肿瘤细胞增殖动力学课件

肿瘤细胞增殖动力学细胞生物学系刘清华bjqinghua肿瘤细胞增殖动力学WhatKindofDiseaseIsCancer?肿瘤细胞增殖动力学SomeCases病例1：男性76岁，2003年9月3日因干咳、少痰、消瘦就诊。

CT检查确诊肺癌肿瘤细胞增殖动力学病例3：女性43岁，因上腹部时有疼痛伴返酸2

年、加重1个月入院。胃镜活检报告：胃幽门部黏膜内低分化癌。肿瘤细胞增殖动力学病例8：患者男性，34岁。因发现右锁骨肿块3月入院。检查右锁骨外段稍隆起，局部膨大，表面皮肤无红肿或静脉怒张，无疼痛；肩关节活动稍受限。

X光示右锁骨外段明显骨质破坏及增生。病理报告为右锁骨恶性淋巴细胞瘤。肿瘤细胞增殖动力学病例11：女性68岁，阴道不规则流血4-5个月。妇科检查：子宫前位，如妊娠2月大小，可触及数个结节，质地中等。超声检查提示子宫混合性占位性病变。

CT诊断：宫体癌，右侧卵巢囊肿。

病理诊断：子宫恶性混合性苗勒氏瘤，累及输尿管。肿瘤细胞增殖动力学肿瘤学癌发生癌演进临床表现癌治疗癌诊断肿瘤细胞增殖动力学CELLCelljunctionProliferationExtracellularmatrixTelomereSignaltransductionDifferentiationApoptosis肿瘤细胞增殖动力学

2.

WhatWeHaveKnownabouttheCellCycleControl?肿瘤细胞增殖动力学OncogeneAntioncogeneCheckpointsCellDivisionCycleGene,cdcgenes;CyclinsCyclinDependentKinases,CDKsCyclinDependentKinasesInhibitors,CDKIsSphasePromotingFactor,SPFMaturationPromotingFactor,MPF蛋白质水平基因水平肿瘤细胞增殖动力学

3.HowtoControlinaNormalCell?肿瘤细胞增殖动力学ControlofG1phaseControlofSphaseControlofG2phaseControlofMphase肿瘤细胞增殖动力学ControlofG1phaseProliferationfactorsCheckpoint

（G0／G1entrance、RPointG1／S）Cyclin-CDK

（cyclinD-CDK4／6、cyclinE-CDK2）P105RB

CDKI肿瘤细胞增殖动力学肿瘤细胞增殖动力学ControlofSphaseCheckpoint(DNAsynthesison、off)Cyclin－CDKPCNA肿瘤细胞增殖动力学SPF(cyclinA-CDK1)CyclinE-CDK2作为启动蛋白，识别autonomouslyreplicatingsequence，ARS，激活复制起点可能是originrecognitioncomplex，ORC的组成部分Cyclin－CDK肿瘤细胞增殖动力学肿瘤细胞增殖动力学

PCNA

细胞增殖核抗原DNA聚合酶δ的亚基直接参与DNA复制和修复肿瘤细胞增殖动力学

ControlofMphase

CheckpointMPF（cyclinB-CDK1)肿瘤细胞增殖动力学

Checkpoint

G2／M：DNA复制没有完成，激活wee1-mik1蛋白激酶，细胞阻滞于G2期。

M中／晚期：检查微管蛋白的量、微管组织中心功能、纺锤体极性、微管与动粒附着、或附着在动粒上产生的张力。肿瘤细胞增殖动力学

MPF的活性调节

肿瘤细胞增殖动力学

4.What’sWronginaTumorCell?肿瘤细胞增殖动力学oncogene的过表达antioncogene的失活cyclin基因和表达蛋白的异常cdki基因和表达蛋白的异常

肿瘤细胞增殖动力学5.HowtoEvaluateCellProliferation?肿瘤细胞增殖动力学CellProliferationKinetics

研究生物体内各种细胞群体在新生、增殖、消亡过程中处于各种状态的细胞数量、时间参数和分布位置的技术手段。肿瘤细胞增殖动力学检测方法1.细胞计数2.生长曲线3.倍增时间4.生长分数肿瘤细胞增殖动力学5.丢失系数6.标记指数7.分裂指数8.细胞周期参数肿瘤细胞增殖动力学1.CellCounting

直接计数－－台盼蓝计数法比色半定量－－四唑盐法肿瘤细胞增殖动力学四唑盐法

[3-4,4-二甲基噻唑－2]，5－二苯基四氮唑溴盐，简称MTT;

线粒体的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物;

比色测定间接反映活细胞数量。肿瘤细胞增殖动力学

细胞培养

显色:加入MTT溶液(5mg/ml)，继续培养4h，加DMSO，振荡10min

比色：490nm波长测定光吸收值肿瘤细胞增殖动力学

BreastCancerResearchandTreatmeat2004;84:251-260

6.TheirResearchStrategy?7.TheTechnologyTheyUsed?

肿瘤细胞增殖动力学2.GrowthCurveCellculture;Cellcounting：每次至少3瓶，每瓶至少3次，取平均数；共做7天；作图：培养时间为横坐标，细胞数为纵坐标，在对数坐标纸上作图。肿瘤细胞增殖动力学0.10246810Time/dayCancerCellNormalCell0.11101001000单层培养CellNumber0.1肿瘤细胞增殖动力学0246810Time/day0.11101001000CellNumber悬浮培养NormalCellCancerCell肿瘤细胞增殖动力学肿瘤细胞增殖动力学3.DoublingTimeInvivo:DT=0.1×t/logDt–logDoDo

:首次测得的肿瘤直径（cm）

Dt

:t时间后测得的直径（cm）

肿瘤细胞增殖动力学ComputedTomography肿瘤细胞增殖动力学

某转移癌：

Do＝2，Dt＝4，t＝90DT=0.1×90/0.6-0.3=30(d)effectivedoublingtime,TDeff：考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间

potentialdoublingtime,TDpot：不考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间肿瘤细胞增殖动力学原发性肺癌腺癌6421

鳞癌8512

间变性癌5511乳腺癌1714结－直肠癌1990淋巴瘤274肿瘤类型病例数倍增时间（周）780例人体肿瘤体积倍增时间Steel（1977）（未完）肿瘤细胞增殖动力学4.GrowthFraction，GF肿瘤中增殖细胞占细胞总数的比例GF=P/P+QP:proliferationQ：quiescent肿瘤细胞增殖动力学5.丢失系数Φ丢失系数Φ＝KL/KBKL：细胞群体在增殖过程中的丢失率

KB：细胞群体在增殖过程中的生成率

肿瘤细胞增殖动力学6.LabelingIndex,LILI＝Ns/NNs:Numbersphase肿瘤细胞增殖动力学常用方法：

3H-TdR

BrdU

PCNA

、Ki67肿瘤细胞增殖动力学3H-TdR3H-TdR和细胞短暂孵育；间隔时间取材；放射自显影；图像分析仪计数或液闪计数；SPSS统计分析。肿瘤细胞增殖动力学肿瘤细胞增殖动力学BrdUBrdU和细胞共孵育较长时间；取材固定；加入BrdU抗体；加入生物素标记的二抗；肿瘤细胞增殖动力学加入链霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶；DAB显色；图像分析仪计数；SPSS统计分析。肿瘤细胞增殖动力学ChinesejournalofCancer2003;22(11):1127-1134肿瘤细胞增殖动力学PCNA取材固定；加入PCNA抗体；加入生物素标记的二抗；加入底物；显色；图像分析仪计数；SPSS统计分析。肿瘤细胞增殖动力学SynovialsarcomaImmunohistochemicalStrongstainingofPCNA

J.Vet.Sci2004;5(2):173-180肿瘤细胞增殖动力学Ki-67PositivestainingforKi67,CancerCytopathl2004;102:142-9肿瘤细胞增殖动力学7.MitoticIndex，MI经典方法免疫荧光方法肿瘤细胞增殖动力学经典方法Synovialsarcome.MitoticfiguresJ.Vet.Sci2004;5(2):173-180JNipponMedSch2003;70（3）219-226肿瘤细胞增殖动力学免疫荧光方法肿瘤细胞增殖动力学8.ParameterofCellCycleTc、TG1、Ts、TG2和TM；常用的有3H-TdR标记法和流式细胞技术flowcytometry肿瘤细胞增殖动力学FlowCytometry利用