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DB2102CodeofpracticeforpurificationandrejuvenationofNitzschiaclosterium大连市市场监督管理局发布I本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。归口管理部门通讯地址：大连市海洋发展局（大连市西岗区长春路186号），联系电话：），1小新月菱形藻藻种提纯复壮技术规程本文件规定了水产养殖用小新月菱形藻本文件规定了水产养殖用小新月菱形藻NitzschiaClosterium藻种（以下简称藻种）提纯复壮的术语本文件适用于水产养殖用小新月菱形藻等低温硅藻的一级藻种提SC/T2047-2006水产养殖用海洋微藻保种操作DB21/T2777-2017海洋浮游微藻分离和筛选技术规程藻种细胞提纯复壮purificationand24水质和设施设备条件4.1水质条件4.2设施设备4.2.14.2.1清洗设备4.2.2消毒设备4.2.3操作观察设备和1ml移液器及配套枪头，用于培养的一次性无菌培养皿（直径90mm～100mm）和20ml～40ml玻璃试管（配有带砂芯乳胶塞），试管架、20ml一次性无菌4.2.4培养保种设备5藻种培养液和固体培养基的配制5.1营养液配制5.1.1康威培养基（以下简称A液）、康威培养基a)配制A液时，将DB21/T2777-2017表A.5.1.2藻种培养用尿素溶液配方见5.2固体培养基用抗生素溶液配制5.3藻种扩繁用培养液配制灭菌海水冷却后，按照1000：1体积比分别加入灭菌的康威营养液、康威培养基—硅酸钠溶液和尿向100ml海水中加入0.8g～1g琼脂粉，加热至溶解制成琼脂海水基质，高压灭菌后置超净工作台中，于室温下冷却至45℃~55℃时按照1000：1体积比分别添加灭菌的康威营养液、康威培养基—硅酸3钠溶液、尿素溶液和抗生素溶液后摇匀，立即向一次性灭菌培养皿内倒入约20ml，使培养基铺满每个培养皿底部，静止放置至培养基凝固后，倒置于超净台按照SC/T2047-2006中5.1.1规定的微藻分离、保存用海水按照SC/T2047-2006中5.1.1规定的微藻分离、保存用海水素溶液应采用0.22μm孔径无菌针筒式滤膜塑料器具应采用121℃高压蒸汽灭菌15min，灭菌后置于80℃恒温箱烘干；玻璃器具应用135℃恒温环境温度17℃~20℃,光照度3000Lux～6000Lux下培养2d。2h～4h后，固体培养基上液体被基本吸收后，用封口膜缠绕培养皿侧面，适宜条件下（见7.1.1）培养固体培养基上的藻种细胞，25d～30d后，在固体培养基上长出1mm当固体培养基上长出大于1mm的藻种克隆时，应将培养皿放置于4℃~6℃透光低温展示柜保存，保4秋季，室温下降至20℃时，对固体培养基上藻种细胞进行提纯7.1.1）培养，同时进行多个藻种克隆的筛选培养，一个藻种克隆培养一管，不同藻种克

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