中药鉴定DNA分子标记在中药品种鉴定中的运用

DNA分子标识在中药物种

鉴定中的运用指导老师：谢冬梅老师小组组员：赵维波刘万冬朱婷周孟凡周悦4月14日汇报内容1、研究背景2、DNA分子标识的简介3、DNA分子标识技术措施的简介4、在中药物种鉴定中的运用5、小结6、展望1研究背景中药的精确鉴定波及到人民的生命安全和切身利益。老式的鉴定措施存在着不一样程度的局限性，近年来，伴随分子生物学技术的进步，DNA分子标识的新技术不停涌现，DNA分子标识技术凭借着特异性强、精确、迅速、微量、可靠等特点，在中药物种鉴定中展现了广阔的应用前景。2DNA分子标识的简介分子标识的定义：广义的分子标识是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义分子标识是指能反应生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性DNA片段。分子标识的类别：根据目的基因所在细胞器的不一样可分为核DNA标识、线粒体DNA标识和叶绿体DNA标识。适用于动物的起源进化、亲缘关系、遗传变异、物种鉴别等研究线粒体DNA适用于高等植物的亲缘关系、物种鉴别等研究核DNA与叶绿体DNA3DNA分子标识技术定义：DNA分子标识技术，也称DNA分子诊断技术，是指通过直接分析遗传物质的多态性来诊断生物内在基因排布规律及其外在性状体现规律的技术。DNA分子标识技术的特点不受组织类别、发育阶段等影响。取材不受限制。不受环境影响。由于环境只影响基因的体现转录与翻译，而不影响基因构造。数量多且多态性高。具有共显性，可以鉴别纯种和杂合基因。简朴、迅速、易于自动化。常用的DNA分标识技术分类基本原理技术名称特点适用范围以电泳技术和

分子杂交技术为核心的DNA标记技术RFLP分子标记技术具极大的丰富性、共显性、具稳定性、分析简单等研究属种,甚至品种的亲缘关系、系统发育与演化以电泳技术和PCR技术为基础的DNA分子标记技术RAPD分子标记技术具有广泛性和通用性、简便易行研究种、亚种,鉴别栽培种与野生种AFLP标记技术多态性强,稳定性强,重复性高重复顺序标记技术信息量大,结果重复性好DNA序列直接测定法DNA序列直接测定技术简便迅速研究植物的分类鉴别和亲缘关系DNA分子标识技术原理以RAPD为例简要简介DNA分子标识技术的原理、操作过程及成果分析。原理：RAPD是建立在PCR基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。其以基因组DNA为模板，以单个人工合成的随机多态核苷酸序列为引物，在热稳定的DNA聚合酶作用下，进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳分离、溴化乙锭染色后，在紫外透视仪上检测多态性。扩增产物的多态性反应了基因组的多态性。操作过程成果分析DNA的提取模板DNA浓度和质量的检测电泳检测用EB处理、观察、拍照系统分析DNA分子标识技术的运用状况措施：以常用中药材名称和分子标识技术为关键词，搜索CNKI文库中的中文文献，并进行分类记录。记录成果技术方法PCR扩增、测序RAPD-PCR扩增位点特异性PCRISSR-PCR其他总和篇数7817963116以PCR扩增、测序为鉴别措施的部分常用中药分类药材药用部位药材名称药材或饮片来源标记序列对应鉴别药材植物类植物类植物类植物类植物类植物类植物类植物类植物类植物类菌类动物类动物类动物类动物类根基根茎类根及根茎类根及根茎类茎木类茎木类叶类皮类花类全草类果实及种子类巴戟天柴胡大黄鸡血藤川木通石韦牡丹皮西红花石斛地肤子灵芝乌鞘蛇阿胶海马羚羊角巴戟天野生柴胡药用大黄密花豆小木通、绣球藤石韦牡丹番红花束花石斛地肤血芝乌鞘蛇驴皮小海马羚羊角ITS标记序列ITS标记序列SRAP标记序列ITS标记序列ITS标记序列叶绿体序列ITS标记序列ITS标记序列ITS标记序列ITS2标记序列18SRNA序列12SRNA序列12SRNA序列12SRNA序列特异性引物羊角藤、虎刺栽培柴胡掌叶大黄、唐古拉大黄香花崖豆藤、大血藤女萎、短尾铁线莲庐山石韦川赤芍、芍药番紫花、菊花流苏石斛荆芥、草木犀其他灵芝红点锦蛇牛皮、马皮三斑海马山羊角标识的选择标识选择是筛选用于中药分子鉴别DNA标识的前提。常用于植物鉴别的基因标识序列有：rbcL、ITS、matK、psbA-trnH、trnL-trnF动物鉴别的片段重要用COI基因片段。品种鉴定中标识序列的应用状况4在中药物种鉴定中的运用在中药种类的分布在植物药中的分布在中药物种鉴定中的运用一、鉴定近缘中药物种有关学者对美洲东部的西洋参、三叶人参进行基因分析后，发现西洋参与东亚种人参、竹节参、三七具有更近的亲缘关系。二、鉴定动物类中药物种DNA标识技术不仅能对动物药整体、破碎的组织进行精确的鉴定，还能对动物粉末、体液、分泌物、排泄物入药的中药或中药制剂进行有效的真伪鉴定。王建云运用PCR技术精确的鉴别鸡内金和鸭内金。在中药物种鉴定中的运用三、鉴定药材的地道性道地药材与非道地药材物种来源、形态、显微及化学成分等特性上具有高度相似性,因而不易鉴定，而DNA分子标识技术从群居和分子水平上阐明药材的地道性。陈永久运用RAPD技术研究冬虫夏草在不一样群体间遗传分化现象，同一地区样品差异甚微而不一样地区样品差异甚大。在中药物种鉴定中的运用四、鉴定中药野生与栽培品种栽培品种在长期的人工选择与驯化作用，其生物性状、品质发生一定的变化。而市场上以栽培品充当野生品的现象屡见不鲜，仅靠老式鉴别很难辨别。DNA分子标识技术则展示其良好的运用前景。马小等用RAPD、AFLP标识对园参与山参的研究发现，该技术可用于栽培品与野生品的鉴定。5小结现实状况DNA分子遗传标识技术在中药鉴定及其有关研究方面具有独到的优势和广阔的应用前景,但目前尚处在探索阶段。多种DNA分子遗传技术均存在一定的局限性,有待深入规范和完善。中药分子鉴定试验中的问题①目的基因的真实性与DNA同源性②DNA分子标识技术的稳定性③分子