如何实现高效、准确、快捷地测定大批量溶出度样品.doc

如何实现高效、准确、快捷地测定大批量溶出度样品谢沐风上海市食品药品检验所 上海市浦东新区张衡路1500号邮编：201203 邮箱：摘要：固体制剂的多条溶出曲线测定愈发受到关注。如何实现高效、准确、快捷地测定大批量溶出度样品开始困扰分析人员，尤其是在保证测定数据介于允许误差范围的前提下，如何实现事半功倍、而非事倍功半的测定技巧上，本文提出了许多建设性意见，供试验者参考。关键词： 溶出度；高效准确；大批量样品目前，测定固体制剂的多条溶出曲线愈发受到关注 谢沐风. 改善溶出度评价方法，提高固体药物制剂水平. 中国医药工业杂志 2005,7(36),447451, 谢沐风. 溶出度研究系列（一）. 中国药品标准， 2005,6(6):4246., 谢沐风. 溶出度研究系列（二）.中国药品标准，2006,1(7):4851.，其在制剂工艺研发、处方筛选、仿制药生物等效性试验的预评价，以及同一品种不同来源产品间内在品质的差异评估等方面，已逐渐发挥出举足轻重的作用 谢沐风、张启明等. 国外药政部门采用溶出曲线评价口服固体制剂内在品质的情况简介. 中国药事，2008,3(22):257-261., 张启明、谢沐风等. 采用多条溶出曲线评价口服固体制剂的内在质量 中国医药工业杂志，2009,12(40):946-950；由此引发的如何高效、准确、快捷地测定大批量溶出度样品开始困扰分析人员；尤其是在保证测定数据介于允许误差范围的前提下，如何实现事半功倍、而非事倍功半的测定技巧上，本人基于多年工作经验进行了梳理与归纳，撷取以下思路与观点供试验者参考。1. 对于片剂/桨板法的测定采用错时投样对于片剂/桨板法、为使手动取样时不至“手忙脚乱”，采取间隔固定时间（如30秒）的投样方式，这样便可做到平行操作、从容不迫了。2. 手动抽取样品建议采用“1个滤头/1个取样针筒方式”进行多样品抽取。在规定的第一取样时间点前1分钟，抽取第1杯中样品1020ml后，过滤使滤膜吸附饱和，并将滤液沿溶出杯壁缓慢注回，待设定时间到、再抽取所需体积（如HPLC法、12ml即可）过滤，取滤液即可，其后所有样品无需再弃去初滤液，直接收集。至于对样品间污染的担忧，由于针筒内残余量很少，故误差完全可忽略。此处强烈建议：不要采用“分别滤头/分别针筒方式”，既浪费人力和物力，又会给试验带来较大误差。3. 尽可能采用HPLC测定法现今，由于国产辅料质量参差不齐，在紫外处有吸收的品种较多，尤薄膜衣/肠溶衣/糖衣/胶囊壳更甚，导致紫外法测定时、经常会出现溶出度均值高出含量10%50%的情况。同时，由于原研参比制剂辅料一般无法获得，故辅料对测定结果的干扰更将无法评价 谢沐风. 溶出度测定中应注意的若干问题. 中国医药工业杂志，2006,12(37):859-862。综上所述、强烈建议采用HPLC测定法。因为绝大部分辅料皆属惰性、在反相色谱柱上不会出峰，即便出峰保留时间也较短，故皆不会干扰主成分测定。再者、由于HPLC法线性范围宽，样品均可直接进样测定，且随着自动进样设备的普及，省略掉紫外测定吸收度值需在0.200.80、样品必须经稀释的繁琐步骤，大大提高了工作效率。现今，某些厂商的自动溶出仪收集器已可直接接收于液相小瓶内，且由于附带了加垫片的盖儿，可防止采集过程中瓶内液体的挥发，方便易行、快捷便利。如采用紫外法测定，为尽可能排除干扰，强烈建议采用双波长相减法（最大吸收波长与远端无吸收波长）。但如样品是手动操作测定，这将极其繁琐。现今的市售光纤溶出仪，采用了“予以校正的紫外法”；该法在可保证排除辅料干扰的前提下，还是非常值得肯定与推荐的；毕竟快速、便捷地测得一条完整曲线对于指示药品内在品质具有更加深远的意义和实用价值。4. 如何提高HPLC法测定效能4.1 样品处理由于HPLC法测定需样品量少，每一时间点的取样量12ml即可，因此、对于小规格制剂（不超过10mg），建议样品溶液经手动取出后无需过滤，直接置于液相小瓶中、放置0.5小时即可进样测定。因为在取样点位置处，吸取这么小体积携带出辅料的可能性极小，即便有少量存在，静置后使其沉淀，也不会影响到测定，更不会堵塞色谱柱（5-10m粒径的色谱柱完全没问题）。这样，还可省略去溶出量累积计算的繁琐以及过滤时滤膜吸附的担忧，起到“一举多得、事半功倍”之效！该法尤适用于采用自动取样装置时、管路与滤膜有吸附样品；此类多为小规格/难溶制剂，主成分皆进行了微粉化处理，比表面能较大，故易出现该情形。4.2 采用短分析柱现今，市售有25cm长、粒径510m的短分析柱、可大大缩短分析时间，还极大地节约了试剂用量、降低检测成本。4.3 调节流动相、缩短保留时间为加快测定，完全可将已验证、并确定的流动相中有机相比例提高。如此，虽然有杂质与主成分未能分离的担忧，但考虑到样品已被稀释9001000倍（溶出介质体积通常为该体积），在此条件下，存在的微量杂质响应值已微乎其微，即便该杂质峰与主峰重叠，其对于溶出结果的影响亦在误差范围内，可忽略不计。4.4 升高柱温、缩短保留时间升高柱温至4050。一般的反相色谱柱最高承受温度可达60。4.5 加大流速、缩短保留时间流速可根据柱压的限制提高至1.52.0ml/min、以加快测定进程。4.6 调整进样量对于小规格制剂，进样量可根据对照品溶液的精密度予以灵活调节，只要仪器功能许可，100l500l是完全可以的。需强调的是：建议采用溶出量为标示量10%浓度的对照品溶液进行精密度验证，以确保测定低浓度样品时的准确性。对于大规格制剂，可采用减少进样量至5l的方法，以省去稀释繁琐步骤、直接进样测定。4.7 改变测定波长对于小规格制剂，当采用最大吸收波长仍无法满足测定精密度，则可改用吸收更强的末端吸收波长，以增大灵敏度。对于大规格制剂，在几近全部溶出时，由于浓度过大，会出现色谱柱超载或检测器超载而导致峰形不佳之情形，此时可通过改变波长（采用非最大吸收峰）使峰面积变小、从而令色谱峰精密度满足要求。4.8 使用超高速液相如采用超高速液相测定，效果自然更高！但由于色谱柱粒径较小，样品液若不过滤，恐堵塞色谱柱，建议试验时验证后予以酌情考虑。4.9 液相软件编程对于大批量样品的数据处理，一定要充分利用仪器自带的软件功能，绝不建议将每一个峰面积输入Excel软件计算这种费时费力的方式。现今市场上的主流品牌色谱仪皆已具有数据批量处理功能和打印功能（多张图谱结果打印在一张纸上），将这些功能开发掌握后一次性编辑好模板，便可大大提高工作效率。本人曾在5分钟内完成50个样品的数据处理（得到溶出量），每一溶出量数据直接从软件中拷贝出、粘贴至Excel软件中、画出溶出曲线图的全部过程。古语道：“工欲善其事、必先利其器”，所以充分掌握软件功能至关重要！5讨论5.1 溶出度的测定，仅是针对一个或两个主成分峰，故以上多项举措，皆是为提高测定效率所设。5.2 HPLC法检测某一物质的出发点源于有关物质，含量测定色谱条件 谢沐风. 高效液相色