实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验.ppt

1、地中海贫血与红细胞渗透脆性试验,地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一 全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）,中国南方不同高发地 区人群携带率 3 24%,地贫的发病率、地域分布及危害,地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见； 广西发病率为20%； 重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担和难以估量的精神负担；,中国南方人群地贫基因携带率,高发区人群遗传负荷评估,定义,地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血）： 由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb（HbA：22）合成

2、降低的一种遗传性血红蛋白病。,其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多表现为慢性进行性溶血性贫血。,地中海贫血的病理生理,-地中海贫血,重型地贫 （HbBarts胎儿水肿综合征） 4个基因都缺失了(-/-) ，在孕后期或出生后即死亡。,重度-地中海贫血,重度-地中海贫血,骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等,重度-地中海贫血,重度-地中海贫血,重度-地中海贫血,重度-地中海贫血,重度-地中海贫血,结 论,1.广西人群地贫基因携带率很高。一方为基因携带者，推荐配偶行基因

3、检测。 2.父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产前诊断。 3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。 4.绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊断，但推荐羊膜腔穿刺。 5.无创性产前诊断是未来发展的方向。,羊膜腔穿刺术,羊膜腔穿刺术,实验室检查,-靶型RBC,红细胞脆性实验 Erythrocyte fragility test,地贫患者,正常人,血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis,chain disappear (0-thal major),chain disappear (HbBarts hydrop fetalis),1,2,3

4、,4,1,2,3,4,肽链分析Peptide chain analyses,单管多重PCR,PCR-ASO,诊断(Diagnosis),临床特点实验室检查父母调查阳性（基因分析）,地中海贫血初筛检查,MCV 3. 5 % ,则为地贫基因携带者,地中海贫血确诊试验,地贫诊断基因芯片(Thalachip); 地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多重PCR ASO寡核苷酸探针点杂交 DNA测序,鉴别诊断(Differential diagnosis),缺铁性贫血 遗传性球形红细胞增多症 传染性肝炎或肝硬化,实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法),【检验原理】 贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变

5、。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）,【主要组成成分】 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）；SG-B母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分：SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4）制成； SG-B母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。,【样品要求】 新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置28保存。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。标本采集后，测试应在三日内完成。,【实验操作】 1、取

6、试管一只，加入A试验液1ml，放37，预热1-2分钟。 2、加入待测抗凝全血10l，立刻混匀，继续放在37保温5分钟。 3、5分钟后，加入B试验液1ml。混匀，3000转/分钟，离心5分钟。 4、将上清液轻轻倒入1.0cm 1.0cm的比色杯中（切勿搅动试管底的红细胞），于530nm波长读取光密度D1（以纯化水作空白对照）。（勿倒掉比色杯中的溶液） 5、向试管中加入C试验液0.5ml，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。 6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波长比色，读取光密度D2。 7、按下列公式计算出溶血率百分比。,溶血 = D1 100 D2 X 1.25,【参考值（参考范围）】 溶血率 65为正常溶血率；55为溶血率降低；（注 56-64为溶血率轻度降低）。 【检验结果的解释】 正常溶血率：指红细胞