高中生物实验方法与常用试剂.doc

高中生物实验方法与常用试剂1实验方法实验方法是整个实验设计的精髓，是做好实验设计的关键所在。现将与中学实验有关的一些最常见的经典的实验方法汇总如下：(1)化学物质的检测方法：淀粉碘液 (蓝色)还原性糖斐林试剂、班氏试剂(砖红色)CO2Ca(OH)2溶液(澄清石灰水变浑浊) 或酸碱指示剂乳酸pH试纸O2余烬复燃 无O2火焰熄灭蛋白质被蛋白酶水解 、双缩脲试剂(紫色)脂肪苏丹染液 (橘黄色)、苏丹染液 (红色)DNA二苯胺(蓝色)染色体龙胆紫溶液（紫色），醋酸洋红溶液（红色）(2)实验结果的显示方法：光合速率O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量水生植物可依气泡的产生量或产生速率;离体叶片若事先沉入水底可依单位时间内上浮的叶片数目;植物体上的叶片可依指示剂(如碘液)处理后叶片颜色深浅。呼吸速率O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量原子途径放射性同位素示踪法细胞液浓度大小质壁分离和复原细胞是否死亡质壁分离的复原甲状腺激素作用动物耗氧量，发育速度等（饲喂法）生长激素作用生长速度(体重变化，身高变化)胰岛素作用动物活动状态（切除、移植胰腺）菌量菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度大肠杆菌伊红美蓝琼脂培养基生长素作用向光性(3)实验条件的控制方法：增加水中氧气泵入空气或吹气或放入绿色植物减少水中氧气容器密封或油膜覆盖或用凉开水除去容器中CO2NaOH溶液除去叶片中原有淀粉置于黑暗环境除去叶片中叶绿素酒精隔水加热除去光合作用对呼吸作用的干扰给植株遮光如何得到单色光棱镜色散或彩色薄膜滤光血液抗凝加入柠檬酸钠线粒体提取细胞匀浆离心骨的脱钙盐酸溶液灭菌方法微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料,灭菌方法不同：培养基用高压蒸气灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。(4)实验中控制温度的方法：还原糖鉴定：水浴煮沸加热酶促反应：水浴保温用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热DNA的鉴定：水浴煮沸加热细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养（5）常见器材滤纸：过滤或纸层析纱布、尼龙布：过滤，遮光血球计数板：计数（探究酵母菌种群数量变化）2、具体实验方法、根据颜色来确定某种物质的存在：淀粉+I2(蓝色);还原性糖+斐林试剂(砖红色);脂肪+苏丹(橘黄)或+苏丹(红色);蛋白质+双缩脲试剂(紫色);大肠杆菌+伊红和美蓝(菌落为深紫色，有金属光泽)、用颜色标记法来确定原肠胚三个胚层的分化情况。、用荧光标记法来证明细胞膜具有一定的流动性、同位素示踪法：光合作用产生氧气的来源; 光合作用中二氧化碳的去向;噬菌体侵染细菌实验证明DNA是遗传物质，蛋白质不是遗传物质;DNA的复制是半保留复制。、确定某种元素为植物生长必需的元素的方法:水培法(完全培养液与缺素完全培养液对照)、获得无籽果实的方法:用适宜浓度的生长素处理花蕾期已去雄的子房，如无籽蕃茄、诱导染色体变异，如无籽西瓜。、确定某种激素功能的方法：饲喂法，切除注射法，阉割移植法，切除口服法。、确定传入、传出神经的功能：刺激+观察效应器的反应或测定神经上的电位变化。、植物杂交的方法雌雄同花：花蕾期去雄+套袋 +开花期人工授粉+套袋雌雄异花：花蕾期雌花套袋+开花期人工授粉+套袋、确定某一显性个体基因型的方法：测交; 该显性个体自交。、确定某一性状为显性性状或隐性性状的方法：具有一对相对性状的纯合体的杂交自交，观察后代是否有性状分离。、确定某一个体是否具有抗性基因的方法：确定小麦是否具有抗锈病基因，用锈病菌去侵染，一段时间后，观察有无锈斑出现。、鉴定血型的方法：用标准血清与待测血型混合，在显微镜下观察血液的凝集情况。、育种的方法：杂交育种;人工诱变育种;单倍体育种;基因工程育种;细胞工程育种;多倍体育种等。、测定种群密度的方法：样方法; 标志重捕法、生态瓶的制作方法;瓶必须透明，且封闭、分离微生物的方法：平板划线法;用选择培养基培养(如：圆褐固氮菌的分离，金黄色葡萄球菌的分离，细菌和酵母菌的分离)、测定微生物群体生长的方法：测定细菌的数目-显微计数测定细菌的重量-取一定体积的培养基，经离心分离，反复洗涤后，称湿重，或烘干后称干重3、生物学中常用的试剂：1、斐林试剂：成分：0.1g/mlNaOH（甲液）和0.05g/mlCuSO4（乙液）。用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。2、班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。3、双缩脲试剂：成分：0.1g/mlNaOH（甲液）和0.01g/mlCuSO4（乙液）。用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入34滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。4、苏丹：用法：取苏丹颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色（被苏丹染成红色）。5、二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色。6、甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。（甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。）7、50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中，用苏丹染液染色，再用50%的酒精溶液洗去浮色。（苏丹是弱酸性染料，易溶于体积分数为50%酒精）8、75%的酒精溶液：用于杀菌消毒，对于细菌有强烈的杀伤作用，可以作防腐剂。75%的酒精能渗入细胞内，吸收细菌蛋白的水分，使蛋白质凝固变性而失去功能。低于这个浓度，酒精的渗透脱水作用减弱，杀菌力不强；而高于这个浓度，则会使细菌表面蛋白质迅速脱水，凝固成膜，妨碍酒精透入，削弱杀菌能力。75的酒精溶液常用于手术前、打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等。9、95%的酒精溶液：提取含杂质较少的DNA。冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA。DNA不溶于酒精，尤其是体积分数为95%的冷冻酒精，而细胞中的某些物质（蛋白质等）可以溶解于酒精。洗去多余的试剂：卡诺氏液可溶于体积分数为95%的酒精中。燃烧加热：酒精是富含能量的有机物，燃烧能释放大量的热量无水乙醇：提取色素。叶绿体中的各种色素均是有机物，能溶解在有机溶剂中，各色素在无水酒精中的溶解度较大，且酒精无毒，方便操作。10、盐酸：在“探究酶在不同Ph下的活性”的实验中提供酸性环境 15%的盐酸和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。（观察植物细胞的有丝分裂,观察低温下染色体的数目变化.）8%的盐酸:观察DNA和RNA在细胞中的分布中，改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色质中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合 。11、龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色，可将染色体染成紫色，通常染色35分钟。（也可以用醋酸洋红染色）12、20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。14、碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。15、丙酮：用于提取叶绿体中的色素。16、层析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油）可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。17、二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。18、碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏。19、0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的浓度大，可用于质壁分离实验。蔗糖溶液还可用于测定植物细胞液浓度、作为碳源和能源物质，也可用于探究生物膜的半透性。20、0.1g/mL的柠檬酸钠溶液：与鸡血混合，防凝血。血液抗凝剂。21、氯化钠溶液：可用于溶解DNA。当氯化钠浓度为2mol/L、0.015mol/L时DNA的溶解度最高，在氯化钠浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最低。浓度为0.9%时可作为生理盐水。22、胰蛋白酶：可用来分解蛋白质。可用于动物细胞培养时分解组织使组织细胞分散。 23、秋水仙素：人工诱导多倍体试剂。用于萌发的种子或幼苗，可使染色体组加倍，原理是可抑制正在分裂的细胞纺缍体的形成。 24、氯化钙：增强细菌细胞壁的通透性，可用于基因工程。 25石蕊试剂：检验溶液酸碱性判断光合速率与呼吸速率快慢的关系； 26、NaHCO3/ Na2CO3 NaH/ NaH：酸碱缓冲对调节 NaHCO3：提供CO227溴麝香草酚蓝水溶液：检测CO2，由蓝变绿再变黄。28.NaOH：用于吸收CO2或改变溶液的pH。用于“探究细胞表面积与体积的关系”的实验。（与酚酞显色反应），观察物质运输效率。29.Ca(OH)2：鉴定CO2。30.琼脂：激素或其他物质的载体或培养基的凝固剂。用于“探究细胞表面积与体积的关系”的实验。31.亚甲基蓝：用于检测污水的细菌含量。试剂 检验物质 反应颜色斐林（要加热） 还原糖 砖红色沉淀双缩尿 蛋白质 紫色苏丹三/四 脂肪 橘黄/红碘 淀粉 蓝色DNA 二苯胺（加热） 蓝色DNA 甲基绿 绿色RNA 吡啰红 红色线粒体 健那绿（唯一的活体染色剂）蓝绿色染色体 龙胆紫 紫色染色体 醋酸洋红 红/紫红色乙醇 重铬酸钾 灰绿色二氧化碳 溴麝香草酚蓝 由蓝变绿再变黄4、几种试剂的比较1斐林试剂、班氏试剂与尿糖试纸这三种物质均可用来检验含醛基的有机物的存在，在医学上用来检验糖尿病，其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化，但成分略有不同：斐林试剂：即硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠组成的蓝色混合溶液。分为斐林试剂A和斐林试剂B，A为CuSO4溶液，B为氢氧化钠和酒石酸钾钠的混合溶液，使用时将A、B等体积混合即成斐林试剂。班氏试剂：即硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸钠组成的混合液，又叫本尼迪克特(Benedict)试剂，它与醛反应的结果是与斐林试剂一致的，只是比斐林试剂更稳定，所以在临床化验中更常使用。尿糖试纸：又叫硫酸铜试纸，呈白色,带蓝色斑点，用于糖尿病患者的尿糖测试。每片含硫酸铜20毫克,枸橼酸300毫克,碳酸钠80毫克，氢氧化钠235毫克。尿糖试纸法快速、方便，试纸的正确使用方法为：将试纸条放在尿液中浸湿，一秒钟后取出，在一分钟内观察试纸的颜色，并与标准色板对照，根据不同的颜色来确定尿糖阳性的程度。2斐林试剂和双缩脲试剂的比较相同点：都由NaOH溶液和CuSO4溶液构成；斐林试剂甲液和双缩脲试剂A都为01g/mLNaOH溶液。不同点：CuSO4溶液浓度不一样：斐林试剂乙液为005g/mLCuSO4溶液， 双缩脲试剂B为001g/mLCuSO4溶液。 配制比例不一样：斐