免疫血液学ppt课件.ppt

免疫血液学,1,第一节红细胞血型系统,一、ABO血型系统二、Rh血型系统三、其他血型系统,2,ABO血型系统的发现,1900年奥地利维也纳大学的KarlLandsteiner发现了人类红细胞的同种凝集现象，随之发现了人类第一个血型系ABO血型系。开创了免疫血液学研究和应用工作的新纪元。亦为常规血型鉴定方法的发展奠定了基础。,3,ABO血型分类和命名分类：根据红细胞上A，B两种抗原及抗体,血型RBC上抗原血清中抗体AA抗BBB抗AO-抗A,抗BABAB-,4,在ABO血型系统中,红细胞缺乏某抗原,血清中一定预计地含有该抗原的抗体。,5,ABO血型系统遗传：,“三复等位基因”学说：第九号染色体上A、B、O、三种等位基因控制A、B基因：显性基因O基因：隐性基因父母双方各遗传给子代一个基因，具6个基因型，4种表型。,6,基因型表型OOOAO,AAABO,BBBABAB,7,ABO系统亚型,亚型是指同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异所引起的变化。ABO血型系统中以A亚型最多见，A抗原的两个主要亚型是A1和A2。,8,检查亚型的目的,防止误定血型，避免输血反应A1与A2之间输血可能引起输血反应亚型抗原性弱，易漏检或误定,9,孟买型首先在孟买发现而得名,没有H抗原的O型基因型为hh，表现型为Oh红细胞和唾液中无H、A和B抗原，但血清中含有抗A、抗B和高效价的抗H抗体除与AB型红细胞发生反应外，还可与O型红细胞凝集如输血，只输oh同型血,10,ABO血型鉴定,检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判断血型。常规的方法包括正向定型与反向定型正定型：已知抗体特异性的血清检查红细胞抗原反定型：已知血型红细胞检查血清抗体,11,红细胞的常规ABO定型,正向定型反向定型抗A抗B抗A,BA细胞B细胞O细胞-+-O+-+-+-A-+-B+-AB,判断结果,12,ABO血型检查的临床意义,1.输血2.新生儿溶血病3.器官移植4.ABO血型与疾病有关,13,二、Rh血型系统,本演示文稿可能包含观众讨论和即席反应。使用PowerPoint可以跟踪演示时的即席反应，在幻灯片放映中，右键单击鼠标请选择“会议记录”选择“即席反应”选项卡必要时输入即席反应单击“确定”撤消此框此动作将自动在演示文稿末尾创建一张即席反应幻灯片，包括您的观点。,14,.,定义:红细胞含有与恒河猴（Rhesusmonkey）红细胞相同的抗原，取名为Rh抗原。,15,Rh抗原及亚型,1.Rh抗原已发现40多种，与临床关系密切的有5种依其抗原性强弱排列：为DECce5种临床上将含D抗原者为Rh阳性，无D抗原者为Rh阴性。,16,Rh血型抗体,1Rh抗体产生极少数是天然抗体，如抗E、抗CW绝大多数：免疫性抗体2Rh抗体种类5种，即抗D、抗E、抗C、抗c、抗e最常见的是抗D，其余4种依次为抗E、抗c、抗C、抗e。,17,Rh抗原亚型,Du：弱D抗原，通常用抗D血清作凝集实验时为阴性或反应很弱。-D-（缺失型）缺少E/e或既缺E/e,又缺C/c,只表现D。Rhnulll缺少全部Rh抗原,18,其他血型系统P72,19,第二节人类主要组织相容性抗原系统,概念引起移植物排斥反应的抗原称为组织相容性抗原(histocompatibilityantigen)。分类根据其抗原性的强弱和诱发排斥反应程度主要组织相容性抗原(majorhistocompatibilityantigen)次要组织相容性抗原(minorhistocompatibilityantigen)其中能引起快而强排斥应答的抗原系统称为主要组织相容性系统(majorhistocompatibilitysystem,MHS)编码MHs的基因群称为主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex，MHC)。,20,人类主要组织相容性复合物编码基因特点,是免疫功能相关基因最集中、最多的一个区域，功能基因中39.8基因产物均具有免疫功能；是基因密度最高的一个区域，平均每16kh就有一个基因；是多态性最丰富的一个区域；是与疾病关联最为密切的一个区域。,21,(一)HLA基因座的组成,1HLA-I类基因区经典HLAI和非经典的HLAI类基因(1)经典I类基因(HLA-Ia)：分为HLA-A、B、C。(2)非经典I类基因(HLAIb)：包括HLA-E，F和G等基因(3)假基因：已命名的有HLA-H、J、L、K和X。(4)MIC基因：有MICA、MICB、MCC、MICD和MICE2HLA-类基因区DR、DQ、DP、DNA、DOB和DM(1)DR亚区：有一个DRA基因，其产物为DR分子的重链。DRBI是类区域中多态性最丰富的基因。(2)DQ亚区：有5个基因，DQAI和DQBl功能基因，编码HLADQ二条链(3)DP亚区：有4个基因，DPAl和DPB1编码DP抗原3HLA一III类基因区亦称中央区，是人类基因组中密度最大的区域主要是编码补体有关的基因，如C2，C4A，C4B，Hsp基因,22,(二)HLA分子分布,1.经典HLAI类分子表达在几乎所有有核细胞表面，2.非经典HLA-I类分子的表达有别于经典HLA-I类分子。表达量最高的是淋巴细胞，巨噬、树突及中性粒细胞成神经细胞原、母胎表面滋养层细胞均不表达经典HLA-I3.HLA-II血细胞，成熟度增加，HLA抗原递减。HLADR，DQ抗原主要是抗原递呈细胞。中性粒细胞、未致敏的T细胞等均不表达HLA_类分子。HlA-III类分子以可溶性形式存在于血浆中。,23,HLA的遗传特点,1单体型遗传方式在遗传过程中，HLA单体型作为一个完整的遗传单位由亲代传给子代。2.二倍体(diploid)子女的HlA单体型也是一条来自父方，一条来自母方。3.多态性现象多态性是指在一随机婚配的群体中，染色体同一基因座位有两种以上基因型，即可能编码二种以上的产物。4.连锁不平衡HLA各基因并非完全随机地组成单体型，某些基因比其它基因能更多或更少地连锁在一起，从而出现连锁不平衡。某些单体型具有选择优势；群体迁移与混杂；基因随机漂移；近亲繁殖。,24,HLA系统的检测方法,（一）HLA细胞水平分型方法（二）HLA基因水平分型技术,25,HLA的医学应用,1.HLA配型在器官移植中的应用2.HLA与疾病关联强直性脊椎炎与HLA-B27的关联。3.HLA与法医亲子鉴定,26,HLA的生物学功能,参与抗原加工处理天然蛋白质抗原转变成和HLA分子相结合的肽段的过程HLA的限制作用具有同一HLA表型的免疫细胞才能有效地相互作用，称为HLA限制性。参与对免疫应答的遗传控制诱导自身或同种淋巴细胞反应参与T细胞分化过程参与T细胞应答,27,第三节血小板血型系统,血小板抗原分两类一类是与其他表面或组织共有的抗原，称为血小板相关抗原(ABO,HLA)；另一类为血小板特异性抗原。,28,一、血小板血型抗原的结构和特点,(一)ABO系统血型抗原检测方法:凝集法和吸收试验ABO系统:A抗原和B抗原，无RhD抗原检测意义:ABO型不合的血小板输注，血小板寿命将缩短，并应注意浓缩血小板血浆中如果含有高效价的抗A、抗B，可引起溶血性输血反应国内情况:ABO同型血小板输血。,29,(二)HLA血型抗原血小板膜上:HLAA和B位点的抗原，HLA-c?未发现:HLA-DR、DP、DQ等抗原。去除HLA抗原:氯喹或酸溶液在O处理血小板为应用输注酸处理后血小板治疗血小板输注无效性患者提供了重要依据。,30,(三)血小板特异性抗原血小板特异性抗原是通过相应抗体的检出而发现的，具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中的一部分。至今被确认的血小板特异性抗原已有5个血型系统10个抗原，正式命名为HPAI-HPA5。,31,二、血小板血型抗原抗体检测方法,（一）血清学检测方法简易致敏红细胞血小板血清学试验血小板免疫荧光试验单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法免疫印迹技术单克隆抗体酶联免疫吸附试验放射免疫沉淀（二）基因分型技术,32,血小板血型检测的临床应用,(一)血小板输血治疗无效和输血后紫癜1.血小板输注无效性(1)同种异体免疫因素(2)非免疫因素：发热、败血症、脾肿大、弥散性血管内凝血等2.输血后紫瘢3.对具有血小板抗体的患者应作血小板交叉配血试验(二)新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(三）血小板的自身免疫作用,33,第四节血清型P96,1955年，Smithies发现人类的结合珠蛋白具有遗传多态性，从而表明人类血清中的蛋白质和红细胞、白细胞、血小板等血液“有形成分”一样，也具有“型”的差别，被称为血清型。,34,第五节输血前免疫学检查,一、输血前检查的目的和要求目的:选择与患者血型配合的各种血液成分，使之能在患者体内有效地存活无不良反应。要求:输入的红细胞在患者体内必须不溶血，输人的血浆成分不导致患者红细胞破坏也就是使供者与患者之间的血液在免疫血液学方面“相容”，从而达到安全、有效输血的目的。,35,二、输血前检查的内容,1.患者的病史和标本等的检查、核对及处理。2.受血者、献血者AB0和Rh血型鉴定。3.不规则抗体的筛选和鉴定。4.交叉配合试验。5.血小板输注前的抗体检查和配合试验。6.标签和发血。,36,(一)受血者的病史和标本等检查、核对及处理l.病史资料：受血者姓名、种族、临床诊断、输血史、药物史妊娠史，特别是以往输血反应的记录等等。2对标本的严格要求，是安全输血的关键性措施之一。确实无误地来自患者和献血者，并和血液申请单上内容核对、确证。标本必须能代表患者当前的免疫学情况，要防止血样的稀释和溶血使用血浆标本时，应注意排除纤维蛋白原和补体的干扰。标本新鲜，避免因回忆反应而产生的抗体漏检。输血后所有的标本均应妥善保存于28中，至少一周。,37,受血者和供血者ABO和Rh定型,ABO定型：有A抗原者为A型；有B抗原者为B型；A和B抗原都没有者为0型；A和B抗原都有者为AB型。鉴定原则：缺乏某抗原的个体，在其血清内必具有所缺抗原的抗体。而在红细胞上具有抗原时，则其血清内必缺乏对应的抗体。最适反应温度：4，室温,38,ABO定型试验中的常见问题,1)技术和管理错误：标本或试剂搞错；器材不洁；试剂污染或失效；离心过度或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂；结果记录或判断错误；细胞与血清间比例不适当。2)血清异常：血清蛋白引起缗钱状形成3)红细胞致敏：在含高蛋白介质的试剂中，可发生凝集4)异常基因型：A、B抗原可能为弱抗原5)近期输血：6)嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定型时可以出现“混合外观凝集”现象。7)疾病因素导致抗原减弱8)红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集。9)获得性B：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。,39,10)血型物质过高：可中和抗A和抗B定型试剂，必须洗涤红细胞多次。11)近期内进行大量的血浆置换治疗：含有所输供体提供的抗A或抗B抗体，造成反定型错误。12)异常的血浆蛋白：导致缗钱状形成，造成假凝集现象。13)不规则抗体的存在：ABO血型抗体以外的不规则抗体，14)低丙种球蛋白血症：15)药物等因素：可引起红细胞凝集或类似凝集。16)年龄因素：17)防腐剂因素：患者体内可能含有对防腐剂中的成分或对混悬介质的抗体,40,导致Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因：1)受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引起红细胞凝集的因子。2)受检细胞与抗血清孵育的时间过长，含高蛋白的定型试剂会引起缗钱状形成。3)标本抗凝不当，受检过程中出现凝血或小的纤维蛋白凝块，误判为阳性。4)定型血清中含有事先未被检测的其它特异性抗体，造成假阳性定型结果。5)多凝集细胞造成定型的假阳性。6)鉴定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。,41,(2)可能出现假阴性的原因1)受检细胞悬液浓度太高，与抗血清比例失调。2)漏加或错加定型血清。3)定型血清的使用方法错误，没有按说明书进行。4)离心后重悬细胞时，摇动用力过度，摇散微弱的凝集。5)抗血清保存不当，导致失效。,42,(3)弱D型(DU型)血型及其鉴定：与大部分盐水抗D试剂不产生直接凝集反应与部分IgG抗D血型用间接抗球蛋白试验反应阳性Rh阴性确认试验：用三种不同批号IgG抗D定型全部阴性：Rh阴性只要一批为阳性，是DU型临床意义：输给Rh阴性有免疫产生抗D的可能接受Rh阳性，DU型人也有可能产生抗D抗体作为供血者，DU型归类为Rh阳性作为受血者DU型者归类为Rh阴性,43,(三)不规则抗体筛选和鉴定,不规则抗体：是指抗A和抗B以外的血型抗体试剂筛选红细胞D、C、E、c、e、M、N、s、s、P等方法：盐水试验法、白蛋白介质法、低离子强度介质法、聚凝胺法、凝胶法、酶技术、抗球蛋白试验等等,44,不规则抗体鉴定实验包含以下主要内容：(1)自身细胞检查(2)使用试剂细胞中的谱细胞选择不同的谱细胞，可以鉴定不同特异性的抗体(3)当患者体内的同种抗体有二种或二种以上时，采用吸收放散试验。,45,(四)交叉配血试验,交叉配血试验：使患者与献血员血液间没有相对应的抗原、抗体存在。交叉配血试验通常包括：主侧：受血者血清对供者红细胞次侧：受血者红细胞对供血者血清受血者红细胞对受血者血清：目的是显示自身抗体方法：盐水介质法、聚凝胺法、抗球蛋白试验、白蛋白介质、低离子强度介质、凝胶法等方法。注：在交叉配血的任何步骤中均不产生溶血或凝集的结果，供者的血液成分才可以给患者输注。,46,本演示文稿可能包含观众讨论和即席反应。使用PowerPoint可以跟踪演示时的即席反应，在幻灯片放映中，右键单击鼠标请选择“会议记录”选择“即席反应”选项卡必要时输入即席反应单击“确定”撤消此框此动作将自动在演示文稿末尾创建一张即席反应幻灯片，包括您的观点。,献血者受血者红细胞红细胞血清血清,主侧,次侧,47,.,交叉配血中可能出现的一些特殊问题,(1)缗钱状的形成：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、霍奇金病，以及其它表现为血沉加速的一些病例中。(2)交叉配血试验不相容，有未检明的同种抗体的存在。(3)在室温反应中，显示有自身抗体。(4)在抗球蛋白试验中显示有自身抗体。(5)抗体筛选阴性和交叉配血阳性，有未检明的抗体存在。(6)交叉配血试验中，离心力不当，造成假阴性和假阳性。(7)水浴箱温度不正确，造成错误结果。(8)蒸馏水中某些离子可造成不正确的结果。(9)红细胞不正确洗涤和悬浮，使抗球蛋白试验假阴性。(10)血清中如含有溶血性抗体，则相应红细胞被溶解而不是凝集，交叉配血结果应为阳性。,48,需要供给最新鲜的血液的情况：(1)患者接受了大量的血液，需要供给最新鲜的血液;(2)患者自身血容量小，又接受了大量的血;(3)接受定期输血的患者(镰状细胞性贫血及地中海贫血)需要少于7天内相对新鲜的血，以使得输血间隔期延长一些。,49,常规情况下的发血程序1.核对输血申请单;2.核对标本;3.正反定型;4.交叉配血;5.填写配血结果;6.核对血袋;7.签名;8.登记.配血试验是完全必要的:,50,几点重要的建议：在任何紧急情况下都要让有经验的同事了解情况。要让供血工作人员尽早知道这里发生的紧急情况，特别是在你认为需要更多血的时候。始终与患者身边的医务人员保持联系，这样你就能避免一些可能会发生的潜在问题。填好一份详细确切的记录，你必须确保所有临床决定都清楚记录了下来，包括有关的姓名和签字。,51,第六节新生儿溶血病概念:新生儿溶血病一般特指母婴血型不合而引起胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病。特点:时间：始于胎儿时期，原因:可有多种原因引起溶血性疾病后果:溶血病、黄疸甚至死亡,52,.,新生儿溶血病的发病机制,新生儿溶血病起源于胎儿从父亲方面继承了一些母亲没有的红细胞抗原，这些抗原可能遭到母亲免疫抗体的攻击，从而使胎儿红细胞遭到破坏，出现新生儿黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大，甚至死胎、新生儿死亡等溶血病的症状和合并症。,53,(一)能够造成新生儿溶血痛的血型免疫抗体抗体类别：只有IgG类；主要是ABO（抗A、抗B、抗AB）和Rh（抗D，抗E，抗c)原因：以往孕产史或输血等(二)胎儿红细胞对母体免疫系统的刺激经胎盘出血导致母亲体内的Rh抗体效价升高(三)母体对胎儿抗体的转移包括IgG型血型特异性抗体,54,影响BO新生儿溶血病严重程度的因素(1)孕妇体内IgG抗A、抗B以及抗AB抗体浓度：效价64(2)新生儿抗原强弱：红细胞上结合IgG抗体数量(3)IgG亚类：IgG、IgG（IgG4关系不大）。(4)胎盘的作用：吸收IgG速度、亚类、受体的数量和种类(5)血型物质的含量：胎儿体液中可溶性A或B物质,55,影响Rh新生儿溶血病严重程度的因素.孕妇体内存在IgG类Rh抗体，同时胎儿红细胞又存在相应的Rh抗原.母体内IgG类Rh抗体的浓度与Rh新生儿溶血病严重程度关系密切a.有别于ABO新生儿溶血病，b.主要原因是新生儿的Rh抗原已经发育成熟了，结合抗体的能力很强3.输血、妊娠等明显的免疫过程4.孕妇体内Hh抗体的效价及其变化情况5.母婴之间ABO血型是否相合,56,新生儿溶血病的症状,水肿:胸腔积液、腹水、心包积液、心脏扩大、皮肤苍白娩出时面部常因水肿而畸形黄疸:黄疸出现愈早，进程愈快，则病情愈重Rh系HDN黄疸出现较早，出生后数小时即出现，且迅速加深。贫血:神萎、嗜睡、少吃、少哭，严重者发生心力衰竭。肝脾肿大：髓外造血引起，ABO系较轻，Rh系明显胆红素脑病：脑神经基底核结合游离胆红素所致表现为发热、嗜睡、吸吮反射弱、痉挛、肌张力弛缓或强硬症状轻重一般取决于母亲抗体的强度、抗体与红细胞结合程度、胎儿代偿性造血的能力以及免疫功能等诸因素。,57,新生儿溶血病的产前检查,检测方法：夫妇双方的ABO，Rh定型，妻子一方的抗体筛选、抗体效价。,58,新生儿血样本的检查,三项试验直抗试验是用直接抗球蛋白试验的方法，检测新生儿红细胞上是否存在免疫抗体游离试验是检测新生儿血清中的血型抗体释放试验也是检测新生儿红细胞上致敏的血型抗体通过直抗试验可区分ABO和其它血型系统引起的溶血病。直抗阳性越强，病情越重释放试验的特点是敏感度最高,59,预防和治疗新生儿溶血病产前,1.ABO血型不合，一般没有必要进行特殊的预防性措施。IgG抗A或抗B的效价256，或持续升高4倍以上辅以一定的治疗措施。2.Rh血型不合尤其是既往曾娩出过重症Rh溶血病的产妇，一旦实验室检查证实有抗体存在(1)药物治疗：口服黄疸茵陈冲剂(2)