课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,一、土壤中尿素分解菌的分离,1、尿素的利用,尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。,2、请从细菌产生的分子的角度说明它能利用尿素的原因,土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶,2、请从培养基成分的角度，设计分离土壤中尿素分解菌的培养基。,以尿素为唯一氮源的培养基,如何证明该培养基起到了选择的作用？请设计实验验证，要求写出简要的实验步骤及预期结果及结论。（要求：实验包含可相互印证的甲、乙两个组）,实验设计：配制等量的基础培养基、以尿素为唯一氮源的培养基，分别命名为甲、乙，将等量的土壤样液接种到甲

2、、乙培养基上，在相同且适宜的条件下培养一段时间，观察并记录甲、乙培养基生长的菌落数目。,预期实验结果：甲培养基生长的菌落数目多于乙培养基,结论：以尿素为唯一氮源的培养基起到了选择的作用。,3、实验室中微生物的筛选原理：,允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。,找规律： 1：判断某个培养基是否具有选择作用时， 应设立_培养基进行对照。 2：判断所使用的培养基是否被杂菌污染 时，应设立_培养基进行空 白对照？,基 础,不接种的,资料分析,在分离土壤中尿素分解菌实验时，A同学从106倍稀释培养基中筛选出150个菌落。但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大

3、约50个菌落。,试分析A同学结果差异的可能原因。,土样不同 培养基污染或操作失误,如何验证上述原因？（实验思路）,方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验,方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,实验设计的原则之一：对照原则,二、土壤中尿素分解菌的计数,1、显微镜直接计数：,利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。,不能区分死菌与活菌等；,缺点：,2.稀释涂布平板法（活菌计数法） 原理：稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。,每克样品中的活菌数(CV)M，请解释该

4、公式的推导过程。,计算公式：,每克样品中的菌株数 =（CV）M,某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的活菌数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34108 B. 2.34109 C. 234 D. 23.4,B,实验设计原则之一：平行重复原则。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。,注意事项 为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。,稀释涂布平板法统计的菌落往往比活菌的实际数目_（低、高）。,原因：平板上观察的一个菌落，可能由两个或多个细胞繁殖而来。,低,1.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。,课题延伸,微生物的培养与观察,运用稀释涂布平板法计数时，不同的微生物稀释倍数不同,培养不同微生物往往需要不同培养温度和培养时间。 细菌：3037培养12d 放线菌：2528培养57