康乃馨组培.doc

康乃馨植物组织培养一、实验目的掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。二、实验原理香石竹（学名：Dianthus caryophyllus）又名康乃馨,花色艳丽,开花时间长,装饰效果好,是世界上最畅销的切花之一,具有较高经济价值。由于病毒病侵害,常使植株矮化,花朵变小,花色产生斑点,退色甚至不开花,影响切花产量和质量。通过茎尖分生组织培养,能够获得“无病毒”的健康植株,对于引进的少而新的脱毒种苗,再进行一次茎尖培养,进一步降低基础苗中的病毒含量,并通过组织培养的方法快速繁殖,在短期内,就可以获得大量的脱毒试管苗,使引入材料迅速在生产上推广应用,取得明显的经济效益。三、实验仪器与材料仪器：超净工作台、酒精灯、电炉、烧杯、玻璃棒、镊子、解剖刀、不锈钢碟子、纱布、记号笔、标签纸试剂：75%乙醇、0.1%升汞、无菌水、MS培养基、 IAA 0.1mg/L 、BA 0.5mg/L、pH5.8-6.0、蔗糖、琼脂四、实验步骤培养基的配方1、香石竹的生芽培养基 MS+ IAA (0.1mg/L) + BA( 2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培养瓶分装1015瓶。 另外，需要制备无菌水20瓶（大培养瓶），每人34瓶，纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。2、香石竹的继代培养基 MS+ BA( 0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）+琼脂(8g/L), pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培养瓶分装10-15瓶。 另外，需要制备无菌水20瓶（大培养瓶），每人3-4瓶，纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。3、香石竹的生根培养基 MS+生根培养基为1/2MS+NAA(0.075mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培养瓶分装10-15瓶。 另外，需要制备无菌水20瓶（大培养瓶），每人3-4瓶，纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。香石竹的生芽培养1、无菌操作准备 将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。2、外植体消毒 选取香石竹叶腋间生出的侧芽为外殖体,用自来水冲洗半小时,将材料上的泥土和灰尘及杂质冲洗干净,用解剖刀切取所需组织，放入培养瓶中，用75%的酒精浸泡消毒30sec,将材料移入0.1%升汞溶液浸泡10分钟,然后在超净台内用无菌水冲洗34次。材料消毒完成。3、外植体的制备 将消毒好的材料用无菌滤纸吸去多余的水份,然后在无菌超净工作台上，借助解剖刀剥离茎尖，剥取茎尖大小通常在0.3mm左右。以上操作均需在酒精灯火焰旁进行。4、外殖体接种用灭菌过的镊子将切好的外植体接种到配置好的接种培养基上，每瓶接2-3（可以更多一些）块 。接种培养基为MS + IAA0.1mg/L + 6- BA 0.5mg/L,PH5.8,蔗糖3%,琼脂0.75%。接种完成后盖上瓶盖，贴标签，注明材料名称、接种日期和姓名。5、培养与观察将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室培养。整理，清洁超净工作台。香石竹的培养条件为温度251,一昼夜光照16h,光照强度2000lx。经过10天左右的培养,大部分茎尖开始萌动,逐渐长大,20天左右即可长成一小丛植株。定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。香石竹的继代培养1、无菌操作准备将培养基及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。2、无菌操作接种 酒精灯火焰旁打开香石竹芽苗培养基，用镊子取出香石竹芽苗，置于无菌不锈钢碟子，用解剖刀将芽苗簇切割成含23芽苗，然后切去芽苗的上端。3、培养 将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室进行光照培养。整理、清洁超净工作台。4、观察记录定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。香石竹芽苗的诱导生根1、无菌操作准备 将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。2、无菌操作接种 酒精灯火焰旁打开香石竹培养瓶，用镊子取出香石竹芽苗，置于无菌不锈钢碟子，用解剖刀将芽苗的每个小芽分开。用镊子将单个小芽插入生根培养基，每瓶接3个。盖上瓶盖，贴上标