病理技术理论与操作手册

常规病理技术

特殊染色技术理论及操作手姆

组织化学技术

免疫组化染色技术

2005年3月

目录

第一篇

常规标本制作程序

第一节组织标本收集取材和固定

一、标本收集和查验程序

二、活检组织取材

（-）取材时必须注意以下问题

（二）各种器官取材的方法

第二节尸体解剖的受理和规则

一、中华医学会规定尸检受理规则

二、尸体解剖须知

三、尸体剖检的一般常识

四、一般尸体解剖的主要步骤与要求

五、尸体剖检的取材和固定

六、科学研究材料的取材

第三节组织固定

（一）固定的作用

（二）固定的目的

（三）固定的注意事项

（四）固定液的使用

第四节病理常规制作程序

一、常规石蜡切片制作法

（一）组织脱水

（二）组织的透明

（三）组织浸蜡

（四）组织块包埋

（五）蜡块的修切

（六）石蜡切片

（七）裱片

（八）烘烤切片

（九）切片的普通染色

（十）苏木素的种类及其配制法

（H—）伊红染液的配制

二、超声波快速石蜡制片法

三、快速石蜡制片法

第五节冰冻切片

（-）冷冻切片的种类

（二）冷冻切片的目的

（三）冷冻切片的制作方法

（四）冷冻切片的快速染色法

（―）MW固定组织

（二）MW快速石蜡制作法

（三）MW技术的特殊染色法

（四）MW技术的免疫组化染色法

第二篇

各种组织特殊染色法

一、胶原纤维染色法

1、VanGieson染色法

2、Masson氏三色染色法

二、网状纤维染色法

1Gomorfs氨银法

2、Godon和Swet氏法

3、Wilder氏法

4、Foot氏法

三、弹性纤维染色法

1、Weigert氏雷锁辛品红法

2、Gomori醛品红法

3、Unna地衣红技术

4、VerhofF氏酒精苏木素技术

四、横纹肌染色法

1、磷鸽酸苏木素染色法(PTAH)

2、Masson氏法染色法

3、VanGieson氏法

五、基底膜的显示

1、六氨银显示法

2、PAS显示法

3、Masson氏三色染色法

4、AFOG法

5、六氨银——AFOG联合染色法

六、纤维素染色法

1、MSB的改良法

2、PTAH法

七、细菌染色法

1、Warthin-Satamy氏法显示幽门螺杆菌

2、甲苯胺蓝染色法

3、Wade-Fite氏抗酸菌染色法

4、Grocott-Gomori氏六氨银改良法显示真菌

5、六氨银改良法显示组织胞浆菌

八、病毒包涵体染色法

1、Macchiaello氏改良法显示SARS病毒包涵体

2、Giemsa法显示多种病毒涵体

3、伊红和甲基蓝显示合胞和巨细胞病毒包涵体

九、淀粉样物的染色法

1、甲基紫法

2、改良的刚果红甲醇法

十、神经系统染色技术

（一）苏木素VG法染中枢神经

（二）神经细胞尼氏体染色

（三）改良的Masland、Glees方法

（四）改良的Palmgren氏法染神经纤维

（五）改良的Eger飞氏法染变性轴索

（六）改良的Loyez氏法染神经髓鞘

第三篇

组织化学及其显示法

一、色素显示法

1、硫酸亚铁法

2、MassonFontana氨银法

二、含铁血黄素显示法

1、Peris亚铁氟化钾法

三、脂褐素显示法

1、PAS法

2、Schmorl氏法

四、钙盐显示法

1、硝酸银法

五、脂类染色法

1、苏丹山・IV联合法

2、油红法

3、苏丹黑B法

4、Schultz法显示胆固醇与胆固醇酯

六、糖类

1、PAS显示法

2、AB法

3、ABPAS

七、核酸

1、Feulgen显示DNA法

2、核仁组成区和糖多糖复合显示法

3、粘多糖和核仁组成区双染法

八、酶组织化学

1、改良的Gomori氏硝酸铅法

2、改良的Gomori氏硝酸铅法

3、Gomoris钙钻法

4、a-磷酸祭脂法

5、磷酸奈酯AS-TR（或AS-BJ）法

6、酸、碱性磷酸酶双染色法

第四篇

免疫组织化学技术

一、免疫组织化学的意义

二、免疫组织化学技术的发展概况

（一）免疫荧光细胞化学技术

（二）免疫酶细胞化学技术

（三）非标记抗体酶法

（四）亲和细胞化学法

（五）碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法

（六）免疫金银法

（七）LSAB法

（八）EnVision™Systems法

（九）真空负压LSAB法

三、常用免疫组织化学染色方法

（―）ABC法

（二）LSAB法

（三）真空负压LSAB法

（四）Envision™Systems法

（五）免疫组化双染色法（I）

（六）免疫组化双染色法（II）

（七）细胞培养片免疫荧光染色法

（A）真空负压、免疫荧光染色法染细胞培养片

四、抗原修复

（一）为什么要进行抗原修复

（二）用什么方法进行抗原修复

1、真空负压抗原修复法

2、微波辐射抗原修复法

3、高压抗原修复法

4、隔水热抗原修复法

5、电炉加热抗原修复法

（三）抗原修复必须注意的问题

五、作好免疫组化染色必须注意的问题

六、免疫组化阳性病例的评判及相关问题

七、常用抗体的应用范围及选用

（一）常用上皮细胞及肿瘤标记物

（二）常用的时间叶源性组织及其肿瘤的检测抗体

（三）肌组织及其相关肿瘤的常用抗体

（四）淋巴组织及相关肿瘤检测的常用抗体

（五）神经和神经内分泌及其相关肿瘤抗体

（六）其它

八、免疫组织化学在乳腺癌中的应用

第一篇常规标本制作程序

第一节组织标本收集取材固定

一，标本收集和查验程序。

对于所有送检的标本，必须认真执行查验程序，方能进入下一程

序，其主要程序是：

1,收集标本时：要仔细查对申请单上的姓名与标本上

的姓名，序号是否一致；标本的件数与申请单是否相符;

标本是否用固定液固定过。

2,标本经上述验收后，进行编号登记，以防错乱。编

号按年份和流水号两种方法，如果为了今后的查找较为

方便，按年份编号为较好。

二，活检组织取材：在外科送检的诸多材料中，对于每

一例病例的材料，大小都不一样，但对于较大的标本，不可

能都对其进行制作切片，因此，选择适合于病理技术制作，

适合于病理诊断且有利于回顾性研究等各方面的材料，是病

理活检的关键，通常把这过程称为取材。

（一）取材时必须注意以下问题：

①取出所有送检的标本，量其大小，称其重量，描写其

色泽，质地，形状和肉眼所见表面情况。当标本切开后，

应详细描写其切面的颜色，硬度，病变部位等，必要时绘

图说明。

②对于细小标本如肺支气管穿刺物标本胃肠镜活检标本

山等，应将其染上伊红颜色后，用擦镜纸或特别脱水袋将

其包上或装上，以防漏出脱水盒的小孔。

③对于有传染性的标本，让标本彻底固定后再取材。如

结核瘤标本等。

④对于罕见特殊的标本，应小心保存好，在不影响诊断的

情况下，尽量保存好大体标本。以利于教学标本，陈列标本的收集。

⑤边取材边固定，组织标本较多的单位，取材经常要花

上儿个小时，如果从下午2：30开始取材，至5：30完成，那么先取

的材料就可以多固定儿个小时一，如此可以防止固定时间不足，同时也

可防止组织发生自溶。

⑥对于骨髓穿刺的组织，可先用10%硝酸浸泡30分钟

左右，然后再与其它组织进行处理。

⑦骨组织和钙化组织，应彻底脱钙后，方能进行制作。

具体用大头针能顺利扎入骨组织则可。

⑧活检组织取材，不能太厚，以不超过2mm为宜。以

防脱水不彻底，不利于制片。

⑨每取完一例标本后，所有的工具如刀，剪，盘镶，

切板等，必须用水冲洗干净，以免污染，混淆于其它病例。

⑩组织取完即刻放入打印好号码的盒内，放入固定液

中固定。

（二）各种器官及其肿瘤取材的方法

1、乳腺：

纤维腺瘤：肉眼观察其形状、体积、包膜是否完整，切面是否

均匀，有无坏死，取材：肿瘤连包膜1-3块（即周边组织1块，

包膜与周边组织1块，如果肿瘤不大，上述几种即周边包膜和肿

瘤可取1块）。

乳腺癌：体积，皮肤颜色，有无水肿或变硬，肿大淋巴结，数量,

组别，硬度，及切面情况。沿乳腺的最长径经过乳头切开，观察

肿瘤的面积，颜色，硬度及浸润情况等。取材：乳头及其下组织,

肿瘤及肿瘤交界处，肿瘤下胸肌，全部淋巴结（注明组别），根据

各种病变的情况，确定取材的块数，如切缘、包膜、肿瘤等均应

取到各组淋巴结分别全部切材。

2、食管癌：

切除的食管长度及周径，管壁有无水肿或粘连，肿大淋巴结的

位置，大小，硬度及数目。沿肿瘤对侧纵形切开，肿瘤大小及形

状。取材：肿瘤上下交界处各取一块。或沿长轴通过肿瘤全径取

出大切片或分成数段，全部淋巴结，分别切块包埋

3、胃溃疡及胃癌：

全胃或部分切除，大弯及小弯长度，肿大淋巴结的部位、大小，

硬度及数目，病变处相应浆膜面有何变化。一般沿大弯剪开，观

察病变大小，深度，边缘及周围变化，如为癌瘤，属何种类型，

与大小切端的距离。取材：病变及与其交界处胃壁全层的胃组织

（尽量侧重于小弯，并注意沿长轴切取组织块），上下切端组织，

肿大的淋巴结（注明组别）

4、阑尾：一般于近、中、远三段各取一组织块，远端一块尽量靠

近尖端，以免遗漏尖癌。已被剖开者，沿纵轴取组织块，如检查

时不能发现病变所在，需多做断面，以寻觅病变部位和取组织块。

5、肠癌：切除肠管的长度，肿瘤生长部位、大小、局部浆膜等

情况。如为十二指肠癌，则应注意与特氏壶腹的关系。取材：肿

瘤及交界处肠壁全层组织，上下切端，肿大的淋巴结。

6、肠梗阻：梗阻部位、长度、直径及表面变化（颜色、水肿、充

血、出血）；检查肠系膜的变化，沿病变血管解剖，作多数横断

面，观察血管壁是否变厚，寻找栓塞的起止部位；肠粘膜有无溃

疡。取材：病变最显著处及肠的两端各切一块，病变血管（带些

系膜）各切一块。

7、肠套叠：注意套叠部位及套叠关系，寻找阑尾，肠壁是否增

厚及变硬，以手指放入小肠为引导，沿肠系膜剪开，寻找有无原

发病变（在套入部位的最前端寻找有无肿瘤、溃疡等到变化）。切

面观察各层肠壁的厚度、水肿、充血、出血、坏死及硬变等到情

况。取材：原发病变（如肿块，溃疡等）。有变化的肠壁厚度，阑

尾，肿大淋巴结。

8、肠结核：外部有无粘连，白色斑块、结节、狭窄，病变上下的

肠段有何改变，有无淋巴结肿大。沿病变对侧切开，观察病变情

况（溃疡、突起、体积、有无息肉样改变，肠道是否变为狭窄或

增厚）。取材：病变部，上下切缘，肿大的淋巴结。

9、肝活体组织：大小、形状、颜色、表面及切面有无结节状或纤

维组织增生，有无灰白色结节等。取材：包含各病变的组织，如

标本较小，全部切取。

10、阴茎癌：肿瘤生长的部位，大小，溃烂及向阴茎浸润情况，

切端与肿瘤明显浸润处的距离。纵切（通过尿管）观察切面情况。

取材：肿瘤切面一块，阴茎截除端一块。

11、肾结核：注入福尔马林固定一周再切，体积，表面是否光滑,

有无粘连、灰白色小结节，输尿管长度，直径，及硬度。沿输尿

管及肾盂切开，肾盂是否扩张，切面破坏情况，粘膜变化，主质

变化，乳头情况，（注明哪一个）；输尿管厚度，有否梗塞，粘膜

情况。取材：肾主质包括病变及交界处，输尿管及切端。

12、肾盂积水：先抽去积液，再注入固定液后再检查。肾体积、

表面性状（色泽、平滑否、结节、粘连）。沿肾、肾盂及输尿管切

开，注意阻塞部位及原因。观察肾盏、肾盂及输尿管扩张情况，

肾实质厚度。取材：肾实质厚处及薄处各取一块，输尿管各取一

块。

13、肾癌：肾及肿瘤之体积及重量，肿瘤部位及与肾的关系，表

面有无水肿或粘连，有无肿大淋巴结。切面：肿瘤位置、形状、

大小、颜色、包膜、坏死、出血、囊性变，肾盂与输尿管中有无

蔓延。取材：肿瘤包括其旁的正常组织，肿瘤以外的肾组织、输

尿管。

14、膀胱癌：全部或部代分膀胱切除，除非癌瘤位于前侧，一般

沿前侧切开，肿瘤位置，与输尿管中及膀胱的关系、体积、生长

情况及浸润情况，有无淋巴结（大小，硬度，切面变化）。取材：

沿纵轴方向取材。肿瘤及膀胱壁全层组织；乳头状瘤应包括蒂部

组织，三角区组织。

15、前列腺：形态，体积，颜色，硬度，包膜情况。切面：颜色,

质均匀否，有无坏死，出血，囊性变。作多个与尿道垂直的平行

切面观察。取材：颜色均匀处取一块，不均匀时在发黄处尽量多

切，包含尿道。

16、肺叶或肺段：先自支气管注入福尔马林固定。检察前应观察

X线片。病变与支气管有关者，沿支气管切开；病变不沿支气管

者，可作书页状切开：

①肺癌：位置在支气管哪一支，距切端多远，大小，形状,

质地是否均匀，有无坏死、空洞、边缘有无纤维组织围绕

或不规则浸润，是否压迫支气管干，肺门淋巴结情况。取

材：癌组织，癌与正常组织的交界处，支气管断端，肺门

或局部淋巴结。

②支气管扩张：新鲜时剪开，系囊形或圆柱形（管形）扩

张，属哪级支气管，扩张的支气管之直径，或宽度，管壁

厚度，颜色周围组织有何变化，粘膜光滑或呈皱纹，管腔

有无脓液，是否穿破形成肺脓肿。取材：扩张的支气管，

支气管周围发炎组织，脓肿壁。

③肺脓肿：部位、直径、单腔或多腔，其中脓液性质及气

味，有无悬梁状血管，腔壁光滑度，厚度，是否与支气管

相通，有无散布的小脓肿，有无支气管扩张，支气管中有

无异物，脓肿内有无硫磺样颗粒。取材：脓肿壁，与脓肿

有关的支气管，肺组织。

④肺结核空洞：部位，直径，单腔或多腔，腔中有无脓液、

干革命酷样坏死、悬梁状血管，空洞壁厚度，及硬度，腔

内为肉芽或纤维组织，寻找与支气管连通的屡管及所散播

的病变，肺门淋巴结情况。取材：空洞壁，散播的病变，

肺门淋巴结。

⑤肺囊肿：数目，部位，直径，囊肿壁光滑度及厚度，与

支气管的关系，收集囊内液体检查其性状。取材：囊肿壁

及其旁肺组织，如为包虫病，则应在包虫囊的液体中寻找

子囊及幼虫头节（离心后）。

17、脾脏：重量，大小、颜色，表面有否粘连，然后沿脾长轴

作多个平行切开，在切面上看包膜及脾髓情况。

①淤血性脾肿大或脾功能亢进，注意静脉内有无血栓，静

脉壁有无变化，有无梗死，切面上有无含铁小结节。

②脾破裂：注意踊裂部位，长度，有无血凝块充填破裂口。

取材：带有包膜的脾组织，脾中心组织，脾门附近包括较大的

血管，如有副脾，淋巴结各一块，脾破裂应包括裂吕充物。

18、淋巴结：大小，形状，包膜情况，成群者注意相互间粘连

情况，切面的颜色，均匀度，质地，包膜，等情况。取材：整

个短轴切面，互相粘连者包括粘连部位。

19、骨肿瘤：检查前先看其X片。有皮肤软组织者将与肿瘤

无关部剔除，然后锯开，有条件者，可与锯开前摄X线片以

作比较。

检查肿瘤体积及形状，切面颜色，硬度，出血，坏死，囊变，

何处为原发，与骨膜，骨皮质及骨髓之间关系，有无破坏情

况，有无包膜，其厚度及硬度，无包膜者注意其对软组织浸润

情况。取材：肿瘤及与组织交界处，骨破坏处，软组织浸润处。

20、甲状腺：重量，大小，形状，有无结节，寻找背面有无甲

状旁腺，切面质地是否均匀，含胶质状况，有无结节，出血，

坏死，钙化，囊变等，有无细小灰白色疤痕样病变。

甲状腺腺瘤与腺癌：肿瘤部位，大小，包膜完整否，切面质

地，有无出血，坏死，钙化，囊性变及其内容物，有无乳头或

绒毛状改变，肿瘤以外组织有无灰白色小节。

取材：最大面积，切成数块全作切片，如为根治术，要取全部

淋巴结。

21、刮宫或阴道排出物标志：疑有妊娠者，须仔细寻找有无胎

盘绒毛，眼观不能判断时一，须取组织块，尤应注意检查血凝块。

22、子宫标本：除按要求检查病变外，如须研究宫颈癌，可与

子宫颈12点，3点，6点，9点处取宫颈及宫颈内膜交界处组

织，必要时取其他各点组织。

23、卵巢肿瘤：形状大小，较大者应称其重量，表面色泽，光

滑度，与输卵管的关系，有无粘连，囊性者自膨大部远端剪开,

查囊与输卵管腔是否相通，单房或多房，内壁光滑度，有无质

或乳头状生长区，乳头脆性，囊内容物性质。实性肿瘤切面色

泽、硬度，有无出血，坏死，变性等。

取材：囊性瘤取囊壁较厚处，实质，突起处，囊与输卵管

相连处及输卵管。实性瘤取边缘及中央不同结构组织及输卵

管。

24、胎盘：形状，大小，重量，母体面绒毛有无缺损、出血、

钙化、变性坏死，及其范围大小，羊膜和血管情况，脐带长度,

直径，有无扭转打结、血管栓塞等。

取材：母体面、子体面脐带各一块。

25、瘦管或窦道组织：应作多数横断面检查，适当取材。

26、眼球标本：标本固定后，先经缓慢脱水至今95%酒精，然

后切开，除病变部位特殊取材外，一般取水平切面，通过视神

经和瞳孔。要求保存眼球队的完整性，如结膜、视神经、黄斑

及晶状体等，都应完整无缺，切时刀刃锐利，以免人为地损坏

眼球结构。若须行火棉胶切片，而本单位无条件时，可送到有

关单位检查。

27、软组织肿瘤标本：部位、大小、形状、色泽、表面有无包

膜，完整否，硬度，切面有无出血、坏死、囊性变等，与周围

组织的关系，切面暴露最大面，必要时多作儿个平行切面。

取材：肿瘤，周围组织，切端组织。

28、其它标本：依上述原则检查及取材，如标本有特殊情况，

则依其特点处理。⑵

第二节尸体解剖的受理和规则

一、中华学会尸检受理规则

1、必须遵照国家有关规定受理尸检；

2、受理尸检范围包括①普通病理尸检；②涉及医、患争议的尸

检（由卫生行政主管部门指定的尸检机构实施）。

3、受理尸检部门应是具备独立尸检能力的①医院病理科；②医

学院校的病理学教研室；经医政部门注册的病理学诊断中心。

4、主持尸检（主检）人员应是接受过尸检训练、具有中级以上

专业职称的病理学医师或病理学教师，必要时，邀请法医参与尸检。

5、申请或委托尸检方，包括①有关医院；②卫生行政部门；③

司法机关；④死者的亲属或代理人；⑤被受理尸检方认可的其他申请

或委托方。

6、申请或委托尸检方必须向受理尸检方递交有关资料。

（1）死者的死亡证明。

（2）有申请或委托主当事人签名、负责人签名和加盖委托单位

公章的尸检申请书委托书。

（3）逐项认真填写的尸检申请书（包括死者的临床资料要点和

其他需要说明的情况）。

7、互者亲属或代理人签署说明尸检有关事项的《死者亲属或代

理人委托尸检知情同意书》（由受理尸检方制定），并确认以下事项。

（1）同意有关受理尸检机构对死者进行尸检。

（2）授权主持尸检人员根据实际需要确定尸检的术式、范围、

脏器或组织的取留及其处理方式。

(3)主持尸检人员负责遗传尸检后的体表切口缝合，不参与尸检后

遗体的其它安置事项。

(4)明确新生儿和围生期胎儿尸检后的尸体处理方法。

(5)同意对尸检过程进行必要的摄影、录像，并确认是否同意

教学示教。

(6)尸检病理学诊断报告书可提供死者所患的主要疾病和死因;

难以做出明确结论时，可仅提交病理描述性尸检报告。

(7)尸检病理学诊断报告书发送给委托尸检方。

(8)下列情况的尸检可不受理。

(1)委托尸检手续不完备者(包括未按规则交纳尸检费用者)。

(2)拒签《死者亲属或代理人委托尸检知情同意书》者《包括

对于尸检的术式、范围、脏器或组织的取留及其处理方式等持有异议,

从而影响尸检实施和尸检结论形成者》。

(3)委托尸检方与受理尸检方就涉及尸检的某些重要问题未能

达到协议者。

(4)死者死亡超过48h未经冷冻或冷冻超过7d者。

(5)疑因或确因烈性传染病死亡的病例，尸检方不具备相应尸

检设施条件者。

(6)因其他情况不能受理者⑶。

二、尸体解剖须知

1,一般尸体解剖的病例由医生填写正规的尸体解剖申请单，并由

家属签名同意解剖。

2,医教部加盖同意解剖公章。

3,医疗纠纷病例，必须有医疗单位和家属要求的尸体解剖委托

书，委托书需签名或加盖公章。

4,医疗纠纷病例，必须经医教部同意并办妥一切必要的手续，如

尸体处理，按规定交费。

5,必须提供详细的病历材料。

6,特殊情况去外单位、外地尸检时需由委托单位和个人支付交

通、解剖人员过时餐费用。

三、尸体解剖的一般常规

1,参加尸检的一切人员，都应态度严肃，保持尸体清洁，头部及

外阴部须用纱布遮盖，参观者必须严守尸检室规则，未经许可，

不得随意取用尸检器材及标本，在未得出正确结论前，对尸检所

见不得随意外传。

2,尸检时剖检者应戴手套、口罩，着隔离衣及橡皮围裙等。锯骨

时应增戴纱手套。尸检过程中应注意个人保护，手套被刺破应及

时更换，皮肤被刺破应即时行创口清洗消毒处理。操作时应注意

保持清洁，手套、刀剪、器械及尸体表面有血染时，应随退即洗

净，切勿将污水溅起或洒于地上。

3,尸体检时所见由尸检室技术人员或指定工作人员，按剖检者口

述填写临时记录单，必要时摄影记录，做为书写尸检记录的基础。

4,一般尸检的程序可按体表，体腔（腹腔，胸腔）、心包腔，各

内脏器官（胸腔器官、颈部器官、腹部器官、盆腔器官）及神经

系统的顺序，进行检查，根据需要，可更动剖栓程序。

5,必要时一，采取心血，其它体液，分泌物或器官组织作细菌培养。

病毒性脑炎或疑有病毒性脑炎的病例，需采取脑组织上作病毒分

离者，须在死后3小时内进行剖检，首先剖检脑部。采取细菌培

养或病毒分离标本的部位，应先消毒以免污染。须采取电镜标本

者，按有关操作进行。

6,中毒或疑有中毒的病例，或猝死不能明确诊断的病例，必要时

应保留足量的胃内容物、粪、屎、心血、胃、肝，肾、心或脑组

织送作毒物化学检查。

7,新生儿剖检时，应注意肺脏曾否呼吸，发现心、血管畸形时、

应将心与肺一并取出，仔细检查心与肺循环的关系。有颅内出血

时，应检查大脑镰及小脑镰有无撕裂出血。注意检查脐带，必要

时做细菌培养。

8,与手术有关死亡病例的尸检，须有外科医生到场，其中至少要

有一名参加该手术的医生，以便报告病史、手术经过、术后情况、

可能存在的问题及提出对尸检的要求。尸检时切口最好不经手术

切口，对创口内外，手术部缝合及周围情况应仔细观察，必要时

摄影记录，若一时在原位不能弄清须解决的有关问题，则连同周

围组织一并切下，以便仔细剖析。

9,各器官检查，应托观察表面性状，（形状，色泽，硬度），再检

查局部病变的特点，最后切开检查。剖开脏器时，应一刀切开。

注意观察切面情况，勿立即用水冲洗。剖开的一般原则：a,显露

器官的最大面积，一般从长轴剖开；b,将器官内导管一齐切开，

显露其分布及关系。

10,若发现器官内有严重结核感染，如肺，肾，肠等，应将整

个器官小心取出立即放入固定液中，同时用固定液注入器官的血

管或导管内，待整个器官完全固定后，才切开检查。

11,尸检时应尽少破坏尸体的外形，检查完毕后，应吸去体腔

内的血水，凡不需保留的器官，均应放回体腔内，并应以木屑或

其它吸水物质填塞，逢合切口。缝合时要尽量注意整副尸体外形,

将体表洗净擦干，包裹或穿着妥善后放入尸箱内。

12,尸检时如发现法定传染病，应在确诊后及时报告卫勤领导

机关，必要时报告当地卫生防疫机构。尸检时应按传染病隔离消

毒常规执行。

13,烈性传染病尸检时尸检者、助手及参加人员（非尸检工作

人员不得参观），都应穿隔离衣，尸检污水须经消毒后才能排出。

尸检服装，场所及各种污染用品均须用漂白粉液，过氧乙酸，甲

酚皂溶液或福尔马林蒸气等彻底消毒，器械用高压蒸气灭菌事用

碳酸氢钠水煮沸一小时以上，尸体应火葬。留做检查的标本应彻

底固定，然后检查。

14,尸检时用作细菌培养及其它各种检验标本均须附有检验申

请单一并送检验科，检验后将报告单交回病理科，由尸检者粘贴

或抄录于该尸检报告中。

15,尸检完毕后，各种器械、尸检台、手套、隔离衣等，应及

时清洗消毒。

16,尸检完毕，主检人应向临床医生做尸休的简短小结，并须

在24小时内写出大体检查记录，三日内做出初步病理诊断，送交

有关临床科室。

四，一般尸体解剖的主要步骤与要求

(一)［体表检查］称体重，量体长，观察发育、营养状况，检查体表

有无黄疸，发疳，出血点，疤痕，创口等，及其部位，大小；眼、耳、

鼻、口腔等有无溃疡、分泌物或液体流出，外生殖器有病变，浅表淋

巴结肿大否；有无尸冷、僵、腐败现象。

(二)［体腔检查］

(1)胸、腹壁皮肤切开及剥离：根据情况，选择Y形、

T形或直线切口切开皮肤。切开腹膜时，先切一小孔，插入

两指，再从两指之间剪开，以免划破内脏。剥离胸壁皮肤时,

应注意将胸肌一并剥离，但勿损及肋间肌。

(2)腹腔检查：检查腹腔内有无积液和积气，腹膜情况,

各器官的位置。与关系，有无粘连，肝脾肿大否，其边缘在

锁骨中线肋缘下及剑突下儿厘米，检查左右横膈的高度。

(三)［胸腔检查］

(1)必要时在胸腔未切开前检查有无气胸。可有注射器

吸水后，在第一肋间处自胸壁刺入，观察有无气体自水面下

上升。

（2）在肋骨软骨联接线内侧约0.5cm处，将第二肋骨到

肋弓的软骨切断，紧沿胸骨后壁将横及纵隔割离，注意勿损

及心包及大血管，然后检查胸腔有无积液，其量及性质，必

要时涂片检查与细菌培养。

（3）切断第一肋骨，分离胸锁关节，将胸骨及肋骨取下,

观察各器官的位置，两肺表面情况，胸腺是否已经脂肪化。

锯开胸骨，看骨髓造血情况。

（4）自心尖部向上，作人形剪开心包，检查腔内液量，

心包膜内壁情况，必要时取心血作细菌培养。

（5）疑有空气体栓塞时，将心包剪开一小口，用镜子拉

紧切口两侧心包膜，心包腔内注满水，然后，在水上剪开右

心房及肺动脉，观察有无气泡逸出，或者先结扎进出心脏的

大血管，取出心脏，淹没于水下剪开右心，观察有无气泡逸

出。

（四）［各脏器的取出］

各器官取出前，应仔细检查周围情况及与其他器官的关系，检查

有困难时一，一时不能明确者，可与其它器官一并取出，然后再仔细检

查。检查各器官前，应称其重量，量大小。

（1）心脏的取出与检查，在体内剖开右心，检查肺动脉

有无栓塞后，将心脏提起，从根部或心包膜内壁分别剪断上、

下腔静脉，（于距瓣膜2cm处）肺静脉和主动脉（于距瓣膜

5cm处），取出心脏，（若有心、血管畸形，则应将心脏连同

肺脏一并取出）。检查心脏增大否，外膜光滑度，有无渗出

物等，心脏按血流方向剖开，测量各瓣膜的周径及左右心室

的厚度。

A：右心剖开法：第一步，用刀或剪将右心从上、下静脉入口

处直线剖开，如欲避免破坏窦房结，从下腔静脉向上，剖至房室

间沟上1cm处，向右心耳剪开，保持上腔静脉口完整，上腔静脉

至少保留1cm。第二步，从此线中点沿心脏右缘剖至心尖部，检查

三尖瓣，并用手指检查动脉有无血栓或狭窄。第三步，从心尖部

沿心室中隔剖至肺动脉，检查肺动脉瓣。

B：左心剖开法：第一步，用刀或剪将左心房从左、右静脉入口

之间作直线剖开，以手指检查二尖瓣是否狭窄。第二步，从此线

的左端沿心脏左缘剖开至心尖剖。第三步，从心尖部沿心室中隔,

避开肺动脉剖开肺动脉剖开主动脉，检查二尖瓣与主动脉瓣。

剖开有瓣膜病变的心脏时，应注意避免破坏有病变的瓣膜。

心脏剖开后，检查心肌厚度、硬度、色泽、心内膜光滑度，瓣膜

周围有无增厚，及赘生物，有无狭窄或关闭不全，检查冠状动脉

开口情况。

（2）肺脏的取出：可由肺根部将主支气管和血管切断取

出，或与颈部器官一并取出。如两层胸膜间有粘连，需细

心分离，勿损及肺，如粘连牢固，可连同胸膜壁层一并剥离,

取出肺脏。取出后检查其表面情况。切开检查肺切面的改变,

有无病灶、气肿、萎陷等，肺门淋巴结肿大否，切面情况。

(3)颈部器官的取出：A,充分分离颈部皮肤与软组织,

用长刀刺入割断舌下系带，紧沿下颌骨内面向左、右尽量地

将下颌与舌间的软组织分离。B,将舌拉下，自硬腭后缘割

离软腭，注意应将两侧扁桃体完全取下。C,将舌、咽、喉

头、气管、食管、肺拉下于横膈上将食管、下腔静脉及主动

脉切断，连同胸腔器官一并取出。

(4)腹腔及盆腔器官的取出：

一般先将脾脏摘出，继之取出小肠、肾上腺、肝、胆囊、胃、

十二指肠、胰，最后取出肾及盆腔器官。

①将脾脏提至腹腔前方，割断脾门部血管，取出脾脏。检

查其大小，重量，硬度，表面色泽。切面有无外翻；有无糊

状物刮下，脾门血管及脾小体、脾小梁的情况等。

②小肠与大肠的取出前，应检查肠系膜淋巴结及血管，

找出空肠的起端，切断，自肠系膜附着处将肠割下，直至直

肠处将其切断取出，肠的断端应钳紧或结扎，以免粪便污染

腹腔。待其他器官检查完毕后再检查肠。先量其长度，在肠

系膜附着处沿纵轴剪开肠腔，检查粘膜有无病变，腔内有无

寄生虫等，必要时可保持肠与肠系膜的关系，并将其一并取

出。

③十二指肠在原位从前面剪开，用手挤压胆囊：看胆道通

畅否。沿胃大弯剪开胃，检查粘膜病变，将胃及十二指肠从

后壁分离，与胰脏一并取出，在检查胰脏前，注意观察脾静

脉有何变化。检察胰脏重量，大小，硬度，作多横切面，检

查切面情况。

④小心分离肾上腺周围组织，取出肾上腺，分离右侧肾上腺

时，将肝向上方推，注意分离与皮肤上腺相连的肝组织，肾

上腺取出后，作多人横切面，检察皮质与髓质的特征，有无

出血等。

⑤取出肝与胆囊前，应仔细检查胆管、门静脉、肝静脉，然

后剪断肝门的胆管及血管，分离镰状韧带，将门静脉及肝背

部部一段下腔静脉与肝一并取出。检查肝的大小，重量，硬

度，色泽，注意检查肝静脉及腔静脉，切面外翻否，小叶结

构清楚否及有无其它病变。

⑥分离肾周围脂肪结缔组织，将肾提出，凸面向上剖开，注

意包膜剥离要难否，检查表面的性状，切面皮质及髓质纹理

是否清楚，肾盂粘膜有无病变。然后连输尿管一起取出肾脏。

⑦盆腔内器官的取出：先分离腹膜及周围组织，再取盆腔器

官，男性可将直肠、膀胱一并取出，结肠断端应结扎或缝合。

（五）脑与脊髓的取出：

1,从两耳后经头顶部作一切口，将刀插入切口，切开头皮，

向前后剥离，划好锯线。此线自前额中心处向左右两侧延伸，经

耳廓上缘，再向后向上延至枕外隆突近处，按锯线切断两侧颍肌。

锯时注意锯到抵抗力减少时即停止，然后用凿凿开，注意勿损及

硬脑及脑组织。

2,取脑时，将两侧额叶向上，向后提起，依次切断视神经，

内颈动脉，漏斗•，动眼神经，再剪开小脑天幕两侧，用左手将脑

手托起，切断其余神经，然后用脊髓刀尽量切取较长的一段脊髓

与脑一起取出，脑一般需固定5-10天后再切开检查，脑的一般切

法如下：A,经四叠体上缘和大脑脚上方斜向切断中脑，分离脑

干与大脑。B在灰结节部将大脑作冠状切开，检查各基底神经核,

外囊，岛叶，下视丘,侧脑室，第三脑室，然后向前向后每隔0.5-2cm

作多个切面检查。C向小脑蚓部作坐横切面，露出第四脑室底，

脑桥经面丘，延髓经橄榄核中部作横切面检查。D如为脑膜炎，

及脑室扩张等病例，可经额极及枕极的联线稍高处作水平切面检

有。

3,用骨凿凿去鞍背和两栅床突，仔细取出脑垂体。必要时凿

开中耳或将中耳取出。

4,脊髓的取出法，中线切开背部皮肤，及棘突两侧锯开，椎

板，取下棘突及椎板。剪断硬脊膜外脊神经根。切断马尾，轻轻

将脊髓连硬脊膜一并取出，取出时一，应避免牵拉挤压。也可人

前面锯开椎体，取出脊髓。

（六）骨髓检查：

一般病例取小片胸骨及椎骨，观察共骨髓情况，血液病病例取一侧

股骨纵行锯开，观察骨髓改变情况，股骨取法如下：先切断骸下韧

带，然后沿膝外侧、大腿外侧直到股骨大粗隆切开皮肤、肌肉，并

分离出股骨，离断貌关及膝关节，取出股骨，填入长短相同的木棒,

整复外形。

［采取细菌培养的方法］

1,心血培养标本：

(1)用无菌镶子提起右心耳，在下腔静脉入口处

的上方进行烧灼消毒，(用一有柄铜片在酒精灯上烧

红，烧灼器官表面，面积约2*2cm).

(2)用无菌吸管或注射器从消毒部位插入，顺下

腔静脉入口推进，取血液2-3ml

(3)在无菌操作下，将吸取之血液立即注入无菌

的肉汤培养基，或有玻璃珠的培养瓶内，立即洗净吸

管或注射器，以免凝固，若在右心取不到血液，可从

下腔静脉吸取。

2,腔(胸腔、腹腔)内渗出液，心包腔内积液，必要时作

细菌培养，采取液体时应尽量避免污染。采取脑脊液培养

时，于尸检前用无菌手术，在第二及第三腰椎间隙作穿刺，

取脑脊液2-3ml,置于无菌试管内送检。

3,肠内容物培养：在回肠末端及乙状结肠下端，或病变明

显处的浆膜面经烧灼灭菌后剪开，用棉花拭子插入肠腔内，

在粘膜面擦取粘液、渗出物粘膜，放入无菌试管或培养基

内送检。

4,脏器细菌培养：脏器表面灼烧灭菌，切取不小于

2*2*1.5cm的组织块，装无菌容器内送检。

5,脑组织作病毒分离：用无菌手术取大脑皮质，中脑，海

马，脑桥组织块，每块不小于2*2*1.5cm,以冰瓶保藏迅速

送检。路途遥远者，可将检材放入无菌甘油瓶内，在低温

下送检［支

五，尸检材料的取材和固定

尸体解剖的材料取材，有两种方法：

1,尸体解剖的内脏，当处理完后，可选取其中有病变

的部分取材（粗取），然后存放于固定液中固定，当完全

固定后，再行修切成适合于制片的组织块（细取）。一般

厚度不超过3mm.

2,将所有的内脏，经逐一处理后，全部固定起来，待

其完全固定后，再行取材。

六，科学研究材料的取材：

这方面材料的来源是各种研究单位，根据自己课题的需

要，设计出适合于本课题研究所需的模型，利用不同的动物,

如小鼠，大鼠，兔，猫，猪，狗，鸡，牛，猴等进行实验，

然后取其全脏器或部分组织，进行实验，对于此类标本，情

况特殊，应认真给予对待。

动物标本全部脏器的每个脏器取一块，对于部分脏器的根据

需要取材。

第三节常规病理标本的制作程序

常规组织固定

在组织病理学中，不管是组织切片乃至电镜还是大体标本的保存，都

必须进行及时的适当的和有效的固定。组织只有经过固定，才能完成

随后的一系列的制作，直至切片的最后完成。每个医务工作人员都能

容易地把组织固定起来，但是，要清楚了解固定的过程及其定义是一

件十分不易的事，下面我们将逐一解答如下。

（一）、固定的作用

组织经一系列的处理后，就必须进行固定，当然有的组织是先固

定，再进行处理，然后再固定。固定的作用，从组织学的角度其简单

的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、

组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅

是使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反

应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固

有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原

不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时,

不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。

（二）固定的目的

1、能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。细菌无处不存在，它们

随时都可污染腐蚀未经处理的组织。固定液可以固定任何蛋白

质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命

就停止，细菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人们常可

碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为

什么呢？除了细菌参与外，其本身也是很重要的。因为组织离体

后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜

的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，日常生活中常碰到的

肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。

2、保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖

元等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。细胞的固

有物质，即细胞核、内质网、线粒体、高尔基器、溶酶体、过氧

体，细胞骨架，组织液，抗原、糖元等。这些物质，如果不将其

及时固定，是很容易丧失的，尤其是溶酶体，很容易受到破坏，

因此应特别小心。

3、使组织硬化，便于切块。刚离体的组织，除了胃组织以外,

都是柔软的组织，尤其是胃肠道的组织，如果在没有固定时就取

材，效果就很差，不是取材不规整，就是厚薄不均，粘膜和肌层

很容易分开，因此，要取得规整标致的材料，就必须将组织彻底

固定，再行取材。

4、对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散。病理标本、

种类繁多，成份复杂，各种病例都有，具有传染性的病种也不少,

如结核、肝炎、麻风、性病等等。对于此类标本，应进行彻底的

固定后，再行取材，如结核球，固定时间应在3-5天。

5、保存好大体标本。对于有教学任务的医院病理科，除搞好

疾病的诊断外，还有收集有价值的大体标本，有些大体标本，是

很难得到的。因此要求在平时就要留心观察，小心处理。遇到有

教学价值的罕见的典型的标本，就必须及时固定，认真给予对待。

6、可增强染色的作用。组织经过及时的固定，最终可见到切

片有鲜艳的染色，而些时如果有一批未经及时固定的组织，将看

到最终的结果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得结论，固定

可以增强染色的作用。

（三）固定的注意事项

1、组织固定越新鲜越好。组织一经离体，就能及时地固定，

这是最好的。根据实验，如果要获得某些酶的染色，固定最好在

组织离体后30秒至1分钟。对于其它达不到些要求是越快越好。

2、组织固定，组织块不宜过大。凡是需要固定的组织，都不

应该太大太厚，这是因为所有的固定液穿透力不够强，浸透度不

够快的缘故。如果较大厚的组织，不经处理就进行固定，那么待

固定液进入至中间对可能这些组织早就发生自溶了。因此，对于

较大的组织，必须先进行处理，切成制片材料再行固定，这是最

佳的处理方法，如遇到胃肠的器官，则应将其剪开，放平后，再

行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因这类组织、粘

膜和肌层容易分开，没固定时，难以取得最佳制片材料，对于产

酶类的器官如肝、肾、脾等，更要处理好，否则更容易出现自溶

现象。

3、对不同类型的组织应适当合理地选择固定液。有的固定液

对于组织有膨胀作用。固定剂是一种化学试剂，有液体和固体之

分，一般使用较多的是液体，而固体固定剂如多聚甲醛，则多用

于实验研究的组织固定。固定剂的种类繁多，成份复杂，对组织

的作用不尽相同，英国著名的组织化学专家Pearse指出：对于每

个既定的组织化学方法来说，选择最合适的方法是极为重要：在

组织化学研究准备阶段不论采用什么固定剂，都必须尽可能确切

地知道它们对于各种组织成分的反应基团的效用。Jones(1973),

指出理想的固定剂必须具备的条件是，防止渗透损伤和妆缩，以

达到在各级可见度的水平皆无形态变化；要求组织所有的成分能

保留于原位。他认为有三种试剂即甲醛、戊二醛和丙稀醛接近于

达到上述要求。即为了更好地把组织中各种成分尽量保存好，尽

量好给予显示出来，就决不能千篇一律地使用一种固定液，而必

须认真地深入研究各种固定液的性能和使用方法。例如：丙酮，

它对组织有明显的皱缩，硬化作用，平常它是决不会被用来作固

定液的，用它不但太浪费，造价太高，而且也使切片较为困难，

但是，对于某些酶的研究，狂犬病脑组织的固定，某些细胞的培

养等。最好的固定液还是丙酮。因为如果使用福尔马林固定液、

石蜡切片显示酸碱磷酸酶就显示不好，狂犬病病毒的包函体就会

消失掉，又如醋酸，它对胶原纤维等有膨胀的作用。由于各种固

定液对不同的组织有不同的作用，因此许多专家将根据各种固定

液的优缺点，配制出许多混合液的方法来，给组织的良好固定起

到了非常积极的作用。但是，值得指出的是并非所有的固定液都

不是十全十美的，例如，酒精、甲醛、醋酸固定液，对组织固定

很好，组织中各物质的染色也十分清晰，但对固定脱水盒为铜质

的组织时，效果就不好，原因是醋酸跟酮可发生反应，产生醋酸

铜，沉淀于组织中，可造成对抗原的损害，对于免疫组织化学的

显示，经实验证明：可呈弱阳性乃至阴性。由此可见，固定液的

选择正确与否决定着对某些病例的免疫组化标记的成败关键。在

我们的日常工作科研中，对于组织的固定，应有针对性的选择，

方能获得满意的效果。

4、组织固定，时间不宜太短，也不宜太长。时间太短，就不

能很多的固定组织，因为不管组织大小，固定液浸入组织之中，

都需要有一定的时间，时间太短，就会影响组织固定的效果，对

以后一系列关系的处理都有影响，切片质量难以保证，固定时间

太长，也不好。组织长时间的固定，福尔马林会产生一种酸，影

响核的染色。对于固定很长时间的陈列性标本制片后切片染色不

鲜艳，显得非常陈旧。另外，长时间的固定往往会出现福尔马林

色素，尤其是造血器官的标本，更应注意。固定时间过长，可降

低抗原的活性。

5、固定液的量要充分。固定液量的足够与否决定着组织固定

的成败，有的人认为，固定液的量与组织的比应是20：1,这个

要求对于小组织来说是完全可以达到的，但对于大标本来说，则

是一件非常困难的事情。因为对于大医院来说，每天都有儿十上

百例的标本，小如大头针大小，大的达几十斤的肿瘤，对于这样

大的标本，按20：1的比例来做，显然是不可能的事，既要做到

组织能固定好，又不使组织吹干就必须具体情况具体处理。对于

大的标本，原则上是不让其暴露部分被吹干，这是因为在现实111

当中，大的标本往往露出容器一大半，因此对于这种情况，应取

些脱脂棉或纱布，浸湿固定液后，盖于组织表面，以免使组织被

风干，影响制片效果。

6、特殊病例或特殊物质应选择特殊的固定液。一般的病例标

本，如没特殊的要求，都可以应用甲醛配成的各种固定液来固定。

但是，如果要显示狂犬病毒的包含体时，应用上述的的固定液就

不行了，必须采用丙酮来固定，显示糖元，可选择无水酒精或丙

酮来固定组织。固定剂是一种化学语试剂，有液体和固体及之分,

平常使用的多为液体，Pearse指出，对每个既定的组织化学方法

来说，选用最合适的固定方法是极为重要的；在组织化学研究中

的准备阶段，不论采用什么固定剂，都必须尽可能确切地知道它

们对于各种组织成分反应基团的效用。

7、组织的第二次固定或后固定。在一般的常规病理活检组织

中，往往用一种固定液，就能够达到目的，获得满意的结果。但

是，对于某些特殊病例光用一种固定液是不够的，必须根据不同

的情况，使用特殊的固定液再次将组织固定，或者在切片后染色

前再行固定。这种方法称为二次固定或后固定。例如：胚胎性横

纹肌肉瘤，由于肿瘤细胞发育较幼稚，完全不象成熟的横纹肌组

织所固有的横纹，在进行特殊染色前，就必须用Zenker氏固定液

进行第二次固定，方能较好地显示出横纹肌纤维来。否则，效果

不佳。另外，电镜固定的标本，通常都需要后固定。其使用方法

是先用戊二醛固定，再用奥酸固定。

（四）固定液的使用

当前，应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定不同的组织成分起

着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能，才能

合理的固定组织。根据Bencro"的分类法，将不同的固定剂分为四种

类型：

I类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。

II类：氧化剂类，四氧化钺（奥酸），高毓酸钾，重格酸钾等。

III类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。

IV类：其他，氯化汞，苦味酸等。⑸

上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技

术方面中用到。下面根据使用的需要，将着重介绍儿种常用的固定剂。

（十）甲醛

甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37—40%,由甲醛气体饱

和于水而成，比重为1.12。它也可以稳定的固体形式存在，它的成分

为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。

甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇，

这种在组织化学方法当中，能使酶钝化，影响其反应。甲酸，它可使

固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往

细胞核染色欠佳。

甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。参

与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，股基,

羟基，SH和芳香环。甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因

为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。

甲醛有这种交联的功能，也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中，

需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲

醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色。

甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法，就

是取10ml甲醛液，加水90ml,这就是10%的福尔马林.当然，现在使

用的固定液要求较为严格些，最好是使用缓冲福尔马林固定液，这将有

利于后来的免疫组化染色的需要.

从组织学的观点来说，甲醛是一种良好的固定剂，它有很多的优点：

1.组织收缩较少，损伤少，保存固有物质好.

2.固定均匀，穿透力强.

3.能使组织硬化，增进组织弹性,有利于切片.

4.能保存脂肪及脂类物质.

5.成本较低.

虽然甲醛有上述的优点，但这都是相对而言，任何物质都不可能

十全十美的，它也有许多缺点：

1.杂质含量较多，如甲醇，可钝化酶类，影响反应.

2.含有微量甲酸，导致固定液酸变，影响染色.

3.可产生福尔马林色素，影响观察.

4.不能固定尿酸和糖类物质.

5.容易挥发，污染环境，可导致标本干涸.

6.可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验，组织用甲醛

固定后在流水中冲洗5小时后，仍留有相当多的甲醛与蛋白质

相结合，但需要经过长时间的流水冲洗（24天的冲洗）方能除去.

可见存在于组织上的甲醛是不可能除去的.因为临床活检不可

能有这么长的时间来冲洗组织.因此要特别指出的是，在其后的

各种技术操作中，要特别注意到甲醛的存在，必须要想办法除去

它，否则将会给各种染色造成影响，甚至导致失败.

应用甲醛，可以配成许多种固定液：

1.10%缓冲福尔马林固定液

甲醛100ml

蒸储水900ml

NaH2P。4•H2O4g

Na2HPO4（无水）6.5g

该固定液是当今流行的固定液，因它对组织固定较好,损伤较

少，因对其后的各方面的研究都较好，尤其是对免疫组化的染

色.

2、10%福尔马林固定液

甲醛100ml

自来水900ml

这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携带的固定液，

但由于它的单一性，因此，只要有条件的单位都不要求使用

这种固定液。

3、10%福尔马林盐固定液

甲醛100ml

自来水900ml

Nacl9克

先将Nacl溶于水，再加入甲醛。这也是一种较为简单的固定

液，但由于加入Nacl,它是一种重金属盐物质，加入了它可

促进和改善染色，增加染色的强度。

4、Bouin氏固定液

苦味酸饱和水溶液75ml

甲醛2ml

冰醋酸5ml

该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用。而甲

醛对组织有收缩作用。两种试剂的混合使用，用以抵消彼此

间的副作用。使组织固定达到优良的固定水平。

5.醛糖钙固定液

甲醛100ml

蔗糖300ml

乙酸钙20g

蒸镭水90ml

先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镭水，后加入甲醛。该固定液对于

做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片,

再给予显示。

当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。从免疫组织

化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化

的手段来检测，据多人认为，它对IgA,IgM,J链，K链和

入链的标记效果较好，且背景清晰。但美中不足的是：经它

固定的组织，可与蛋白形成醛交联蛋白，这种醛键可封闭抗

原。固此，在免疫组化实际检测中，应根据不同的要求和需

要，采用酶消化或者其它抗原修复如微波、高压等的方法，

以便破坏醛键重新暴露抗原。

(2)酒精：又称乙醇，为无色透明的液体，沸点是78度，

工业酒精是95%O

酒精它有许多优点：

1、可保存尿酸结晶和糖原等物质。高浓度的酒精如95%,无水酒

精可保存上述两种物质，因它们易溶于水，因此，要证明上述两种物

质的存在，就不能用含水的固定液来固定组织。

2、能在任何比例的情况下与水混合，在病理技术中，酒精是一种

十分重要的试剂，它起着关键的作用。如果没有酒精，将会无法完成

必要的工作。如组织的脱水，切片染色前后都离不开酒精，在常规的

工作中，通常都用95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等

不同的浓度来使用。

3、可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。常规活检等切片上

的石蜡必须除去，才能进行染色，能除去石蜡的物质有苯及汽油等,

常用的有苯类试剂，苯不溶于水，但能溶于酒精，酒精在这里充担着

除去苯和连接水的作用，为切片入水架起了桥梁，因此称它为桥梁试

剂。

4、能除去切片上的水份，使切片无水化。切片经染色后，由于所

用的试剂都为水溶液，因此在切片上含有大量的水份，这些水份经系

列梯度酒精的置换吸附后，到无水酒精中已完全无水，这样处理对于

切片的保存是有好处的，否则，切片将会褪色。

5、可用来保存标本。大体标本经福尔马林固定后，如为了陈列保

存，必须取出冲冼。然后移入75%的酒精中。如果用福尔马林作陈列

标本的固定液，则因为福尔马林含有杂质较多，液体容易酸化，时间

一长，会逐渐变为微黄色或淡黄色，影响美观，影响陈列的效果。

6、可与其它试剂配成多种的混合固定液，有时为了加快固定，常采

用酒精和其它试剂来配成混合固定液，这种固定液在固定的同时，兼

有对组织脱水的作用。应用酒精配成的混合固定液有：

①Carnoy氏固定液

氯仿300ml

冰醋酸100ml

95%酒精600ml

该固定液固定组织快速，在固定的同时兼有脱水的作用。溶液中的氯

仿和酒精，对组织的收缩较厉害，但应用了冰醋酸，这种现象便被中

和去。

②AF固定液

甲醛100ml

冰醋酸50ml

95%酒精850ml

这种固定液的作用与上液有相似之处，但要注意的是，凡使用含有醋

酸的固定液，其脱水用具不能使用铜制的脱水盒，因冰醋酸跟铜离子

起反应，生成醋酸铜，这种物质可沉淀于组织间，可破坏组织中的抗

原，造成免疫组化检测的失败。应用时应多加注意。

酒精也有许多不足之处，它的缺点是：

1、可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂

物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡切片，

因为酒精可将它们溶解去，而石蜡切片组织中含有的脂类物质，则在

组织脱水时被溶解去，只留下脂类或类脂物所占有的空间。

2、对组织收缩较大，不宜作单纯固定液。高浓度的酒精,

对组织有显著的收缩作用，造成组织发硬易脆，难以切片等现象。因

此，它不作为单纯的固定液。

3、渗透力不强。当用酒精固定组织时;组织表面很快就

被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透，造成

了中间组织固定不佳的现象。

4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡经酒精固定的组

织，核的染色都不好。

5、可脱去切片上已着染的各种颜色，切片经染色后，

是必须洗去多余的染液，二是必须脱去切片上的水。在用酒精洗切片

时，必须仔细地掌握显微镜下观察，还要掌握酒精的浓度，低浓底的

酒精脱色力强，稍不注意，便可脱去切片上大部分的颜色。切片脱水

时，要较快地通过低浓度的酒精，以免使已着染的颜色被脱去。

6、价格较贵。从经济学的角度，应用酒精固定组织划不

来，例如：一瓶500ml的甲醛，可配成500ml的固定液，按每例标本

需要100ml计，可固定50例标本，而一瓶500ml的酒精，即使配成

80%酒精，也只能固定6例标本，因此，若用酒精固定组织，其价格

比用甲醛固定组织的要高8倍。

(3)冰醋酸。冰醋酸为无色透明的液体，易挥发，气味大，一打

开瓶盖，整个文章都可闻其味道，纯醋酸在17℃时常为结晶状，因

称为冰醋酸，在冬天使用时，可用微波炉进行解冻，再行使用，它的

优点有：

1、能迅速固定染色质，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快,

固定效果均匀，对于染色质的固定快，因此，用其作固定的切片染色

好，在配其它染色液如明研苏木素和伊红时一，常常需加入一定量的醋

酸，以促进染色。

2、能使组织尤其是富含纤维的组织膨胀。

各种固定液对组织都有收缩的作用，尤其是对富含纤维的组织。而它

不但不会使组织收缩，而且还会令许多组织发生膨胀的作用。根据这

个特点，用它配成许多种不同的混合固定液，以达到固定好，收缩少,

易切片，效果好等目的。用它配成的混合固定液有：

(1)Zenker氏固定液：⑹

重铝酸钾25G

升汞50G

蒸储水1000ml

冰醋酸50ml

先将重铭酸钾和升汞溶于水中，尢其是重铝酸钾，应用热水或加温的

方法将其溶解，然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中