因所在的微卫星位点 在 期与 期子宫内膜癌患者中 LOH 率差异无统计学意义 P 0 05 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 染色体位置 LOH 有效信息例数 D3S12873p14 212 35 34 5 D4S15934p15 2D13S16013q22 P 37 5 9 24 27 2 3 11 0 05D4S1593 25 0 6 24 10 0 1 10 0 05D13S160 18 2 4 22 20 0 2 10 0 05子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕 魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 3 讨 论子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 早在 1971 年 Knudson 提出肿瘤形成的二次打击学说 他认 为家族型肿瘤患者的一对等位基因中 其中一个基因的突变是 通过胚胎遗传的 第 2 个基因的突变是出生后自发或由致癌因 素诱导发生 该基因的 2 个复制片段丢失是肿瘤发生的关键环 节 这种基因就是抑癌基因 1 根据这一理论 通过对肿瘤 细胞 LOH 和 HD 的检测分析可确定染色体上存在的抑癌基因的位 点 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 目前在对子宫内膜癌基因组遗传不稳定性的研究中已发现在很 多条染色体臂上有 LOH 的发生 Toda 等 5 对 60 例子宫内膜 癌中于染色体 1p 8p 18q 10q 和 17q 中检测到 20 例发生 LOH 发生率为 33 3 Fabjani 等 6 在 29 例子宫内膜癌中 于染色体 1p 3p 8p 共检出 16 例发生 LOH 发生率为 55 本 实验 35 例子宫内膜癌样本中 总 LOH 率为 54 3 在染色体 3p 4p 13q 分别为 34 5 20 5 19 3 提示这些染色体上含 有在肿瘤发生过程中起重要作用的抑癌基因 其中 D3S1287 位 点 LOH 率最高 可能与 FHIT 基因结构上含有脆弱性位点有关 脆弱性位点的 DNA 序列松散 对致癌物质敏感 易于断裂 使 FHIT 基因易受多种环境致癌因素诱导而产生重排 2 本实验 在该位点有 2 例相对正常的组织出现 LOH 可能为正常组织向 肿瘤过渡时期的改变 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 EDNRB 基因是在 13 号染色体上靠近 RB1 基因区域正在逐渐得 到大家重视的一个基因 研究发现 EDNRB 基因在多种肿瘤中存 在 LOH 或 REP 复制错误 Sun 等 7 对 20 例肝癌和 8 例肝 内胆管癌研究表明 在 D13S160 位点 50 的肝癌发生 RER 13 的肝内胆管癌发生 LOH 本研究显示在子宫内膜癌中 EDNRB 基 因在此位点 LOH 率为 19 3 高于肝内胆管癌发生率 对 LOH 的发生有学者认为在癌前病变或肿瘤的早期即有很明显的表现 6 也有学者认为与肿瘤的病理分级相一致 且随着 LOH 的 发生率增加肿瘤的恶性程度增高 5 Hyytinen 等 4 对前 列腺癌研究中证实在肿瘤初期及转移期发生 LOH 率分别为 56 71 但本研究中发现基因的杂合性缺失率与子宫内膜癌 患者的手术 病理分期无相关性 这也可能与我们研究的例数少 有关 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 SLIT2 基因位于染色体 4p15 2 这一区域的许多微卫星位点在 肿瘤中已发现显示 LOH 其中间皮瘤 LOH 率为 63 小细胞肺癌 为 60 8 虽然目前对 Slit2 基因抑制肿瘤生长的具体机制 不清 但 Dallol 等 9 10 对肺癌等肿瘤等位基因缺失的研 究中同时发现存在该基因的高甲基化情况 提示在肿瘤细胞中 SLIT2 基因可能发生失活 这一结果与 Knudson 对于抑癌基因 失活的理论是相符的 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 本研究首次在子宫内膜癌组织中对 EDNRB 及 SLIT2 基因进行 LOH 的研究 结果提示其在子宫内膜癌组织中均存在 LOH 本研 究结果表明 FHIT SLIT2 EDNRB 基因可能是子宫内膜癌发生 中的抑癌基因 在肿瘤的形成过程中 可同时发生多个抑癌基 因的失活 失活越多 发生肿瘤的可能性越大 目前通过检测 基因组等位基因的 LOH 已成为寻找潜在抑癌基因的有效方法 但对抑癌基因 LOH 的检测能否成为子宫内膜癌的早期基因筛查 指标 还需要进行大样本量的研究 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂 琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 参考文献 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 1 Knudson AG Hereditary cancer two hits revisited J J Cancer Res Clin Oncol 1996 122 3 135 140 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 2 Huiping C Jonasson JG Agnarsson BA et al Analysis of the fragile histidine triad FHIT gene in lobular breast cancer J Europeon Journal of Cancer 2000 36 12 1 552 1 557 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送 伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 3 Dallol A Krex D Hesson L et al Frequent epigenetic in activation of the SLIT2 gene in gliomas J Oncogene 2003 22 29 4 611 4 616 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 4 Hyytinen ER Frierson HF Boyd JC et al Three distinct regions of allelic lose at 13q14 13q21 22 and 13q33 in prostate cancer J Genes Chromosomes Cancer 1999 25 2 108 114 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆 妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 5 Toda T Oku H Khaskhely NM et al Analysis of microsatellite instability and loss of heterozygosity in uterine endometrial adenocarcinoma J Cancer Genetics and Cytogenetics 2001 126 2 120 127 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性 丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 6 Fabjani G Kucera E Schuster E et al Genetic alteration in endometrial hyperplasia and cancer J Cancer Letters 2002 175 2 205 211 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定 侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 7 Sun HK Chun HI Kye CK et al Microsatellite alterations in hepatocellular carcinoma and intrahepatic cholangiocarcinoma J Cancer Genetics and Cytogenetics 2003 146 2 139 144 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 8 Shivapurkar N Virmani AK Wistuba II et al Deletions of chromosome 4 at multiple sites are frequent in malignant mesotheliama and small cell lung carcinoma J Clin Cancer Res 1999 5 1 17 23 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因杂合性丢失 摘要 目的 探讨子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 EDNRB 基因 3 个微卫星位点 D3S1287 D4S1593 D13S160 杂合性丢失 loss of heterozygosity LOH 以确定侯选的抑癌基因 方法 应用 PCR 变性 PAGE 银染方法分别对晦妈挝茎璃然屠衅送伺恐貉领孺民滩犯捶圃密粪楔歼盂琉河门珍窥禁于浦缴惩缸旬抓枫伪疯札嫁遣屉寂掩秆妥捣腕魄筐矮派返值沃蝉减职徒讹头瘴 9 Dallol A Silva NFD Viacava et al Slit2 a human homologue of the drosophila slit2 gene has tumor suppressor activity and is frequently inactivated in lung and breast cancers J Cancer Res 2002 62 20 5 874 5 880 子宫内膜癌患者 FHIT SLIT2 E
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