病理检验技术（第3版）课件 第7章 组织切片染色技术

第七章

组织切片染色技术学习目标1.掌握染色的概念及目的。2.了解染色剂的概念及分类。3.熟悉常用的染色术语4.简述染色的分类。5.掌握染色前后组织切片的处理。6.掌握切片的封固方法。第一节概述一、染色的概念

用染液对组织切片进行处理，使组织中的不同成分被染上相应的颜色，产生不同的折射率，以利于显微镜观察和分析的方法，称为染色。二、染色的目的

病理组织标本制成切片后，如果不经过染色，用光学显微镜观察，仅能见到细胞及相关组织成分的简单轮廓，无法辨认其细节，不能满足观察及诊断的需要。即使是使用有足够高分辨率和合适放大倍数的显微镜，也只能是在标本各部分结构对光的折射率有显著差别的情况下，才能辨认。二、染色的目的

组织经过染色后，由于不同组织成分对染色剂的作用呈现出不同的颜色，产生不同的折射率，使组织和细胞中各种成分在光学显微镜下的分辨率得以提高，有利于在光学显微镜下进行观察。染色是病理检验技术中一项十分重要的基本技术。三、染色的原理

染色过程是染色剂和组织细胞相结合的一个十分复杂的反应过程。目前认为，在这一反应过程中既有化学作用，又有物理作用，因此，组织的染色是二者综合作用的结果。三、染色的原理

用染液对组织切片进行处理，使组织中的不同成分被染上相应的颜色，产生不同的折射率，以利于显微镜观察和分析的方法，称为染色。三、染色的原理（一）物理作用1.毛细管渗透作用2.吸收或溶解作用3.吸附作用（二）化学作用四、染色剂（一）染色剂的一般性质1.发色团2.助色团四、染色剂（二）染色剂的分类1.按染色剂的来源分类（1）天然染料（2）人工合成染料（3）无机化合物四、染色剂2.按染色剂的化学反应分类（1）碱性染料（2）酸性染料（3）中性染料（复合染料）四、染色剂3.按染料的主要用途分类（1）细胞染料1）细胞核染料2）细胞质染料3）细胞化学成分染料：A.脂肪染料B.

糖类染料C.核酸染料D.蛋白质和氨基酸染料四、染色剂（2）组织染料：1）结缔组织和肌纤维染料A.胶原纤维染料B.网状纤维染料C.弹力纤维染料D.肌纤维染料2）神经组织的染料A.尼氏体染料B.神经轴突染料C.神经髓鞘染料D.神经胶质细胞染料五、常用染色术语（一）常规染色（二）单一染色（三）复染色（四）多种染色（五）进行性染色与退行性染色1.进行性染色2.退行性染色五、常用染色术语（六）直接染色与间接染色1.直接染色2.间接染色（七）媒染剂（八）促染剂（九）分化与分化剂

1.酸性分化剂2.氧化分化

3.

媒染分化剂

（十）异染性染色

（十一）蓝化六、染色方法的分类与命名（一）染色方法的分类

目前常用的分类方法有以下几种。

1.按染色的手段分类

2.按染色对象的成分

3.按染色对象的种类六、染色方法的分类与命名

常见命名方法有以下几种。

1.按发明者姓名命名

2.按所用染色剂名称命名

3.

按所染组织名称命名

4.

按试剂+人名或按人名+试剂混合命名

5.按反应方法命名第二节特殊染色一、特殊染色的概念

为了显示特定的组织结构或组织细胞特殊成分，用特定的染料和方法对组织切片进行染色，称为特殊染色，通常是指除HE染色外的所有染色方法。特殊染色也可理解为“选择性染色”，它能选择性地显示组织、细胞中的特殊成分，包括正常成分、异常物质、病变和病原体等，在病理诊断中具有十分重要的辅助作用。二、特殊染色的意义

特殊染色是普通染色的必要补充，是染色技术中不可缺少的部分。选用恰当的特殊染色方法，显示或进一步确定病变性质、异常物质及病原体，对于疾病的诊断和鉴别诊断具有十分重要的作用。在实际工作中，一般是先做HE染色，通过对切片认真细致地观察，仍不能做出正确的诊断或鉴别诊断有困难时，再进行特殊染色。三、特殊染色的分类

特殊染色方法的种类很多，一般根据所染对象的不同，分为结缔组织染色、肌组织染色、神经组织染色、脂质染色、糖类染色、色素类染色、病理内源性沉者物染色、病原微生物染色、内分泌细胞染色等。四、特殊染色的命名

关于特殊染色的命名，至今没有统一的规定，通常采用以下几种方式命名。1.按发明者姓名命名

2.按所用染色剂命名3.

按染色对象命名

4.采用混合命名

第三节染色前后的处理一、染色前处理（一）脱蜡至水（二）脱汞盐结晶（三）脱甲醛色素二、染色后处理染色后处理要经过以下几个步骤。1.分化2.蓝化作用

3.染色后的脱水4.

染色后的透明5.

溶液的更换

三、封固（一）封固剂常用的封固剂可分为两类。1.含水封固剂

甘油明胶2.无水封固剂

中性树胶三、封固（二）封固方法

由于使用的封固剂不同，封固方法也不完全一样。1.无水封固剂2.含水封固剂第四节染色容易出现的问题和注意事项一、染色的一般注意事项1.制片室布局合理

2.严格遵循操作规程

3.灵活应用染色技术

二、染色中容易出现的问题及处理（一）固定液和切片类型的选择1.选择恰当固定液2.选择恰当的切片类型（二）染液的配制1.根据用量和有效期确定染液的配制量

2.注意染液浓度和pH3.注意配制的方法和条件二、染色中容易出现的问题及处理（三）染液的存放与更换1.避光、低温存放染液2.及时清洗染色用具3.定期过滤染液4.及时更新染液（四）染色时间的确定

具体染色时间应根据染液的浓度、使用时间的长短和染色对象的前期处理，以及染色时的环境温度等情况灵活掌握，不能一概而论。小结（1）石蜡切片染色前的脱蜡至水处理必须彻底，二甲苯和乙醇必须保持适当的浓度，不能含有任何杂质成分。（2）用含有升汞的固定液（如Zenker液）固定的组织，染色前必须进行脱汞盐结晶处理。若使用劣质甲醛固定或在高温下用甲醛固定较久组织，染色前必须脱去甲醛色素。小结（3）苏木素染色之后的分化应适度，分化不良或过度均会影响染色效果。（4）染色后用乙醇进行脱水处理时，应由低浓度向高浓度（80%、90%、95%、100%）逐渐过渡，以彻底脱去组织中的水分，为二甲苯进入细胞创造条件。小结（5）染色后一般选用二甲苯作透明剂。但如果封固剂中含有苯成分，透明时只能选用二甲苯