《内吞与内膜系统》PPT课件.ppt

1、植物细胞胞吞作用和内膜系统 的荧光显微观察,植物细胞的吞排作用,细胞伸长生长所需要的物质分别在内质网(如蛋白质、脂类)和高尔基体(细胞壁的一些组分，如果胶、半纤维素)合成，运输小泡胞吐作用分泌至胞外或质膜上，促进新的细胞膜和细胞壁的生长 另一方面，在细胞扩展增长过程中一些过剩的蛋白质、多糖、细胞壁前体物质等细胞成分，需要通过胞吞作用重新回到胞质中使之得以及时回收，循环利用， 即细胞的内吞和外排两个过程保持基本的相对平衡 在整个膜泡吞排作用（cytosis）中，必须有能量的保证。例如，膜泡组装形成过程中的小G蛋白，运输过程中的细胞骨架及相应的马达蛋白，以及膜融合过程中Rab蛋白等均发生GTP或A

2、TP的水解反应。,内膜系统(endomembrane systems),内膜系统是指内质网、高尔基体、囊泡、溶酶体和液泡等细胞器。这些细胞器的膜是相互流动的, 处于动态平衡, 在功能上也是相互协同的。,FM类染料,FM类染料是水溶性的苯乙烯类复合物，对细胞无毒性作用，使用方便 常广泛用于质膜和囊泡等的各类研究常用的染料有FM1-43（Ex510/Em626）和FM4-64（Ex558/Em734）。 FM类染料与质膜及内膜细胞器特异结合后发出高强度的荧光，需要借助胞吞作用才能进入细胞内。 FM4-64在水相中没有荧光，只有插入脂质生物膜后才显示较强的荧光，胞吞回收的囊泡因吞进细胞内部而被荧光标

3、记，利用这种荧光探针能够对细胞的胞吞过程进行有效标记。,FM类染料染色原理,一、材料、试剂,1.材料： 烟草悬浮细胞 2.试剂： 1）烟草悬浮细胞培养基 2）FM4-64 （膜染料） 3）叠氮化钠 4）山梨醇 5）ER Tracker-Blue/White (内质网的特异染料),二、实验步骤,取3个共聚焦专用培养皿，分别编号、； 往中加入198 L 含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和2 L FM4-64； 往中加入178 L含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和20 L山梨醇； 往中加入194 L含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和4 L NaN3；,置显微镜下观察中的荧光分

4、布模式； 观察完毕中的FM4-64后再往中加入4 L ER Blue/white； 往、中分布加入2 L FM4-64，随后先观察中的荧光分布； 接着再观察中的荧光分布模式； 最后再次观察中FM4-64、ER-Blue/White双染下的荧光分布。,内膜系统及内吞作用的荧光标记观察 取3个共聚焦专用培养皿，分别编号、； 往中加入178 L含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和20 L山梨醇； 往中加入194 L含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和4 L NaN3； 往中加入198 L 含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和2 L FM4-64； 置显微镜下观察中的荧光分布模式；

5、观察完毕中的FM4-64后再往中加入4 L ER Blue/white； 往、中分布加入2 L FM4-64，随后先观察中的荧光分布； 接着再观察中的荧光分布模式； 最后再次观察中FM4-64、ER-Blue/White双染下的荧光分布。,三、结果与分析,正常BY2 的FM4-64标记 FM4-64先标记于BY2外周，并随着时间的延长逐渐进入细胞内部。,叠氮化钠处理的的BY2 的FM4-64标记 叠氮化钠能抑制BY2的呼吸作用，进而抑制细胞的内吞作用，导致FM4-64不会进入BY2内部，说明FM4-64是通过内吞作用而不是扩散进入BY2的。,质壁分离的BY2 的FM4-64标记 用山梨醇处理BY2 2-3分钟，使BY2发生质壁分离，证明FM4-64是一种膜染料。,ER tracker-Blue/white和FM4-64双标记 细胞膜显示红色，而一部分细胞器显示紫色（红色蓝色叠加）表明内吞的FM染料部分进入内质网。,实验