单基因高血压课件

1、单基因高血压,1,PPT学习交流,单基因高血压属于继发性高血压：继发性高血压比我们想象的多,有人在三级甲等医学中心检查4429例顽固性高血压发现：10%为继发性高血压， 60岁以上的难治性高血压患者中17%为继发性高血压（Anderson GH Jr, etal. J Hypertens 1994;12:609） 一般估计：继发性高血压患病率6%-20%（难治性高血压）,2,PPT学习交流,309例16-30岁（平均24.05.2岁）青年难治性高血压住院（2002-2008年）患者, 40%可找到病因,青年顽固性高血压有40%能找到原因，解除病因，免得终生服药。 原发性高血压 185例 59.

2、9% 继发性高血压占 124例 40.1% 肾动脉性高血压 88例 28.5% 主动脉缩窄 13例 4.2% 原醛 9例 2.9% 肾实质高血压 5例 1.6% Liddle 综合征 3例 1.0% 其他原因 3例 1.0% 未分类 3例 1.0% 其他原因： 1例白大衣高血压，1例柯兴氏，1例肾素瘤 吴燕，惠汝太等，未发表资料，2010,3,PPT学习交流,盐敏感高血压：50%，对利尿剂敏感 原醛：多，10%-20% 嗜铬细胞瘤：估计中国9万-11万， 少，恶，可治愈,4,PPT学习交流,单基因继发性高血压：至少19个致病基因 9个导致嗜铬细胞瘤的基因 10个导致盐敏感高血压的致病基因 问题

3、：我们没有诊断出来，需要提高 需要把科学进步为患者带来的希望，送给患者 （转化） 患者的最佳利益是我们考虑的唯一利益（Mayo）,5,PPT学习交流,目前的19个高血压致病基因主要定位在肾与肾上腺,目前多数单基因高血压病因：肾离子通道，肾上腺。,6,PPT学习交流,性激素,醛固酮,糖皮质激素,肾上腺皮质病变：增生、 结节 腺瘤，癌（少） John Hoppkins 尸解发现一般人群肾上腺瘤患病 率1.97%,肾上腺髓质：分泌37种升压物质，如儿茶酚胺,7,PPT学习交流,NEJM 361:2153-2164，2009,肾脏处理离子（钠，钾；氯），对水盐代谢、血压调控起到重要作用。 有效利尿降压

4、药的作用部位也主要在肾脏。,肾皮质,肾髓质,8,PPT学习交流,NEDD4L/ENaC 参与血压调控,McCormick JA Physiology 20:134-139, 2005.,NEDD4L主要泛素化 ENaC (NEDD4L-WW 域与 ENaC 亚单位PY 域相互作用)， 泛素化的ENaC被胞饮、分解。 GWAS：原发性高血压、家族性体位性低血压连锁到18号染色体长臂21区（18q21）NEDD4L 位于此区域。,9,PPT学习交流,Sgk1 (serum glucocorticoid-inducible kinase) 与 Akt 磷酸化Nedd4L(Nedd4-2)， 磷酸化的

5、 Nedd4L 可与 14-3-3结合, 抑制 Nedd4L与ENaC的相互作用,Cell Death and Differentiation (2010) 17, 6877,上皮钠通道（ENaC）活性调控,（1）正常,（2）ENaC突变,（3）高醛固酮 高胰岛素,10,PPT学习交流,原醛比率 中国高血压3.4亿 全部高血压中约 6.1%为原醛 2000万 1期高血压有 2% 2期高血压 8% （SBP180-179，DBP100-109） 3期高血压 13% （SBP180, 或DBP110） 难治性高血压 17%-23% 自发低血钾与利尿剂诱发的低血钾高血压患者：非常常见 肾上腺孤立瘤：

6、在普通人群中约2%（报告范围1.1-10%） 多少是由基因突变所致？,原发性醛固酮增多症,11,PPT学习交流,家族性与散发原醛的遗传机制 三种临床类型： FH-1: GRA，嵌合基因突变（CYP11B2/B1) FH-2: 最常见, 但没有发现致病基因；连锁位点7p22 FH-3: KCNJ5突变引起APAs (aldosterone producing adenomas)。其他点突变、遗传重排伴LOH尚待发现、证实。 FHx：其他孟德尔型的原醛可能存在。 最常见的两侧肾上腺增生（BAH，bilateral adrenal hyperplasia), 致病基因突变尚未找到。,12,PPT学习

7、交流,家族与散发原发性醛固酮增多症遗传机制 FH:家族性高醛固酮血症Circ Res 2011;108:1417,FH1：GRA,CYP11B2/B1嵌合基因突变 FH3：致病基因：KCNJ5，编码钾通道Kir3.4， FH2: 连锁在7p22,Copyright American Heart Association,家族性,散发,13,PPT学习交流,诊断步骤,表型(phenotype):提供诊断线索 基因诊断：金标准， 注意外显率(penetrance) 拟表型（phenocopy） 定位：病变定位,14,PPT学习交流,与原发性醛固酮增多症有关的单基因疾病的诊断路径,1，临床表现：可疑原

8、醛 2，筛查试验：ARR（醛固酮/肾素活性比率） 3，确诊试验：4个 4，肿瘤定位，良、恶性：影像 5，鉴别腺瘤还是增生？ 6，两侧还是一侧病变：手术还是保守？ 7，术后随访,15,PPT学习交流,原发性醛固酮增多症的筛查,16,PPT学习交流,表型：高血压-低血钾-血浆肾素活性（PRA）抑制,1，血钾， 24小时尿钾 临床意义 30mEq 存在失钾 25mEq 存在失钾 2，PRA抑制15ng/dl 7ug?,钠负荷后12-14ug,17,PPT学习交流,原醛诊断：筛查/确诊/定位 筛查：清晨血浆肾素活性，醛固酮 禁用安体舒通、依普利酮、大剂量阿米洛利。 其他降压药可不停。 一般疑诊为原醛：

9、 1.ARR20（醛固酮 ng/dl/PRA AI ng/ml/小时） 2.且血浆醛固酮15ng/dl，同时PRA1，若1支持诊断， 如0.4，则有醛固酮增多症的确诊意义。,18,PPT学习交流,原发性醛固酮增多症筛查试验：血浆醛固酮/肾素活性比（ARR）,采血注意 1）纠正低血钾：测血钾，用注射器/针头取血，不要用真空 管，不要握拳 2）抽血后30分钟内离心，分离血球、血浆 3）钠：自由摄入，不限钠 4）停用影响（醛固酮/肾素活性,ARR)药物至少4周： 保钾利尿剂：螺内酯，依普利同，阿米洛利，三甲阿番 失钾利尿剂：双克，氯噻酮 甘草制剂 确定是否口服避孕药，雌激素替代治疗，因为含雌激素的药

10、物可 降低直接肾素浓度，如果测定的是直接肾素浓度而不是血浆肾素 活性时，会出现ARR假阳性。,19,PPT学习交流,如停药有危险，必需控制血压：用缓释异搏定，肼苯哒嗪，a-阻滞剂。 如果停用上述药物所测定的ARR结果没有诊断价值，如果高血压可以用缓释异搏定，肼苯哒嗪或a-阻滞剂控制，停下列列药物至少两周， -阻滞剂，中枢a2-激动剂（可乐宁，a-甲基多巴） ACEI、ARB、肾素抑制剂、二氢吡啶钙拮抗剂 然后再化验。,20,PPT学习交流,确诊原醛过程中对醛固酮测定影响小的降压药： 缓释异搏定：90-120mg bid，可以单用，可以与下列药物合用。 肼苯哒嗪10-12.5mg bid，在缓释

11、异搏定后用，免得心动过速，从小剂量开始。 a-受体阻滞剂：注意监测体位性低血压：先用0.5mg，看有无体位性低血压 哌唑嗪0.5mg-4mg bid， 多沙唑嗪1-4mg qn， 特拉唑嗪（高特灵）1-4mg qn；,21,PPT学习交流,2，取血,上午（mid-morning）让患者活动（坐位，站，或走）至少2小时后取血； 取血：避免血液淤积，避免溶血 血样离心前置于室温送到化验室（血样置于冰浴，无活性肾素会转化为活性型肾素）。 离心后，立即冰冻血浆（-25度以下）,22,PPT学习交流,3，解释结果时，注意考虑下列因素：,年龄：65岁，年龄所致的肾素降低比醛固酮更明显，因此，ARR加大。

12、采血时间，近期饮食状况，体位，站立位置 用药情况 采血方法, 是否有困难 血钾水平 肌酐水平：肾衰可导致ARR假阳性。,23,PPT学习交流,19类影响因素,24,PPT学习交流,原发性醛固酮增多症的确诊 方法-4个,25,PPT学习交流,原发性醛固酮增多症的确诊方法-1：口服NaCl试验,1）禁忌：存在下列情形，禁止做此试验： （1）严重没有控制的高血压（180/110）, （2）肾功不全， （3）心功不全， （4）心律失常， （5）严重低血钾， 2）试验过程中严密监测血压，心脏功能 3）试验：每天口服NaCl 12克（Na 6克，200 mmol/天） 共3天，Day-3早7点开始留24小

13、时尿，day-4早上7am结 束，混匀，计量总尿量，取100ml保存，测定24小时尿 醛固酮。,26,PPT学习交流,原发性醛固酮增多症的确诊方法-1口服NaCl 试验,4）结果判断： （1）基本排除原醛：无肾病时尿醛固酮12ug/24小（33.3nmol/天）； Cleveland 标准：尿醛固酮14ug/24小（38.8nmol/ 天） 放射免疫方法测定尿醛固酮的问题： 尿醛固酮代谢产物，如醛固酮-酮（oxo）葡萄糖醛酸，酸敏感代谢产物，干扰测定结果。 解决方案：HPLC-MS 方法。,27,PPT学习交流,原发性醛固酮增多症的确诊方法-2，静脉盐水负荷试验,1）禁忌：存在下列情形，禁止做

14、次试验： （1）严重没有控制的高血压（180/110）, （2）肾功不全， （3）心功不全， （4）心律失常， （5）严重低血钾， 2）试验过程中严密监测血压，心脏功能,28,PPT学习交流,原发性醛固酮增多症的确诊方法-2静脉盐水负荷试验,3)操作： 7am 卧床歇息1小时后，取血测定血浆肾素活性（或肾素），醛固 酮，皮质醇，血钾，血压，心率； 8am 静脉输2000ml 0.9%NaCl，4小时输完， 12am 抽血测定血浆肾素活性（或肾素），醛固酮，皮质醇，血钾， 血压，心率。 4）结果判断： 基本排除原醛：输2000ml盐水后血浆醛固酮水平10ng/dl 277 pmol/l)；没有被

15、盐水抑制 居间：血浆5-10 ng/dl Intravenous sodium loading should start during the morning, as the circadian rhythm of ACTH will lower PAC in some patients with adenoma and GRA, thereby generating false-negative results.,29,PPT学习交流,原发性醛固酮增多症的确诊方法-3，氟氢可的松抑制试验,氟氢可的松抑制试验：最好住院做，便于监测血钾。 氟氢可的松0.1mg 口服 q6h，服4天。 同时口服缓

16、释钾，保持血钾在4mEq/L, 同时口服缓释钠1.8克 q6h；维持尿钠至少3mmol/kg体重； 第4天，7am，10am 坐位，分别抽血测定血皮质醇，10am 测定坐位（立位）血浆醛固酮，血浆肾素活性。 结果判断： 确诊原醛：day4，10am立位血浆醛固酮6ng/dl, PRA1ng/ml/小时；10am血浆皮质醇7am的皮质醇水平（排除ACTH的影响）。,30,PPT学习交流,原发性醛固酮增多症的确诊方法-4，卡托普利试验,假阴性，模糊结果较多。 采血测定血浆肾素活性，血浆醛固酮，血浆皮质醇； 站或坐位1小时后口服卡托普利25-50mg， 保持坐位2小时，口服卡托普利1小时，2小时分别

17、取血测定血浆肾素活性，血浆醛固酮，血浆皮质醇。 结果判断 正常人：服用卡托普利醛固酮被抑制30%, 原醛患者：血浆醛固酮仍高，血浆肾素活性仍被抑制。 特发性肾上腺增生患者：有时醛固酮可被抑制。,31,PPT学习交流,若患者有下列指征，怀疑GRA，建议做地塞米松抑制试验及遗传检查,1) 原发性醛固酮增多症已确诊，但肾上腺CT等影像检查阴性 2) 有原发性醛固酮增多症家族史 3) 或本人或直系亲属年龄40岁即发生脑血管意外 4) 或本人或直系亲属20岁以前发生高血压 GRA毕竟是一种罕见疾病，不能对所有确诊的原发性醛固酮增多症患者进行地塞米松抑制试验或基因检查。,32,PPT学习交流,地塞米松抑制

18、试验（DST，Dexamethasone suppress test）,地塞米松用量：推荐0.5 mg口服，q6h，共2天。 地塞米松负荷时间过长 (1周)会导致GRA患者肾素-血管紧张素-醛固酮系统被激活，出现假阴性结果。 地塞米松抑制试验不能完全鉴别产生醛固酮的腺瘤与GRA， 文献报告地塞米松剂量28 mg/天， 试验时间：2 天到4周；多数试验使用 Liddle 等推荐的口 服地塞米松0.752.0 mg/天，至少用两天； 在口服地塞米松前及负荷完成后测定血浆醛固酮浓度，同时 测定皮质醇以保证ACTH得到充分抑制。,33,PPT学习交流,FH-1:糖皮质激素可以治疗的醛固酮增多症,Glu

19、cocorticoid remediable aldosteronism (GRA） 假性家族性高醛固酮血症-II型（PHA-II） 编码醛固酮合成酶与编码11-羟化酶的基因位于第8号染色体，同源性95%； GRA患者,11-羟化酶基因的5-调控序列融合到醛固酮合成酶的编码区，杂交基因的产物-醛固酮合成酶ACTH敏感。 杂交基因位于束状带。醛固酮的产生在ACTH调控下。,34,PPT学习交流,嵌合基因CYP11B2/B1,35,PPT学习交流,醛固酮合成：从球状带易位到束状带,性激素,醛固酮,糖皮质激素,36,PPT学习交流,GRA症状：可以没有症状,疲劳，头疼， 高血压，低血钾， 肌肉软弱，

20、麻木，肌肉痉挛，间歇性或暂时性瘫痪， 烦渴， 高血钠 代谢性碱中毒 家族性早发脑血管意外,37,PPT学习交流,1）Southern Blot,2）Long-range PCR S1: CYP11B2 S2:嵌合基因,GRA基因诊断,嵌合基因检查可使诊断敏感性 与特异性均达到100%，高度可 疑的患者应当建议基因诊断。,38,PPT学习交流,GRA治疗,1)地塞米松：0.25mg qd 2)依普利酮：50mg-100mg qd 3)螺内酯：20mg tid 因为GRA患者的高醛固酮与高血压均是ACTH调控的醛固 酮过分泌所致，糖皮质类固醇可以反馈性抑制ACTH分泌。因 此，小剂量糖皮质类固醇（

21、如每天地塞米松0.25mg口服）可 纠正GRA患者的高醛固酮血症及高血压（有时需要8周方见 效）。 另有报告，螺内酯，依普利酮（每天50-100mg）亦有 效。,39,PPT学习交流,FH-2: PHA-II型，地塞米松不能抑制的高血压,低肾素, 高醛固酮，18-oxo皮质醇，18-羟皮质醇，类固醇非常高。 上述表现反应17-羟化酶与醛固酮合成酶氧化反应活跃。地塞米松无效，提示是另一种常染色体遗传性高血压。 基因检查：虽然最常见, 但没有发现致病基因；连锁位点7p22 但是，病理改变：肾上腺特别大，两侧可达82克。 组织学：束状带增生（糖皮质素高？），细胞肥厚，球状带萎缩。,40,PPT学习交

22、流,基本概念复习,41,PPT学习交流,体细胞突变(Somatic mutation ) ：体细胞（Somatic cells)：生物体内除生殖细胞以外的所有细胞。体细胞突变：发生在体细胞内的突变，只影响其子代细胞，不遗传后代。 如辐射伤害：人体有躯体细胞和生殖细胞两类细胞，它们对电离辐射的敏感性和受损后的效应是不同的。电离辐射对机体的损伤其本质是对细胞的灭活作用，当被灭活的细胞达到一定数量时，躯体细胞的损伤会导致人体器官组织发生疾病，最终可能导致人体死亡。躯体细胞一旦死亡，损伤细胞也随之消失了，不会传递给下一代。 胚系突变（germinal mutation，生殖细胞基因突变): 在电离辐射

23、或其他外界因素的影响下，可导致遗传基因发生突变，当生殖细胞中的DNA受到损伤时，后代遗传到父母改变了的基因，导致有缺陷的后代。,42,PPT学习交流,等位基因（allele）：位于同源染色体的同一位置上的基因,若一个座位上的基因以两个以上的状态存 在，便称为复等位基因。 若成对的等位基因中两个成员完全相同， 则该个体对此性状来说成为纯合子。 若两个等位基因各不相同，则该个体对该 性状来说是杂合子。 在杂合子配对中，显性等位基因使隐性等 位基因的性状得不到表现。某些成对基因 的两个成员为共显性的，即彼此间没有显 性和隐性的关系。,43,PPT学习交流,纯合性缺失, 就是染色体上的一对等位基因一起

24、缺失; 杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）： 就是只丢失了一条同源染色体上的基因,另一条还在, 通常如果另一条上的基因突变或者甲基化，使基因不能表达, 如果发生在抑癌基因上就可能导致肿瘤。 基因缺失，就是没有了，不能表达某一蛋白了，或者干脆少了这一个位点。,44,PPT学习交流,找突变的技术：somatic mutation screening-组织（表 观），全基因组-胚突变， 要发现的突变类型： 杂合性缺失（ loss of heterozygosity，LOH)：见于 绝大多数病例 点突变（point mutations） CN-LOH （copy-neu

25、tral LOH）/UPD*拷贝数平衡的杂 合性缺失/单亲源二体（uniparental disomy，UPD） 指一对杂合的等位基因变成纯合状态的现象 UPD:指一个个体的两条等位基因均来自同一个亲本。,45,PPT学习交流,杂合性丢失是指肿瘤基因 组中特定染色体上的某种DNA 多态标记的等位基因片段, 由同一患者正常组织基因组 的两种变成一种，即等位基 因型由杂合子变成纯合子。 而不是丢失了一条同源染色 体的基因。其实这个也就是 肿瘤发生学中的“二次突变学 说” 所说的丢失了一条，一对抑 癌基因丢失了其中之一，变 成了杂合子，这是第一次突变， 一般发生在出生前，后来再发生 第二次突变时，就

26、是杂合子变成 了纯合子，也就是杂合性缺失， 抑癌基因缺失，与肿瘤的发生相 关。,46,PPT学习交流,杂合性缺失的检测 通常用定量荧光检测str（短核苷酸串连重复多态，微卫星）不同重复次数的峰值。 如果两个峰值之前的比例是1:1,说明一对等位基因都存在,未缺失;如果比值不是1:1,且差别比较大,说明可能有杂合性缺失; 如果只有一个峰,有两种可能:1）正常基因组有两个峰, 只一个峰说明有缺失。 2）正常基因组只有一个重合峰, 则看标本的峰是不是将近两倍高,如果是将近两倍高，说明正常, 如果峰值比较低,不到两倍, 那有可能是缺失, 但这样判断不精确, 通常需要换一个位点再看。,47,PPT学习交流

27、,杂合性缺失检测方法：FISH, str（微卫星片断分析，微卫卫星多态位点是一种短核苷酸串连重复多态short tandom repeat,STR）, SNP fish结果判断简洁明了, 但贵, 而且操作难度大。做snp可能需要MGB探针。 Str：一对同源染色体上同一str位点的重复次数不一定相同, pcr扩增str全长,再跑胶, 如果出现两条带, 就说明该str位点是杂合子, 假如你在肿瘤细胞中只看到一条带, 那说明有杂合性缺失。 如果该位点本来就是纯合子, 需要结合其他位点分析, 所以做str需要多个位点。 如果没有正常DNA作对照, 跑出的胶图全是单峰, 不能排除全纯合子。 用测序仪做

28、会简单些, 但原理一样。检测杂合性缺失比较常用的方法snp和str，如果有测序仪，str方法比较方便；如果没有测序仪，pcr后再跑page胶, 麻烦但很便宜。,48,PPT学习交流,T：肿瘤组织DNA；N：远癌肺组织DNA。 EcoR酶切后肿瘤组织2.4?kb杂交带发生了缺失； Bgl酶切后肿瘤组织7.6?kb杂交带发生缺失(如箭头所示)。,nm23-H1等位基因缺失,nm23-H1和nm23-H2探针杂交,49,PPT学习交流,C、D为同一张膜，人组织DNA经Bgl酶切后分别进行了nm23-H1和nm23-H2探针杂交，nm23-H1杂交后(A)，11号为杂合子，含有7.6和2.3?kb杂交

29、带，12号为纯合子，仅有2.3?kb，无7.6?kb杂交带；nm23-H2杂交后(B)，,nm23等位基因缺失：人组织DNA经EcoR酶切后，与nm23-H1探针杂交显示，11号为第一种类型杂交图，含有2.8和2.4?kb杂交带，12号为第二种类型杂交图，含有4.2、2.8和2.4?kb杂交带。 T：肿瘤组织DNA；N：远癌肺组织DNA。 A、B为同一张膜，人组织DNA经EcoR酶切后分别与nm23-H1和nm23-H2探针杂交。 (A)：11号为杂合子，含有4.6、2.4及2.2?kb杂交带，12号为纯合子，仅含4.6及2.2?kb杂交带； (B)只有一种杂交图(21、6.7、3.9?kb三

30、条杂交带)。,A,B,无7.6kb带,无2.2带,50,PPT学习交流,FH-3: KCNJ5突变引起产醛固酮的腺瘤（APAs，aldosterone producing adenomas)； 其他点突变、遗传重排伴LOH（杂合缺失）尚待发现、证实。,51,PPT学习交流,体细胞突变/胚细胞突变？肿瘤组织找突变，外周血基因组DNA找突变,新技术：全外显子测序（whole exome sequencing） 4个腺瘤（APA）的DNA及4个配对未受累对照的腺瘤DNA（pairs from unrelated subjects）, 作者在3个肿瘤组织中查到体细胞KCNJ5 基因突变； 再对6个患者

31、的18个腺瘤（APA） 进行筛查，发现KCNJ5 突变。 只有2个突变（G151R与 L168R）重复出现， 位于影响Kir3.4 钾通道选择性滤过功能部位。 在 FH-3 家系中发现类似的胚细胞突变T158A,位于相同的保守区域。,Science. 2011;331:768772,52,PPT学习交流,Three-dimensional models of the Kir3.1/Kir3.4 channel.,Dibb K M et al. J. Biol. Chem. 2003;278:49537-49548,2003 by American Society for Biochemistr

32、y and Molecular Biology,只有2个突变（G151R与L168R）重复出现，位于影响Kir3.4钾通道选择性滤过功能部位。 T158A（胚性突变）,KCNJ5 编码内向钾电流通道 Kir3.4 以同源4聚体与Kir3.1形成异四聚体存在。,异四聚体,53,PPT学习交流,基因突变的功能研究-下结论,作者用电生理研究方法证明：这些突变导致Kir3.4功能改变：钾通道丧失选择性，增加钠电导，增加膜除极。 肾上腺皮质球状带细胞合成醛固酮,膜除极导致电压-激活的钙通道开放, 调控醛固酮合成的主要信号通路-钙信号通路激活。 根据这些基因结构与突变基因功能研究结果，作者得出以下结论：

33、KCNJ5 突变参与遗传性与获得性醛固酮增多症的发病。KCNJ5 突变导致肾上腺皮质细胞自主增生，足以引起持续性醛固酮分泌，细胞增殖。 K+ Channel Mutations in Adrenal Aldosterone-Producing Adenomas and Hereditary HypertensionChoi et al Science. 2011;331:768772,54,PPT学习交流,KCNJ5 编码钾通道 Kir3.4突变,导致相当一部分APAs（adrenal aldosterone producing adenoma）， 生殖细胞KCNJ5 突变引起罕见常染色体显性

34、、早发型PAL（以两侧肾上腺结节样增生为主，临床常诊为FH-3（family hyperaldosteronism FH） PAL: Primary aldosteronism， idiopathic hyperaldosteronism（BAH 两侧增生）,Science. 2011;331:768772,55,PPT学习交流,解释出乎预料的发现-1：为什么突变相似，体细胞KCNJ5 突变可以导致APA；而KCNJ5胚系突变导致两侧肾上腺增生而没有结节？ 3个携带胚系突变（T158A KCNJ5）的家庭成员,均接受两侧肾上腺切除，显示他们的肾上腺束状带广泛增生，但没没有发现结节。这与KCNJ

35、5基因主要在球状带表达的预期相反。,Science. 2011;331:768772,56,PPT学习交流,解释预期相反的原因-用别人的试验结果,转基因动物研究结果也许能回答这一疑问： 灭活 TASK1 与TASK3 通道的转基因动物（此2个通道主 要负责维持钾电导）。 TASK1 敲除小鼠表型复杂，由于 肾上腺束状带醛固酮合成酶异常表达，出现性别依赖性高 醛固酮血症, 而清除重要的背景钾-电流TASK1/TASK3 双敲除，导致醛固酮自主产生，而肾上腺形态与束没有任何改变。 这些结果提示，除了钙信号系统外，尚存在其他未知的调控 系统被激活方能促进APA患者的球状带细胞自主增生与结节 生成。,

36、Science. 2011;331:768772,57,PPT学习交流,出乎预料的发现-2：,没有肾上腺外表现：Kir3.4及其二聚体的另一半Kir3.1 在其他组织高表达, 特别心脏高表达。近来发现KCNJ5 错义突变可引起房颤或常染色体显性long QT 综合征。 尽管本研究所发现的Kir3.4 突变，导致该离子通道的功能丧失,但本研究所报告的家系没有被发现存在明确的肾上腺外表现。这一基因突变导致的肾上腺外，特别心脏功能改变，需要进一步留意。,58,PPT学习交流,临床特别像原醛，但是，血醛固酮不高，肾上腺没有增生，没有肿瘤。 生化与影像学证据均不支持原醛的诊断,59,PPT学习交流,鉴别

37、诊断 临床像原醛，但是醛固酮不高： （1）Liddle氏综合征， （2）MR受体突变：妊娠加重的高血压（孕酮太多，与盐皮质类固醇受体结合，对安体舒通反应 （3）11-HSD突变：AME-拟盐皮质类固醇增多症 临床像原醛，醛固酮高： （1）GRA,家族性高醛固酮血症-2型， （2）原醛（产生醛固酮的腺瘤-APA，两侧肾上腺增生-BAH或特发）,60,PPT学习交流,鉴别诊断（2）血钾,原醛：血钾低占50%，低血钾是叫晚期的表现血钠偏高；对 利尿剂敏感（极易造成低血钾） 利尿剂、腹泻等也造成低血钾，但同时血钠偏低 血钾高：WNK突变，Gordon,61,PPT学习交流,Liddle 氏综合征,1:

38、 liddle； 4：Gitelman，2a/b：隐/显性PHA1； 5：Gordon；3a/b/c/d: Bartter 氏综合佂I,II.II.IV 型； 降压药作用点,。,TALLH: Henle 氏襻厚升支； DCT：远端集合管； CT：集合管（MR受体）；ROMK2：肾外髓钾通道； NKCC2：钠钾氯交换通道； CLCKB：氯通道复合因子肾B；NCCT：钠氯共转运体。,1: liddle； 4：Gitelman，2a/b：隐/显性PHA1； 5：Gordon；3a/b/c/d: Bartter 氏综合佂I,II.II.IV 型； 降压药作用点,62,PPT学习交流,63,PPT学习交

39、流,Liddle 氏综合征 汪一波, 惠汝太 Clinical Endocrinology 2007,患者22岁，男性，13岁查体发现高血压，2006年来阜外医院就诊, 血压: 160/120mmHg，4个降压药无效。 化验: 血钾：3.05mEq/L, 24小时尿钾：37mmol（高醛固酮时，血钾30mEq） 双肾上腺增强CT：正常； 双肾超声、CT扫描：无异常； PRA：立位 0.03ngAI/ml/小时， 血醛固酮：78.5 pg/ml（参考63.0239.6pg/ml） 24小时尿醛固酮：0.42ug（参考1.08.0ug） 治疗反应：安体舒通160mg/天；两周，血压血钾无反应。,6

40、4,PPT学习交流,Liddle 氏综合征,临床特点： 少年高血压（95有继发原因） 降压药反应不好 低血钾 血尿醛固酮正常 安体舒通治疗无效。 拟诊：非原醛低血钾高血压： （1） Liddle 氏综合征, (2) 妊娠加重的高血压（MR突变）:怀孕，安体舒通加重 （3） AME：拟醛固酮增多症：甘草史，皮质醇高 。,65,PPT学习交流,Liddle 氏综合征是一种罕见的常染色体遗传病，由上皮钠通道C末端- 或-亚单位截短或错义突变所致；上皮钠通道由基因SCNN1B 或SCNN1G编码；这些突变使上皮钠通道不能被胞饮失活，导致钠通道持续激活，钠重吸收增加，高血压，低血钾,66,PPT学习交流

41、,67,PPT学习交流,68,PPT学习交流,我们发现这位患者在 SCNN1B 与SCNN1G 的 C末端583密码子存在AGCTC缺失引起的移码突变（frame-shift mutation）, 在585位引入一个新的终止密码子， 导致PY模体（PY motif）缺失。 汪一波惠汝太 Clinical Endocrinology 2007,69,PPT学习交流,70,PPT学习交流,Liddle 氏综合征,1: liddle； 4：Gitelman，2a/b：隐/显性PHA1； 5：Gordon；3a/b/c/d: Bartter 氏综合佂I,II.II.IV 型； 降压药作用点,。,TAL

42、LH: Henle 氏襻厚升支； DCT：远端集合管； CT：集合管（MR受体）；ROMK2：肾外髓钾通道； NKCC2：钠钾氯交换通道； CLCKB：氯通道复合因子肾B；NCCT：钠氯共转运体。,1: liddle； 4：Gitelman，2a/b：隐/显性PHA1； 5：Gordon；3a/b/c/d: Bartter 氏综合佂I,II.II.IV 型； 降压药作用点,71,PPT学习交流,Liddle 氏综合征药物治疗,氨苯蝶啶，两周后血压维持在130-120/80-70mmHg， 血钾达到4.0mEq/L以上。 阿米洛利：5mg-10mg qd 选择性生育,72,PPT学习交流,(A)

43、盐皮质类固醇受体突变，妊娠家中的高血压(孕酮与MR结合). (B) 11-HSD-2缺乏或遗传性 (AME) 或获得性 (甘草)导致皮质醇升高。刺激MR，高血压, (C) Liddle 综合征. ENaC - 或 -亚单位突变，阻止Nedd4结合，钠通道不能被胞因灭活，持续激活，导致容量型高血压,(D) Gordons 综合征： WNK: (Da) 增加远端集合管NCCT活性, 钠氯重吸收增加，导致容量扩张、高血压; (Db) 抑制 皮质集合管（CCT）的ROMK 活性 ，导致高血钾。MCR：盐皮质受体 NCCT, Na-Cl co-transporter; PT, proximal tubu

44、le; ROMK, renal outer medullary potassium channel; WNK, serine-threonine kinase.,单基因疾病累及远端肾单位的高血压：,73,PPT学习交流,PHAI（假性低醛固酮血症1型） 分为两种类型 （1）常染色体阴性遗传，ENaC突变所致； （2）常染色体显性遗传：盐皮质类固醇受体 （mineralocorticoid receptor，MR）突变 NR3C2 基因突变, NR3C2 编码盐皮质类固醇受体 (MR),74,PPT学习交流,高血钾高血压,75,PPT学习交流,假性低醛固酮2型（PHAII致病基因） 家族性高血钾

45、高血压，Gordon综合征 致病基因突变： WNK4 基因 丝氨酸/苏氨酸激酶家族：叫 with-no-lysine kinases (WNK)1 与 WNK4突变。 WNK4负性调控NaCl共转运体(NCC)。WNK4突变，这种负性调节作用消除，同时WNK4调控肾外髓质钾通道（renal outer medullary potassium，ROMK), ENaCs, Cl转运体（transporters）的表达与功能。,76,PPT学习交流,WNK蛋白激酶调控细胞Na-K-Cl 与 K-Cl共转运体的磷酸化状态，改变Cl 离子流 阳离子/Cl 共转运体家族 (olute arrier fam

46、ily SLC12) 由转运Cl 离子的内源性膜蛋白组成, 转运过程中 Na+ 及或 K+同时被转移。,77,PPT学习交流,WNK4 in the aldosterone signaling pathway,The serum- and glucocorticoid-inducible kinase 1 (SGK1),78,PPT学习交流,假性低醛固酮2型临床表现 1）罕见孟德尔型动脉高血压 2）常染色体显性遗传 3）高血钾（肾功正常） 4）代酸伴高血氯 5）低肾素，血清醛固酮正常-偏低 6）对噻嗪利尿剂高度过敏 7）其他：矮个，牙异常 8）表型变异很大,79,PPT学习交流,低肾素性单基因

47、遗传性高血压（8种）的特点,单基因遗传性高血压 突变基因 突变基因位置 醛固酮 肾素 血钾 遗传方式 治疗 家族性高醛固酮血症型 嵌合CYP11B 18 q21 AD 糖皮质激素 与CYP11B2； 家族性高醛固酮血症型 7p22 AD 安体舒通 11-羟化酶缺乏症 CYP11B 18q21 AR 糖皮质激素 17-羟化酶/17，20裂解酶缺乏症 CYP17 10q24.3 AR 糖皮质激素 盐皮质类固醇受体突变导致妊娠加重的高血压 4q31.1 AD 分娩 拟盐皮质类固醇过多症 HSD11B2 16q22 AR 利尿剂、 安体舒通、 糖皮质激素 Liddle综合征 SCNN1B SCNN1G

48、 16p12 AD 阿米洛利 氨苯喋啶、 Gordon综合征 WNK1WNK4 12p1317q21-22 AD 噻嗪类利尿剂,80,PPT学习交流,嗜铬细胞瘤副神经节瘤：30%的病例由9个致病基因突变所致,Germline突变：30% of cases and are linked to germline mutations in the VHL, RET, NF1, SDHA, SDHB, SDHC, SDHD, SDHAF2 and TMEM127 genes 体细胞突变（Hum Mol Genet. 2011 Aug 9）：新的方法,81,PPT学习交流,副神经节，副节病,交感神经的一

49、个特点是具有副神经节，如肾上腺髓质，此处的节后神经元是神经内分泌细胞，分泌激素(主要是肾上腺素，部分去甲肾上腺素)直接入血，在被运送到靶器官。 副神经节细胞源于副神经节小体，是一种化学感受器，能迅速感受血中的PO2和PCO2；副神经节小体分布在较大血管的外膜下，任何有副神经节小体的部位均可能发生副神经节瘤（亦叫副节病）。 肾上腺外副神经节瘤：1908年Alezais和Peyron首先报道了一组副神经节瘤病，1912年，Pick建议将肾上腺内嗜铬细胞瘤命名嗜铬细胞瘤。,82,PPT学习交流,嗜铬细胞瘤：命名,传统定义：伴有血管活性物质与激素过多引起症状的副神经节瘤统称为嗜铬细胞瘤。 WHO定义：

50、嗜铬细胞瘤指肾上腺髓质肿瘤，其他部位的 副神经节瘤叫副神经节瘤（paraganglioma） 临床实际需要的定义： 1）副神经节瘤（副节病）：仅限于头颈部的副神经节瘤 2）嗜铬细胞瘤：位于肾上腺、肾上腺外、腹部 、胸 腔、盆腔副神经节瘤,83,PPT学习交流,家族遗传性嗜铬细胞瘤,嗜铬细胞瘤，副神经节瘤（Paragangliomas） 20-30%嗜铬细胞瘤是由基因突变所致； 目前所知，至少 50% 产生儿茶酚胺的肿瘤生前没有作出诊断。 10%嗜铬细胞瘤是恶性肿瘤。即使病理诊断，也比较难鉴别，目前恶性的诊断标准：只有存在大的多形性嗜铬细胞瘤远处转移。 以往认为10%的嗜铬细胞瘤（副节病）为基因

51、突变所致， 分子遗传学的进展，发现1/4 -1/3嗜铬细胞瘤（副节病）是 基因突变所致！ 确诊嗜铬细胞瘤,84,PPT学习交流,LOH有两种情况， 一是拷贝数变化的LOH，即两条杂合的等位基因缺失一 条，变成仅剩余一条的纯合状态，这种情况能用CGH芯 片检测到。 另外一种情况是拷贝数平衡的LOH（ Copy-neutral LOH），即一条等位基因被另一条等位基因复制取代， 从而变成纯合状态，即UPD现象，指一个个体的两条等 位基因均来自同一个亲本；这种情况由于拷贝数 没有发生变化，因此不能用传统的CGH芯片检测到。 CGH+SNP芯片，含有部分SNP探针，能判断等位基因杂合 性的变化，因此可

52、以用于检测Copy-neutral LOH。,85,PPT学习交流,最近有人研究202 例/副神经节瘤不包括75个遗传性嗜铬细胞瘤, 技术：表达谱, BAC array comparative genomic hybridization Somatic mutation screening. Gene expression signatures defined the hereditary tumors according to their genotype and notably, led to a complete subseparation between SDHx- and VHL-r

53、elated tumors.,86,PPT学习交流,研究是嗜铬细胞瘤肿瘤组织发现, the systematic characterization of somatic genetic events associated with germline mutations in tumor suppressor genes revealed loss of heterozygosity (LOH) in a majority of cases, but also detected point mutations and copy-neutral LOH. Finally, guided by tr

54、anscriptome classifications and LOH profiles, somatic mutations in VHL or RET genes were identified in 14% of sporadic pheochromocytomas/paragangliomas. Overall, we found a germline or somatic genetic alteration in 45.5% (92/202) of the tumors in this large series of pheochromocytomas/paragangliomas

55、.,87,PPT学习交流,体细胞突变筛查-新的路径,Regarding mutated genes, specific molecular pathways involved in tumorigenesis mechanisms are identified. Altogether, these new findings suggest that somatic mutation analysis is likely to yield important clues for personalizing molecular targeted therapies.,88,PPT学习交流,儿茶酚胺

56、（NE、E）从瘤细胞的释放呈发作性，若在两次发作之间，取血测定儿茶酚胺，则可能会正常。因此，血浆尿儿茶酚胺正常不能作为排除嗜铬细胞瘤的条件。 J ClinEndocrinol.Medlab.1998,83:2175-2185 Endocrinol Pathol.2003,14:193-212,89,PPT学习交流,嗜铬细胞瘤生化诊断的误区,尽管在40多年前就已证明，血浆儿茶酚胺代谢产物 “变肾上腺素与变去甲肾上腺素”是在肿瘤细胞内 生成后释入循环中的，但人们一直认为由循环中的 去甲肾上腺素与肾上腺素(嗜铬细胞瘤细胞释放)转 化而来。因此，对这些代谢产物在嗜铬细胞瘤的诊 断中的重要价值没有引起足

57、够的重视 Endocr Patho.2003，14:193 Ann NYAcad.Sci.2002, 970:29。,90,PPT学习交流,血浆变肾上腺素、变去甲肾上腺素检测受药物的影响较小。,影响HPLC分析变肾上腺素与变去甲肾上腺素的药物主要是醋氨酚，采血样之前至少需停醋氨酚5天。 另外，酚苄明、三环抗抑郁药亦仅使血浆变去甲肾上腺素升高， 而其他降压药：如选择性1受体阻滞剂哌唑嗪，特拉唑嗪，多沙唑嗪，钙拮抗剂，利尿剂，血管紧张素酶抑制剂，血管紧张素受体拮抗剂，不影响血浆变肾上腺素及变去甲肾上腺素。 仅阻滞剂：氨酰心安，倍他乐克，心得安，拉贝洛尔，使血浆肾上腺素升高，而对变肾上腺素无影响。（J.Clin.Endocr.Metab.2003,88:2656-2666）,91,PPT学习交流,血浆变肾上腺素及变去甲肾上腺素的测定可在不停用降压药的情况下进行，增加了患者的安全度，成为近23年国际上极力推荐的生化诊断方法。据报告，这两项指标可把嗜铬细胞瘤的诊断敏感性提高到99%。 虽然我国至少有9万-11万左右嗜铬细胞瘤患者，只有不到10%的病例临床诊断明确。故建立敏感诊断方法迫在眉睫。,92,PPT学习交流,肾上腺髓质细胞表达过多的COMT，把去甲肾上腺素转化为变去甲肾上腺素，把肾上腺素转化成变肾上腺素。 人血浆中91的游离变肾上腺素来自肾上