抗菌药物敏感试验

1、第四章抗菌药物敏感性试验的意义1。可预测的抗菌治疗效果。指导抗菌药物的临床应用。发现或提示细菌耐药机制，帮助临床医生合理使用抗菌药物。监测细菌的持久性，分析耐药菌的变化，预防和控制耐药菌感染的发生和流行，以及抗菌药物的敏感性试验，常用方法：纸片扩散法、微液稀释法、E-TEST法，原理：将含有定量抗菌药物的纸片粘贴在接种有试验菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分并溶解，然后在纸片周围不断扩散形成递减的梯度浓度， 在纸张周围的抑菌浓度范围内抑制试验菌的生长，形成一个无菌生长的透明圈，即抑菌圈。 抑菌圈的大小反映了测试细菌对所测定药物的敏感性，并与药物对测试细菌的最低抑菌浓度呈负相关。柯

2、比-鲍尔法，操作方法：1 .将56左右的无菌M-H琼脂倒入直径90毫米、厚度4毫米的平板中。无菌挑选培养1624小时的血液平板上的45个菌落。3。将其放入无菌生理盐水中，并在麦克法兰0.5号试管中校正其浊度。4。将无菌棉签浸入细菌悬液中，轻轻挤压试管上壁上的棉签，挤出多余的细菌液。用棉签分三个方向均匀擦拭琼脂表面(每次60次)，使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。5。盖上盘子，放在培养箱中培养，310分钟后放在标准的抗生素纸上。6.根据所选菌株选择相应的抗菌纸。肠杆菌科：氨苄西林、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟、环丙沙星、亚胺培南、氨曲南和庆大霉素；铜绿假单胞菌：头孢他啶、庆大霉素

3、、哌拉西林、阿米卡星、环丙沙星、头孢吡肟和亚胺培南；葡萄球菌：头孢西丁、青霉素、红霉素、万古霉素、环丙沙星、庆大霉素和利福平；肠球菌：青霉素、万古霉素、甲氧苄啶/磺胺异恶唑、庆大霉素、环丙沙星、红霉素、氨苄西林不动杆菌：头孢他啶、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、头孢曲松、环丙沙星和米诺环素；洋葱伯克霍尔德菌：头孢他啶、米诺环素、甲氧苄啶/磺胺异恶唑、美罗培南；嗜麦芽窄食单胞菌：甲氧苄啶/磺胺异恶唑、左氧氟沙星、米诺环素；嗜血杆菌：氨苄西林、甲氧苄啶/磺胺异恶唑、头孢他啶、美罗培南、阿奇霉素、环丙沙星、头孢克洛；淋病奈瑟菌：头孢曲松、环丙沙星、青霉素、大观霉素和四环素；肺炎链球

4、菌：红霉素、苯唑西林、甲氧苄啶/磺胺异恶唑、克林霉素、左氧氟沙星、四环素、万古霉素；肺炎链球菌以外的链球菌：红霉素、青霉素、克林霉素、万古霉素、头孢曲松和左氧氟沙星。7.用无菌镊子或分纸器将抗菌纸粘贴在M-H琼脂表面。一旦纸被附上，它就不能被移动；每张抗菌纸的中心距应大于24毫米，纸与板内边缘的距离应大于15毫米，8。孵育351624小时后。根据clsi(临床和实验室标准研究所)标准，取抑菌圈直径，据报道细菌对该抗生素敏感、耐药、耐药和耐药。原理：聚乙烯板含有各种稀释的抗菌药物。在实验过程中，加入100升浓度为105 CFU/毫升的细菌溶液，并盖上盖板。结果观察35 1620小时。无细菌沉淀的

5、井底最低抑菌浓度是抗菌剂对细菌的最低抑制浓度，其敏感性和耐药性用CLSI标准判断。然后取0.01毫升接种环，取肉眼观察的液体进行无菌生长，接种于血琼脂平板上进行二次培养。在35过夜培养后，观察到最低抗菌浓度可杀死99.9个最初种植的细菌，这是细菌的最低杀菌浓度(MBC)。微稀释试验，操作方法：1。抗菌药物的稀释和融化。抗菌药物母液的稀释。将100升不同浓度的抗生素加入到微型聚乙烯微孔板孔中，在不更换吸管的情况下，从低浓度到高浓度加入样品。4。选择1824小时的菌落，放入M-H肉汤中富集46小时。5。准备0.5麦克米伦比浊管，然后用133，360，200稀释，使其最终浓度为105 CFU/毫升。

6、6。用微量取样器将100升接种到96个孔中，并盖上盖子。同时作为阳性和阴性对照。7。手动查看浊度或通过仪器自动解释浊度。根据CLSI标准，据报道细菌对某些抗菌药物敏感、有耐药性并具有中间性。原理：E试纸条是一个5毫米50毫米的无孔试剂载体，其一面固定有一系列预先制备好的呈连续指数增长浓度的稀释抗菌药物，另一面设有读数和鉴别刻度。抗菌药物的梯度可以覆盖20个最低抑菌浓度稀释浓度的宽度范围。将测试条放在接种有细菌的琼脂平板上，孵育过夜后，在测试条周围清晰可见椭圆形抑菌圈。圆边与试条相交处的刻度浓度为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度，其敏感性、耐药性和中介作用按CLSI标准进行判断。E-TEST，1。

7、选择殖民地1620小时，2。用无菌生理盐水配制浊度为0.5麦克米伦浊度管的菌液。3.将无菌棉签浸入细菌悬液中，轻轻挤压试管上壁上的棉签，挤出多余的细菌液。棉签分三个方向均匀涂抹在琼脂表面(每次60次)，使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。4。用镊子将E-TEST试纸条的抗菌药物的一面粘贴到琼脂表面，刻度面朝外，直径为140毫米的平板上可以放置6条，直径为90毫米的平板上只能放置12条。5.孵育：35孵育1624小时。孵育后，形成一个椭圆形的抑菌圈，抑菌圈与试纸条相交处的刻度即为抗菌药物对该细菌的最低抑菌浓度。第九节细菌的分类和命名一、分类原则：细菌的分类原则上可分为传统分类和种属分类。分类

8、方法：(1)人工分类：根据细菌的形态、生理生化特征，分为传统分类和数值分类；(2)系统分类：根据细菌大分子物质(核酸和蛋白质)结构的同源程度进行分类，称为物种分类或自然分类。细菌鉴定和分类的具体方法包括表型分类：根据细菌的形态和生理特征进行分类。也就是说，选择一些稳定的生物学性状，如细菌的形态结构、染色、培养特性、生化反应、抗原性等作为分类标记，为传统分类奠定了基础。分析与分类：利用电泳、色谱、质谱等方法，分析了细菌组成、代谢物组成和图谱的特征，为揭示细菌的表型差异提供了有力的手段。基因型分类：它是分析细菌遗传物质和揭示细菌进化信息的最准确的分类方法。包括DNA碱基组成(G C mol%)、核酸分子杂交(DNA-DNA同源性、DNA-rRNA同源性)和16S rRNA同源性。其中，16S rRNA更为重要，因为它在进化过程中保守稳定，很少发生变化，这是物种分类的重要依据。世界上最权威的细菌分类系统专著伯杰系统细菌学手册(1984)和伯杰鉴定细菌学手册(1994年第9版)反映了细菌种类分类的研究进展。新出版的伯杰系统细菌学手册(第二版，2004年)已收集了16细菌和生物的分类与：纲、门、纲、属、种和类型的分类相同。分类：属，种类型，品系，二，种，类型和植物。种：具有相似生物学特性的种群组成是细菌最重要的分类，差异较大的称为亚种或变种，菌株