实验六体外抑菌实验.ppt

1、动物机能学实验2,编者：陈小军,实验内容,实验一 影响药物作用的因素 实验二 药物代谢动力学实验 实验三 处方与药物的配伍禁忌 实验四 中毒与解救试验 实验五 药物对离体肠的影响 实验六 抗微生物药物的体外抑菌实验 实验七 生物碱的提取及其药敏实验 实验八 药物对离体心脏的影响,实验六、抗菌药物的体外抑菌实验,【实验目的】 掌握药敏试验的方法，了解药物对常见菌的作用。 意义： 体外抗菌试验对临床用药具有参考价值。 鉴定新药是否具有抗菌活性。,下一张,主 页,退 出,上一张,耐 药 性,抗 菌 作 用,防治作用与不良反应,药 动 学 过 程,抗 病 力,致 病 力,【实验原理】,下一张,主 页,

2、退 出,上一张,【基本原理】 抗菌活性：是指抗菌药抑制或杀灭病原微生物的能力。 两种测定方法：体外与体内（化学治疗实验）； 评价指标： （1）最低抑菌浓度（MIC）： 能够抑制培养基中细菌生长的最低浓度。 （2）最低杀菌浓度（MBC）： 能够杀灭培养基中细菌的最低浓度。,下一张,主 页,退 出,上一张,【试剂与器材】 细菌菌液（如金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌）、药液（青霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠、四环素）、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、氢氧化钠、高压灭菌器、小试管、试管架、吸管、平皿等。 256/ml青霉素溶液： 药敏试纸的准备：,下一张,主 页,退 出,上一张,【实验步骤】 一

3、、纸片法 以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液（每ml约含3亿个细菌），注意不宜蘸取过多，以刚浸湿整个棉签为度，轻轻地从四个不同方向平行交叉划线，使菌液均匀涂布于整个琼脂平板上。同样方法，也可制作大肠杆菌平板备用。,下一张,主 页,退 出,上一张,二、纸片法 取已经制备好的4种药敏片：青霉素16万u/ml 、链霉素10万u/ml 、10%磺氨嘧啶钠、四环素0.05g / ml ，放置在已接种细菌的琼脂平板表面的不同区域。为了位置间隔准确，最好事先在平皿底用蜡笔作上记号。 将培养皿置37培养24h，观察纸片周围有无抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌效力。样例如下图：,下一张,主 页,退 出,上

4、一张,下一张,主 页,退 出,上一张,下一张,主 页,退 出,上一张,实验结果记录：抑菌直径（mm）,下一张,主 页,退 出,上一张,药物,沙门氏杆菌,二、试管二倍稀释法 取灭菌小试管10支，按照1至10编号，排列于试管架上。按照无菌操作，从第一管到第10管，分别加入牛肉膏汤1ml。用吸管吸取256/ml的青霉素溶液1ml放入第一管，并反复吹匀；接着从第一管吸出1ml放入第二管同样吹匀后吸出1ml放入第三管，依次逐管进行稀释到第管，第10管不加青霉素液，作细菌对照组，第管只加药物，不加菌液，作为药物对照组。,下一张,主 页,退 出,上一张,0.5,0,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0

5、.5,0.5,0.5,葡萄球菌液（ml）,0,弃1,1,1,1,1,1,1,1,1,青霉素（ml）,1,1,1,1,1,1,1,1,1,1,牛肉膏汤（ml）,10,9,8,7,6,5,4,3,2,1,试管号,下一张,主 页,退 出,上一张,1-8，10各加入培养18 h并用牛肉膏汤稀释至5107108 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液0.5ml。放入37培养箱内培养24h后，取出观察细菌生长情况。 以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该细菌的最低抑制浓度（MIC）。 最低杀菌浓度（MBC） 结果记录于下表：,下一张,主 页,退 出,上一张,记录实验结果,下一张,主 页,退 出,上一张,【注意事项】 1. 接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；用过的棉签火焰烧灼后丢弃。 2. 用试管二倍稀释法测MIC值，稀释时注意 稀释的顺序；每次移液前注意清洗吸管。 3. 药敏片之间要间隔适当距离，以免抑菌圈 出现交叉。 4. 四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种药物对一种菌的作用，同组每人所接菌种不同，平皿上做好记号。结果记录时将本组结果综合。,下一张,主 页,退 出,上