脂代谢检验2015级ppt课件

脂代谢谢紊乱检检 验验 第十章 异常 ？ 正常 ？ 血脂 机体脂类代谢 动脉粥样硬化 冠心病急性事件 血脂：是血浆中脂类的总称 第一节 概述 甘油三酯 (TG) 游离胆固醇 (FC) 胆固醇酯（CE) 总胆固醇(TC) 磷脂 (PL) 游离脂肪酸(FFA) 血脂 (血浆脂类) 血浆脂蛋白（Lp）： 血脂 + 载脂蛋白 脂蛋白结结构示意图图 载脂蛋白 载脂蛋白 载脂蛋白 磷 脂 游离胆固醇 非极性 脂内核 胆固醇酯 甘油三酯 此种结构形式可使脂蛋白颗粒稳定、均匀地分散于血浆。并可与酶及细胞表 面的受体接触，在脂蛋白代谢中起关键作用。 离心法电泳法 血浆脂蛋白的分类 u 1、超速离心法 乳糜微粒（CM） 极低密度脂蛋白（VLDL） 中间密度脂蛋白（IDL） 低密度脂蛋白（LDL） 高密度脂蛋白（HDL） 脂蛋白（a）（Lp(a)） Lp(a)的核心部分由TG、PL、chol、CE等脂质质和 ApoB100组组成，结结构类类似LDL。且含有特异性抗 原成分 Apo(a)。 Lp(a)中1分子ApoB通过过二硫键键与1分子Apo(a)共 价结结合。 Apo(a)与PLG（纤纤溶酶原）具有高度同源性。 肝脏脏是Apo (a)合成的主要场场所。 Lp(a) 是动动脉粥样样硬化的独立危险险因素，且与血 栓形成密切相关。 脂蛋白(a)Lp(a) 10 载载脂蛋白 定义义： 脂蛋白的蛋白部分称为载为载 脂蛋白(Apo)。 种类类： 按1972年Alaupovic建议议的命名方法，用英文字 母顺顺序编码编码 ，分为为ApoA、B、C、D、E、F、 G、H、J等。由于氨基酸组组成的差异，每一型 又可分若干亚亚型。 ApoA ApoB ApoC ApoE 分 类 载体 、运输 联系 、配体 激活 功能 合成部位 肝 小肠 受 体 LDL受体 残粒受体 清道夫受体 CMVLDLIDLLDLHDLLp(a) 电泳位置原点前 -和前 之间 -前- 主要脂质外源性TG 内源性TG内源性TG 、CE CEPLCE、PL 主要载脂蛋白B48B100/C/EB100/EB100AI/A(a)，B100 合成部位 小肠粘膜 细胞 肝细胞血浆血浆 肝、肠、 血浆 肝细胞 功 能 转运外源 性TG 转运内源性 TG 转运内源 性TG、 CE 转运内源 性CE 逆向转运 CE 载脂蛋白分子量合成场所 脂蛋白中分布 染色体定位 生 理 功 能 ApoAI 28KD肝脏、小肠 HDL、CM 1LCAT激活剂，识别HDL受体 ApoA 17 KD 肝脏、小肠 HDL、CM 1LCAT抑制；参可脂质转运 ApoAIV 26 KD 肝脏、小肠 HDL、CM 11 参与胆固醇逆向转运；辅助 激活LPL ApoB100550 KD 肝脏VLDL、IDL、LDL 2 参与VLDL合成与分解；识别 LDL受体 ApoB48275 KD 小肠CM2 参与CM合成与分解；输运外 源性TG ApoCI 7 KD 肝脏CM、VLDL、HDL 19激活LCAT及LPL ApoC 9 KD 肝脏CM、VLDL、HDL 19激活LPL ApoC 9 KD 肝脏CM、VLDL、HDL 11抑制与肝细胞受体结合 ApoD 33 KD 肝脏HDL3参与胆固醇逆向转运 ApoE34 KD 肝脏 CM、VLDL、IDL 、 HDL 19识别LDL受体及肝ApoE受体 Apo(a) 280-800 KD 肝脏LDL、HDL 6抑制纤溶酶原活性 脂蛋白受体 糖蛋白 调节细胞外脂 蛋白的水平 LDL受体 残粒受体 清道夫受体 运送 及 清除 LDL受体：识别ApoB100（ApoE ）对维持细胞和全身胆固 醇平衡起重要作用 识别ApoE，清除血 液循环中CM残粒和 -VLDL残粒 巨噬细胞表面,介导 修饰LDL从血液循环 中清除 胆固醇酯转酯转 运蛋白（CETP） 磷脂转转运蛋白（PTP） 微粒体甘油三酯转酯转 运蛋白（MTP） 脂质转运蛋白-LTP 血浆脂蛋白代谢 脂蛋白代谢以肝脏为中心 HDLHDL代谢代谢：胆固醇逆转运：胆固醇逆转运(RCT)(RCT) VLDL-IDL-LDLVLDL-IDL-LDL代谢代谢：由肝合成：由肝合成 VLDLVLDL, , 再转变为再转变为IDLIDL和和LDL,LDL,并并被肝被肝 或其它器官代谢的过程或其它器官代谢的过程 CMCM代谢代谢：饮食摄入的饮食摄入的ChCh和和TGTG 在小肠中合成在小肠中合成CMCM及其代谢过程及其代谢过程 LPLP 代代 谢谢 外源性代谢外源性代谢 内源性代谢内源性代谢 血 浆 脂 蛋 白 代 谢 总 图 CMVLDLIDLLDLHDL 电泳位置原点前 -和前 之间 - 主要脂质外源性TG 内源性TG内源性TG 、CE CEPL 主要载脂蛋白B48B100/C/EB100/EB100AI/A 合成部位 小肠粘膜 细胞 肝细胞血浆血浆 肝、肠、 血浆 功 能 转运外源 性TG 转运内源性 TG 转运内源 性TG、 CE 转运内源 性CE 逆向转运 CE Lp(a) 是一类独立的由肝脏合成的脂蛋白 高脂血症: TC 或/和 TG 高脂蛋白血症 : CM、VLDL、LDL、HDL 血 浆 脂 蛋 白 代 谢 紊乱 脂质异常血症 高 脂 血 症 的 分 类 临 床 表 型 是 否 继 发 其 他 基 因 分 型 法 Fredrickson (1) 血清(血浆)外观：在4冰箱放置16-24h 后的血清外观 (2) 血脂浓度：血清TG、TC含量 (3) 各种血浆脂蛋白升高程度 依据 表型血浆4过夜外观 TCTGCMVLDLLDL备注 奶油上层, 下层清 易发胰腺炎 a透明易发冠心病 b 透明易发冠心病 奶油上层, 下层混浊 易发冠心病 混浊易发冠心病 奶油上层, 下层混浊 易发胰腺炎 1967年Fredrickson等首先提出高脂蛋白血症的分 类法（5型）。1970年WHO进行部分修改，将其中 型分为a和b两型。 型高脂蛋白血症 a型高脂蛋白血症 b型高脂蛋白血症 型高脂蛋白血症 型高脂蛋白血症 型高脂蛋白血症 4静置过夜， 表面奶油状，下层澄清 血清TG， 血清TC正常或轻度 血清脂蛋白电泳，CM 型高脂蛋白血症 家族性高乳糜微粒血症 脂蛋白酶缺乏症 生 化 特 征 基因突变 LPL CM a高脂蛋白血症 高-脂蛋白血症 高胆固醇血症 生 化 特 征 4冷置试验 血浆外观澄清 血清TC 尤其LDL TG正常 血清脂蛋白电泳 -LP LDLR缺乏或异常 此型临床常见 b型高脂蛋白血症 生 化 特 征 4冷置试验 血清外观澄清或微混 血清TC，TG VLDL和LDL均 血清脂蛋白电泳 -LP，pre-LP 多基因突变 LPL LCAT 此型临床很常见 型高脂蛋白血症 宽-脂蛋白血症 4冷置试验，血清外观混浊 可见一模糊奶油样薄膜。 血清TC ，TG 。 血清脂蛋白电泳， -LP，pre-LP 融合形成宽区带。 生 化 特 征 ApoE异常 VLDL转化和清除缺陷 型高脂蛋白血症 4冷置试验，血清外观可以是 澄清也可呈混浊。 血清TG ，TC正常或稍， VLDL 血清脂蛋白电泳，pre-LP 内源性高三脂酰甘油血症 生 化 特 征 临床表现，多见于中青年，较常见 型高脂蛋白血症 混合性高三酰甘油血症 4冷置试验，血清上层为奶油状， 下层混浊。 血浆中TG ，TC ，VLDL 。 血清脂蛋白电泳，CM ，pre-LP。 内源性和外源性TG清除功能缺陷 生 化 特 征 动脉粥样硬化(AS)是指动脉内膜 因脂质、血液成分的沉积、平滑 肌细胞及胶原纤维增生，并伴有 不同程度坏死及钙化等一类慢性 进行性的病理改变。 最终导致血管壁呈增厚、狭窄，使某些脏器 (尤其是心、脑)供血不足而损伤，甚至危及 生命。 高血压年龄 冠心病家族史 血脂紊乱 吸烟 糖尿病 不可改变的 可改变的 NCEP Circulation 1994;89:13291445. Eur Heart J 1994;15:13001331. Wood D et al. Eur Heart J 1998;19:14341503. 冠心病冠心病 冠心病的主要危险因素 AS主要的危险因素 高脂血症 （高脂蛋白血症） 高血压 吸烟 性别 遗传因素 内分泌因素 高胆固醇血症 引起动脉粥样硬化的脂蛋白 CM 颗粒大，一般 不致AS, 但 易诱发胰腺炎 LDL 相对较小, 是首要的致 AS性脂蛋白 VLDL 升高已被确认为 CHD的危险因子 。 IDL 具有致AS 作用 LP（a) As的独立危险 因子。 动脉粥样硬化 HDL降低 第二节 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定 常规测定项目 ： TC、TG、 HDL-C、LDL-C 分析前的准备： 受试者的准备 标本采集 合格的试剂 校准物的选用 检测方法选择 是否空腹 采血体位 血液浓缩 抗凝剂 标本处理 存储条件 生物学波动 总总胆固醇（total cholesterol，TC） 甘油三酯酯（triglyceride，TG） 高密度脂蛋白-胆固醇 （high dense lipoprotein cholesterol，HDL-C） 低密度脂蛋白-胆固醇 （low dense lipoprotein cholesterol，LDL-C） 载载脂蛋白A（apolipoprotein A，ApoA） 载载脂蛋白B（apolipoprotein B，ApoB） Apo（a） 临床血脂分析项目 TC升高：b型、型 空 腹 血 清 清澈 （TG正常） （TG升高） 测定TC TC正常:血脂正常 TC升高：a 混浊 上层有“奶油”层 （CM升高） 下层清澈：型 下层混浊：型 均匀混浊 （VLDL升高） TC正常：型 测定TC 4过夜 （VLDL） （VLDL正常） 一、血清（浆）静置试验 二、血清（浆）总胆固醇测定 COD-PAP法 CHE COD POD 胆固醇酯 + H2O 胆固醇 游离脂肪酸 胆固醇 O2 4-胆甾烯酮H2O2 2H2O24-AAP酚 醌亚胺（红色化合物）4H2O 方法学评价 简便,快速,无腐蚀性,高，好，宽 CE水解不全，CHE活性受影 响，易受干扰 常规方法 三、血清（浆）三酰甘油测定 检测方法 同位素稀释-质谱法 化学法 酶法（GPO-PAP） 磷酸甘油氧化酶法 乳酸脱氢酶法 甘油氧化酶法 化 学 法 1.抽提 2.皂化 3.氧化 4.显色 变色酸显色法 乙酰丙酮显色法 1、磷酸甘油氧化酶法 GPO-PAP LPL 三酰甘油 + H2O 甘油 3-脂肪酸 甘油 ATP 3-磷酸甘油ADP 3-磷酸甘油O2+2H2O 磷酸二羟丙酮+2H2O2 H2O24-AAP4-氯酚 苯醌亚胺2H2O+HCL GK, Mg2+ POD GPO 甘油 ATP 3-磷酸甘油ADP 3-磷酸甘油O2 磷酸二羟丙酮+H2O2 H2O2氧受体 氧化的受体（不显色）2H2O GK POD GPO 第一步反应 第二步反应 本法酶试剂比较稳定，灵敏度高，线性范围较宽两步法为中华医学会检验分会推荐方法 三酰甘油 + H2O 甘油 3-脂肪酸 甘油 ATP 3-磷酸甘油ADP 3-磷酸甘油O2+2H2O 磷酸二羟丙酮+2H2O2 H2O24-AAP4-氯酚 苯醌亚胺2H2O+HCL GK, Mg2+ POD GPO LPL 2乳酸脱氢酶法 【原理】 LPL 三酰甘油 + H2O 甘油 3-脂肪酸 甘油 ATP 3-磷酸甘油ADP ADP磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸+ATP 丙酮酸+NADH NAD+乳酸 GK, Mg2+ LDH 丙酮酸激酶 3甘油氧化酶法 第一步： FG + O2 甘油醛+ H2O2 H2O2 + EMAE 无色物质 消除游离甘油的影响，3-5min后进行第二步反应： TG + 3H2O 甘油 + 3RCOOH 甘油 + O2 甘油醛+ H2O2 H2O2 +4-AAP+ EMAE 有色物质 EMAE作用与酚相似，是还原剂，但灵敏度比酚高。 甘油氧化酶 POD POD LPL 甘油氧化酶 血清甘油三酯一般随年龄增加而升高， 体重超过标准者往往偏高。 合适范围：1.70mmol/L(150mg/dl)， 升高：1.70mmol/L (150mg/dl)。 升高：（1）原发性高TG血症，包括家族性高TG血症与家族性高脂 （蛋白）血症等。（2）继发性高TG见于糖尿病 糖原贮积症、甲状腺功能减退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药等 降低:甲亢、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤。 【参考区间】 【临床意义】 四、血清（浆）脂蛋白测定 高密度脂蛋白胆固醇测定 n参考方法: 超速离心分离HDL，然后用化学法（ALKB法）或酶法测定其 胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易常握。 沉淀剂：肝素-锰、硫酸葡聚糖-镁、聚乙二醇、磷钨酸-镁 n常规方法: HDL直接测定法 抗体包裹法、酶修饰法、选择性抑制法 HDL-C合适范围：1.04mmol/L (40mg/dl), 0.91mmol/L (35mg/dl)为减低。 流行病学与临床研究证明，HDL-C与冠心病发病呈负相关， HDL-C低于0.9 mmol/L 是冠心病危险因素。HDL-C大于1.55mmol/L 被认为是冠心病的“负”危险因素。 HDL-C下降还多见于脑血管病、 糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血症往往伴以低HDL-C，肥胖者 的HDL-C也多偏低。吸烟可使HDL-C下降，适量饮酒、长期体力劳 动和运动会使HDL-C升高。 【参考值】 【临床意义】 低密度脂蛋白测定 1Friedewald公式法 LDL-CTCHDL-CTG/2.2（以mmol/L为单位时） （血清中存在CM、TG4.56时不适用） 2聚乙烯硫酸盐沉淀法 本法并非对LDL-C作直接测定，而是用聚乙烯硫酸（PVS）选择 性沉淀血清中LDL，再以血清TC减去上清液（含HDL与VLDL）胆 固醇即得LDL-C值。 3直接测定法: 目前各类方法测定的LDL-C值都包括 IDL和LP(a)的chol在内 3.12mmol/L, 升高：3.64mmol/L 【参考值】 【临床意义】 LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危 险因素。由于TC水平同时也受HDL-C水平的影响， 所以最好以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标 。 脂蛋白()测定 n Lp()测定有两类方法 一是以免疫化学原理测定其所含Apo()，结果以 Lp()质量表示，也有以Lp()颗粒数mmol/L表示的。 另一类方法测定其所含的胆固醇，结果以