课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

1、【目标导航】1.能利用选择培养基分离细菌。2.能运用稀释 涂布平板法测定土壤中分解尿素细菌的数量。,一、研究思路 1课题背景 尿素是一种重要的农业氮肥，但农作物_(能、不能)直 接吸收利用，而是首先通过_将尿素在_的催化下分解为氨之后，才能被植物吸收。 2筛选菌株 微生物筛选的原理：_，同时抑制或阻止其他微生物生长，如可从热泉中将Taq细菌筛选出来。,土壤中的细菌,不能,脲酶,人为提供有利于目的菌株生长的条件,3统计菌落数目 (1)测定微生物数量的常用方法有_和_ _。 (2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目 为了保证结果准确，一般设置_个平板，选择菌落数在_的平板进行计数，并取_。 统计的

2、菌落数往往比活菌的实际数目_，因此，统计结果一般用_而不是用_来表示。 4设置对照 设置对照的主要目的是_ _。,稀释涂布平板法,显微,镜直接计数法,多于3,30300,平均数,少,菌落数,活菌数,排除实验组中非测试因素对实验结,果的影响，提高实验结果的可信度,二、实验设计 1操作步骤：土壤取样_微生物的_。 2土壤取样一般要铲去_，因为绝大多数细菌分布于距地表约_的土壤层。 3样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同，请填写下表：,4微生物的培养与观察 微生物的生长受_的影响，菌落的数目和_是观察的主要内容。,样品的稀释,培养与观察,表层土,38 cm,104、105、106,103、10

3、4、105,102、103、104,温度,特征,三、操作提示 1无菌操作：取土样用的_和盛土样的_在使用前都需要灭菌。称取土样要在_旁进行。稀释样品要在_旁操作。 2做好标记：要对_和试管进行标记，尤其进行系列稀释时要按_顺序将试管排列成行。,小铁铲,信封,火焰,平板,稀释度递增,火焰,四、课题延伸 分解尿素的细菌合成的_将尿素分解成了氨，使培养基的碱性增强。在以_为唯一氮源的培养基中加入_指示剂培养细菌，若指示剂变_，可以初步鉴定该种细菌能够分解_。,尿素,脲酶,酚红,红,尿素,判断正误： (1)选择培养基只允许特定的微生物生长，而抑制或阻止其 他微生物的生长 () (2)对活菌进行计数时，

4、所做的平板越大越好 () (3)设置对照实验可以排除一些非测试因素对实验结果的影 响 () (4)从土壤中取样时，土层越浅越好 () (5)来自土壤的微生物稀释倍数越大越好 () 答案(1)(2)(3)(4)(5),一、选择培养基相关问题分析 1概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 2原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。 例如：用培养基选择能分解尿素的微生物的原理 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源，而

5、不能生长、繁殖，所以用此培养基就能够选择出能分解尿素的微生物。,3方法 (1)在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的“加入”是在培养成分的基础上加入。 (2)改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物。 (3)改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物。,1伊红美蓝培养基为什么不是选择培养基？ 答案伊红美蓝只能显示有无大肠杆菌，不能实现只允许一种微生物生存而抑制或影响其他微生物的生存，所以伊红美蓝培养基不是选择培养基

6、。 2一种自养微生物与多种异养微生物混合在一起，如何将自养微生物选择出来？ 答案用不含有机碳源的培养基进行培养，因为自养微生物可以利用空气中的CO2而异养微生物不可以，所以能在培养基中生存的就是自养微生物。,32013年11月22日凌晨3点，青岛黄岛区发生石油泄漏事件，一些微生物可以有效地分解石油，如何配制选择培养基将这类微生物选择出来？ 答案配制的选择培养基中，石油作为唯一的碳源，然后用这种培养基培养多种微生物，凡是能在该种培养基上生存的就是能分解石油的微生物。,1苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土

7、壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。请回答下列问题。,(1)中培养目的菌株的选择培养基中应加入_作为唯一碳源，中不同浓度碳源的培养基_(填“影响”或“不影响”)细菌的数量，如果要测定中活细菌数量，常采用_法。 (2)为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于_ _； 使用_法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是_ _。,(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？ _ _。,【问题导析】(1)题目中的目的菌株是_，选择培养基与完全培养基相比最大的差别是_不同，选择培养基中_是唯一的碳源。 (2)苯酚的_会对能分解

8、苯酚的细菌产生影响。能否生存取决于细菌_，细菌的分解能力可以通过改变_ _判断出来。 答案(1)苯酚影响稀释涂布平板(2)的培养基没有加入苯酚作为碳源，的培养基加入苯酚作为碳源稀释涂布平板法或平板划线以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作,降解苯酚的细菌,碳源,苯酚,浓度,能否利用苯酚,苯酚,的浓度,解析根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然后再用稀释涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落，再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的水珠落入培养基

9、中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。在设计实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌操作。,【一题多变】 (1)为什么测定活菌的数量不能用平板划线法？ 答案由于在所划的线中，只有最后一次划线的末端才会形成由一个细菌形成的菌落，而其他一些菌落往往由两个细菌或多个细菌繁殖而成，而在计数时一个菌落对应着一个细菌，这样在划线所得的平板中，菌落数目低于活菌的实际数值，所以不能用平板划线法测定活菌数量。 (2)如何判断培养基是否被污染？ 答案在不接种微生物的情况下将培养基在培养箱中进行培养，如果培养基中无菌落出现，则说明没有被污染，如果有菌落出现，则说明培养基被污染。,(3)两位同学在取土壤

10、样品时，一位同学在不含苯酚的土壤中取样，另一位同学在含苯酚的土壤中取样，哪位同学做法较好？ 答案在含有苯酚的土壤中取样较好。,二、统计菌落的数目 1显微镜直接计数法(总菌计数法) (1)原理：此法利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 (2)方法：用计数板计数。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积为1 mm2和高为0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都是由400个小格组成的，如图所示。,(3)计算公式：每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数40010 000

11、稀释倍数 (4)缺点：不能区分细菌的死活。,2间接计数法(活菌计数法) (1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2)计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M。其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 (3)统计方法：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板上菌落数的平均值，然后按公式进行计算。,2自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对

12、大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。 步骤如下： 制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。 为了得到更加准确的结果，应选用_法接种样品。 适宜温度下培养。结果分析：,(1)测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，与事实更加接近的是_。 A一个平板，统计的菌落数是230 B两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240 C三个平板，统计的菌落数分别是400、212和256，取平均 值289 D四个平板，统计的菌落数分别是210、260、240和250， 取平均值240 (2)一同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上菌

13、落数的平均值为212，那么每毫升样品中的菌落数约是(涂布平板时所用的稀释液体积为0.2 mL)_。,(3)用这种方法测定菌体密度时，实际活菌数量要比测得的数量_(多/少)，因为_ _。,【问题导析】(1)因为题中操作的目的需要对大肠杆菌进行数量的测定，所以接种的方法是_。 (2)测定活菌数量时，选择的平板越多误差_，且选择的平板要能形成_个菌落。 (3)所做的多个平板中，如果其中一个平板中菌落的数目 明显_其他几个平板，则说明该平板不符合要求，应_或舍弃。 答案步骤：稀释涂布平板(1)D(2)1.06109个 (3)多当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落,稀释涂布平板法,越小,30300,多于或少于,重做,解析若对大肠杆菌进行计数，则需要用稀释涂布平板法接种样品。(1)应选取多个菌落数相差不大的平板进行计数，取其平均值。(2)2120.21061.06109(个)。(3)因为一个菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。,【一题多变】 (1)如果某同