DB5133T 31-2019 牦牛梨形虫病防治技术规范

ICS点击此处添加ICS号点击此处添加中国标准文献分类号DB51TechnicalRegulationofPreventionandTreatmentofYakPiroplasmosis甘孜州市场监督管理局发布IDB5133/T31—2019 2规范性引用文件 3术语与定义 4诊断 DB5133/T31—2019本标准按GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由甘孜藏族自治州农牧农村局提出并归口。本标准起草单位：甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所、西南民族大学生命科学与技术学院。本标准主要起草人：李友英汤承贺安祥郝力力任秀梅刘怡雯尼玛央宗蓝岚张康林潘瑶。1DB5133/T31—2019牦牛梨形虫病防治技术规范本标准规定了牦牛梨形虫病的诊断和防治。本标准适用于甘孜州行政区域内牦牛养殖户及动物疫病诊疗单位对牦牛梨形虫病的诊断和防治。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程GB16567种畜禽调运检疫技术规范NY/T472绿色食品兽药使用准则NY/T5030无公害农产品兽药使用准则SN/T1678梨形虫病病原鉴定方法《中华人民共和国兽药典》3术语与定义下列术语和定义适用于本文件。3.1牦牛梨形虫病Yakpiroplasmosis由顶复门、孢子虫纲、梨形虫亚纲中的巴贝斯科和泰勒科原虫寄生于牦牛体内引起的一类血液原虫病，过去称为焦虫病或血孢子虫病。3.2牦牛巴贝斯虫病Yakbabesia由巴贝斯科、巴贝斯属的梨形虫寄生于牦牛的红细胞内引起的一类疾病。3.3牦牛泰勒虫病Yaktheileriosis由泰勒科、泰勒属的梨形虫寄生于牦牛的巨噬细胞、淋巴细胞和红细胞内引起的一类疾病。3.4蜱tick2DB5133/T31—2019属节肢动物门、蛛形纲、蜱螨亚纲、寄螨目、蜱总科，为专性体外吸血的节肢动物，是一类陆生脊椎动物身上的非永久性体外寄生虫。4诊断4.1病原牦牛梨形虫病的病原主要有巴贝斯科的牛双芽巴贝斯虫和牛巴贝斯虫，以及泰勒虫科的环形泰勒虫、中华泰勒虫和瑟氏泰勒虫。牦牛梨形虫病感染牛耳尖采血涂片,姬姆萨染色,在油镜下对红细胞内的虫体形态进行观察，主要病原学特征参见表1。表1牦牛梨形虫病主要病原学特征科种虫体大小形状染色质斯科双芽巴贝斯虫长度大于红细胞半径，大小约为4.0-5.0μm×2.0μm。主要有环形、梨籽形、圆形、椭圆形、不规则形等，典型虫体形状为成双的梨籽形，尖端以锐角相连。虫体大都在红细胞的中央。多为浅蓝色的两团，位于虫体边缘部，颜色较深，中部呈空泡状的无色区。牛巴虫长度小于红细胞半径，梨籽形虫1.8-2.8μm×0.8-1.2μm。主要有梨形、圆形、椭圆形不规则形及阿米巴形等，典型虫体形状为成双的梨籽形，尖端以钝角相连。虫体大都寄生在红细胞边缘或偏中呈淡蓝色的一团，位于虫体一端或两端，边缘比中部着色深。泰勒科环形泰勒虫虫体小，大小约为0.8-1.7μm。形态多样，有杆形、梨形、圆环形、卵圆形、逗点形、圆点形、十字架形等，以圆环形、卵圆形为主。呈淡蓝色，包含许多紫红色颗粒状的核。圆环形虫体原生质位于边缘，多呈半月形。卵圆形虫体原生质位于虫体较粗一端。泰勒虫梨子形虫体大小为0.5-2.5um×0.4-1.2μm。圆环形虫体大小为1.4-3.2um。有梨子形、圆环形、杆形、边虫样、椭圆形、三叶形、十字架形、双梨子形、不规则形、出芽形、逗点形等，以梨籽形和圆环形虫体为主。大多数虫体很大，有的甚至占据整个红细胞，有的仅为核而见不到原生质。呈浅蓝色。梨子形虫体紫红色的核多位于钝端。圆环形虫体中央透明，紫红色的核位于边缘。东方（瑟勒虫大小类似环形泰勒虫。除有特别长的杆状形外，其他形态类似环形泰勒虫，但瑟氏泰勒虫以杆形和梨籽形为主。呈淡蓝紫色，位于虫体一端。3DB5133/T31—20194.2流行病学特点4.2.1巴贝斯虫病多发生于6-9月,呈散发。两岁以内的犊牛多发；本地牛症状轻微，引进牛、纯种牛和改良牛常表现明显临床症状。4.2.2泰勒虫病环形泰勒虫病多发于5-8月份，主要引起1-3岁的舍饲牛发病，本地牛的发病率和死亡率较低，而引入牛易感性高。东方（瑟氏）泰勒虫和中华泰勒虫病多发于5-10月份，主要引起2-3岁放牧牛发病，年龄越大，发病率越低。4.3典型临床症状巴贝斯虫病潜伏期为1周-2周，泰勒虫病潜伏期在2周至数周。临床主要可见体温升高，呈稽留热型；贫血，可视黏膜苍白或黄染；出现血红蛋白尿，尿由浅红色至棕红色、黑红色；泰勒虫病牛体表淋巴结肿大；巴贝斯虫感染时，会表现较严重的神经症状。4.4典型病理变化病理变化主要有血液稀薄如水，凝固不良；皮下组织、肌肉结蹄组织和脂肪呈黄色胶样水肿状；全身皮下、肌间、黏膜和浆膜上可见出血点与出血斑；实质性脏器肿大，肺脏淤血、水肿，并有出血点；皱胃和肠粘膜潮红并有点状出血；泰勒虫病牛的淋巴结肿胀，切面多汁，有暗红色和灰白色大小不一的结节。4.5梨形虫鉴定4.5.1血液涂片姬姆萨染色镜检病牛采集血液制成血液涂片后，经姬姆萨染色后镜检，应参照SN/T1678与表1所描述的病原特点进行鉴定。4.5.2巢式PCR检测4.5.2.1生物安全要求样品采集、处理及检测过程中涉及的实验操作，应遵守GB19489的相关规定。4.5.2.2样品处理采集牦牛静脉血5ml－10ml于抗凝真空采血管中，编号，4℃保存，送检。4.5.2.3DNA提取用全血DNA提取试剂盒提取全血总DNA，提取的DNA立刻进行PCR扩增或-20℃保存备用。4.5.2.4反应体系及反应条件4DB5133/T31—2019外上游引物：GATAACCGTGCTAATTGTAGG，外下游引物：ATCGTCTTCGATCCCCTAACT，扩增片段大小为843bp；内上游引物：AATTGTAGGGCTAATACATGTTCG，内下游引物：GAAAACATCCTTGGCAAATGCTTTCGC，扩增片段大小为760bp，靶基因18SrRNA。反应条件为：第一轮反应94℃预变性3min；94℃变性30s，60℃退火40s，72℃延伸1min，共30个循环；72℃延伸7min；16℃反应结束。第二轮反应95℃预变性4min；94℃变性45s，55℃退火20s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃延伸10min；16℃反应结束。将第二轮PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定。4.5.3虫种鉴定PCR产物克隆后送基因测序公司进行测序，序列分析后确定虫种。5防治5.1预防5.1.1传播媒介驱杀体内给药与体外给药相结合，杀灭牦牛体表和环境中的蜱虫，全年进行3-4次预防，通过牛群状态以及流行特点进行酌量增减。灭蜱常用药物及具体用法参见表2。表2灭蜱常用药物表药名用法与用量注意事项双甲脒参照药品使用说明书使用注意环境与畜体同时处理。21天休药期。二嗪农畜群均应处理。溴氰菊酯间隔10-15d重复使用1次。氰戊菊酯配制时水温超过50℃,药液会失效；还应避免使用碱性水。碘硝酚注射液剂量必须准确掌握。伊维菌素注射液仅限于皮下注射，35天休药期。5.2治疗5.2.1用药原则5DB5133/T31—2019应依据NY/T472、NY/T5030和《中华人民共和国兽药典》等规定，选取兽医主管部门规定批准的抗梨形虫药物。注意应选取多种抗梨形虫药物交替使用，以免产生耐药性。5.2.2治疗常用治疗药物及具体用法可参见表3。表3牦牛梨形虫病常用治疗药物表药名用法与用量注意事项咪唑苯脲参照药品使用说明书使用组织内会产生长期药残，规定休药期45贝尼尔严格掌握用药剂量，一般用药一次比较安全，连续使用易出现毒性反应，应对症治疗。休药期28天。硫酸喹啉脲出现肌肉震颤、流涎、呼吸困难等不良反应，严重者可皮下注射阿托品。盐酸吖啶黄缓慢注射，勿漏出血管。重复使用应间隔24-48h。青蒿琥酯本品有明显胚胎毒作用，妊娠畜慎用。