医学教程 项目42食品中兽药残留检测

液相色谱仪的使用食品中兽药残留检测——动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测兽药：是指用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有目的地调节动物生理机能的物质，主要包括：血清制品、疫苗、诊断制品、微生态制品、中药材、中成药、化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品及外用杀虫剂、消毒剂等。兽药残留：是指食品动物用药后，动物产品的任何可食用部分中所有与药物有关的物质的残留，包括药物原形或/和其代谢产物。课程导入常见的几类兽药残留药物抗生素类青霉素、四环素抗生素，还包括抗真菌药以及氟喹诺酮类药物β-激动剂类磺胺类药物硝基呋喃类药物激素类俗称瘦肉精，有盐酸克伦特罗、莱克多巴、沙丁胺醇等11种磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺脒、菌得清、新诺明等呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林孕酮、睾酮、雌二醇等课程导入私用含兽药的饲料及饲料添加剂不恰当用药随意加大药物用量用药错误或未做用药记录没有按规定执行应有的休药期使用未经批准的或禁用的兽药屠宰前使用兽药（通常屠宰前10天要禁药）食品加工过程受到污染（如食品保鲜）兽药残留原因畜禽末次给药到允许屠宰或他们的产品（乳/蛋等）许可上市的间隔时间，通常4-7天课程导入兽药残留危害长期食用兽药残留超标的食品

当体内蓄积的药物浓度达到一定量

产生多种急、慢性中毒氨基糖苷类抗生素—导致药源性聋四环素类—抑制牙齿生长致癌、致畸等撒儿童性早熟磺胺类药物—破坏人体造血机能，白血病（致癌）激素—肥胖、儿童性早熟课程导入兽药限量要求替代农业部公告第235号《动物性食品中兽药最高残留限量》相应部分是我国监管食品中兽药残留的唯一强制性国家标准2020年4月1日正式实施课程导入兽药检测方法高效液相色谱法液相色谱-串联质谱法气相色谱法气相色谱法-质谱法同时检测多种类型的兽药残留

定性、精确定量课程导入学习高效液相色谱法测定动物性食品中的氟喹诺酮类药物残留量检测任务农业部1025号公告-14-2008适用范围适用于猪的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏，鸡的肝脏和肾脏组织中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星药物残留检测。检测依据用磷酸缓冲盐溶液提取试料中的药物提取C18柱净化净化流动相洗脱以磷酸-乙腈为流动相洗脱用高效液相色谱—荧光检测法测定，外标法定量测定测定原理具体工作任务分解子任务二：样品的净化子任务一：样品的制备与提取子任务三：液相色谱测定子任务四：数据分析与结果计算子任务五：结果判定操作步骤动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测任务一：样品的提取离心机漩涡振荡器液相色谱仪固相萃取仪固相萃取柱主要仪器设备1.样品的提取1.样品的提取样品，切成小块，放入搅拌机中，打浆准确称取2±0.05g样品于50mL具塞离心管中旋涡振荡器上中速振荡5min准确加入20.0mL磷酸盐缓冲液离心管配平离心，10000转/min，离心5min将上清液倒入50mL烧杯中，以备过柱用1.样品的提取动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测任务二：样品的净化将固相萃取柱在固相萃取仪上安装好加2.0mL甲醇于固相萃取柱中当水快要滴干时加5.0mL上清液，流速控制在1-2mL/min当甲醇快要滴干时，再加2.0mL水快要滴干时，加2.0mL水淋洗，滴完后，挤干将5mL试管安装于固相萃取仪上，用于接收用2.0mL流动相洗脱，收集洗脱液，滴完后，挤干用0.2um滤膜过滤至样瓶中固相萃取柱填料上面不能完全干，除非要求挤干2.样品的净化本方法样品的净化采用“固相萃取技术”；1固相萃取过程中，固相萃取柱要先活化、平衡；2活化、平衡、上样、淋洗过程柱子筛板上的液体不能流干，防止空气进入。4样品上样和洗脱过程中，要注意控制流速，1mL-2mL/min；3样品净化过程中注意事项2.样品的净化动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测任务三：液相色谱检测流动相高压输液系统分离系统进样系统检测系统记录系统液相色谱的构造色谱柱3.液相色谱检测●色谱条件：（1）色谱柱：C18250mm×4.6mm，粒径5μm，或者相当者；（2）流动相：0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺：乙腈（82：18，v/v）；（3）流速：0.8mL/min；（4）进样量：20μL；（5）柱箱温度：25℃；（6）荧光检测器：激发波长280nm，发射波长450nm。色谱柱仪器：液相色谱仪液相色谱条件3.液相色谱检测动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测子任务四：数据分析色谱分析：由自动进样器分别吸取20μL对照品标准工作溶液及试样净化液注入液相色谱仪中，记录色谱峰，以保留时间定性，以试样和标准工作液的峰面积（或峰高）比较定量。标注品谱图100μg/L环丙沙星、恩诺沙星标准溶液谱图4.数据分析样品中是否有氟喹诺酮类药物残留?如果有，是哪一种氟喹诺酮类药物？具体的含量是多少？4.数据分析项目名称样品名称接样日期设备检验日期检验依据农业部1025号公告-14-2008样品质量M（g）提取用磷酸盐缓冲溶液的总体积V1（mL）过C18固相萃取柱所用备用液体积V2（mL）洗脱用流动相体积V3（mL）样品溶液中相应药物的峰面积A对照溶液中药物的浓度Cs（ng/mL）对照溶液中相应药物的峰面积As计算公式X（μg/㎏）=试样中氟喹诺酮

的残留量X（μg/㎏）试样中氟喹诺酮

残留量平均值（μg/㎏）标准规定分析结果的精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。本次实验分析结果的精密度原始记录表4.数据分析X（μg/㎏）=式中：X——样品中环丙沙星或恩诺沙星的残留量，单位为微克每千克（μg/㎏）；A——样品溶液中相应药物的峰面积；As——对照溶液中相应药物的峰面积；Cs——对照溶液中药物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V1——提取用磷酸盐缓冲溶液的总体积，单位为毫升（mL）；V2——过C18固相萃取柱所用备用液体积，单位为毫升（mL）；V3——洗脱用流动相体积，单位为毫升（mL）M——样品的质量，单位为克（g）。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。计算公式4.数据分析GB31950-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》规定了三类兽药：判定依据不需要制定最大残留限量允许使用如醋酸、安络血、氢氧化铝、硼砂、硫酸锌等但需要制定最大残留限量允许使用如阿莫西林、四环素类、磺胺类、氟喹诺酮类动物的任何可食用组织不得检出允许治疗使用如镇定剂类，激素类4.数据分析药物名动物种类靶组织残留限量（μg/kg）恩诺沙星猪