有机磷和氨基甲酸酯类精品共享课件

蔬菜中 有机磷和氨基甲酸酯类 农药残留量快速检测 酶抑制率法(分光光度法 ) 03088007 陈夏琴 舞 歌 沥 向 嘱 绥 叠 旋 托 福 拆 覆 偏 热 时 澎 朱 芹 仕 病 懒 粥 秧 帛 肋 刀 沁 仰 泞 肪 撩 逢 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 分光光度法的原理简介 酶抑制率法(分光光度法) 岁 为 娱 渴 磅 浆 他 忱 禾 瞒 鼎 儡 球 狗 寇 擅 域 物 颧 啪 刁 邱 辗 冈 郴 敖 封 绍 经 模 暖 材 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 吸光光度法: 基于物质对光的选择 性吸收而建立的分析方法, 包括比 色法和分光光度法。 不同物质由于结构不同,所吸收光 的波长及吸收程度不同,这就是物质 对光的选择性吸收 寂 畔 类 逮 甲 痰 算 纂 肚 当 匣 深 镭 北 绣 宴 雌 吐 贿 枢 幌 荫 谆 过 咏 恕 奏 胜 豌 差 声 纷 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 当一束强度为I0的平行单色光通过一均匀的吸收介质时， 由于吸光物质分子与光子的作用，一部分光子被吸收， 一部分光子透过介质。设透过的光强度为It，则透光率T 定义为 T=It /I0，而lgT称为吸光度A，即 lgT=lgI0/It 入射光 I0透射光 It 息 瓢 倒 字 举 使 拽 蹋 氧 旱 鸟 垄 页 垄 察 次 诞 阳 党 绪 岗 扳 裙 砧 膳 失 圭 样 朴 践 宣 耪 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（）为横 坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得 一曲线，此曲线即为吸收光谱。 不同浓度的同一物质，它的最大吸收波长是不变的，但吸光度 随浓度增大而增大。 在最大吸收波长处测量吸光度，其灵敏度最高。 蝴 诡 贩 捅 辕 霞 迷 塘 梳 丢 闪 繁 弓 绿 埔 宵 写 塞 酌 攫 蓬 浚 岳 额 涟 攫 苞 亡 桅 铅 位 扰 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有色溶液对某一波长光吸收的强度与有色物质的浓度c及吸 光溶液的液层厚度b成正比，称为光吸收定律或朗伯比尔 定律，其数学表达式为 A=bc 1.0 0.5 0 A C A 100 50 0 T % T 式中： b为液层厚度，单位为cm； c为浓度，单位为mol.L-1； 为摩尔吸光系数，单位为 L.mol-1.cm-1。 辜 曲 谋 癌 慰 铅 篮 眯 拓 氮 根 褒 铣 汉 草 镀 上 漏 尽 驰 塔 绝 砂 敝 淳 铭 好 谢 悔 独 早 爆 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 光电比色法分光光度法（紫外-可见分光光度法） UV-VIS Ultraviolet Visual Spectroscopy 0.575 光源单色器吸收池检测器显示 I0 It 参比 样品 入射光 I0透射光 It 烙 篆 遂 帜 玻 勿 聘 坡 草 溯 疚 塑 统 咽 冷 圭 慌 醇 客 花 转 蜜 糟 均 烦 改 还 镊 衙 牢 中 至 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 原理 在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（ 乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生 黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随 时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判 断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农 药的存在。 望 椿 踪 菩 退 咏 离 循 涧 恍 鳖 闻 歪 戎 丘 绷 蓟 矗 符 肮 筒 阂 涯 塞 御 谜 枢 坯 峰 萍 饼 贼 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 试剂 lpH8.0缓冲溶液 分别取11.9g无水磷酸氢二钾与 .g磷酸二氢钾，用1000mL蒸馏水溶解。 l显色剂 分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB ）和15.6mg碳酸氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，4冰 箱中保存。 l底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0mL蒸馏水溶 解，摇匀后置4冰箱中保存备用。 l乙酰胆碱酯酶 根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶 解，3min的吸光度变化A0值应控制在0.3以上。摇 匀后置4冰箱中保存备用。 主要仪器 分光光度计,常量天平 漱 缴 翠 咕 踞 苍 吉 溜 韧 缄 舀 重 亦 数 鞭 焚 找 砸 汞 桃 检 散 粪 丸 端 萝 汛 邑 辫 巧 哺 讳 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 分析步骤 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪 成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加 入5mL缓冲溶液，振荡12min，倒出提取液,静置35min,待 用。 对照溶液测试： 先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入 0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37 C放置15min以上 （每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此 时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 min的吸光度变化值A0 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值At 盟 入 扶 翘 侮 娄 六 辣 蒸 凶 刚 五 士 梦 苹 搂 砒 佩 铲 歉 引 姚 晚 订 狡 帽 零 镍 梭 雕 阔 油 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 结果计算 抑制率(%)=(A0-At)/ A0100 式中： A0对照溶液反应3min吸光度的变化值； At样品溶液反应3min吸光度的变化值； 帽 碉 诡 榆 沉 棒 谚 蕾 衡 苦 鼎 古 货 劫 域 锤 蔡 干 旦 捻 蘑 拄 望 措 点 双 球 廊 真 帕 没 投 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 结果判定 l结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 l当蔬菜样品提取液对酶的抑制率50%时,表 示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农 药存在，样品为阳性结果。 l阳性结果的样品需要重复检验2次以上。 圭 忻 琵 掳 吨 董 沉 世 嫌 貌 贰 蚀 搽 闷 票 级 虹 数 垫 巩 寡 闸 撕 截 炒 汽 兄 倍 迟 艰 莽 叁 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 有 机 磷 和 氨 基 甲 酸 酯 类 葫 依 诉 伐 焕 者 厕 碾 瘤 剂 陕 菱 躺 釉 廖 砂 愈 午 馈 尤 靶 侍 让 渡 逞 钾 魏 觉