生物化学 课件 第一节 基因工程_第1页
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生物化学第十二章基因工程与常用的分子生物学技术目录第一节基因工程第二节常用的分子生物学技术学习目标1．掌握基因工程的概念。2．熟悉基因工程的基本原理和临床应用；核酸杂交、印迹和PCR技术的原理和临床应用。3．了解基因诊断、基因治疗等新医疗方法；基因测序和基因芯片技术。第一节基因工程一、基因工程的概念基因工程（geneticengineering）又称基因拼接技术或DNA重组技术，即将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法进行改造和重新组合，构建杂种DNA分子，然后导入微生物或真核细胞内，使重组基因在细胞内克隆、表达，产生出人类需要的基因产物，或者改造、创造新特性的生物类型。核心内容：DNA片段的重组和细胞内克隆特点跨物种性基因工程将外源DNA分子进行重新组合且引入到新的寄主生物中进行繁殖，使之具有了跨越天然物种屏障的能力，克服了固有的生物种间限制，扩大和带来了定向改造生物的可能性，这是基因工程的最大特点。无性扩增少量的外源目的基因在寄主细胞中可大量扩增和高水平表达。二、基因工程的原理和过程（一）基因工程的基本工具限制性核酸内切酶简称限制酶，是进行DNA分子剪切的“手术刀”，能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，使较大的DNA分子成为一定大小的DNA片段。二、基因工程的原理和过程（一）基因工程的基本工具DNA连接酶是DNA分子进行拼接的“针线”，恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，将DNA片段进行连接、重组。二、基因工程的原理和过程（一）基因工程的基本工具载体载体是重组DNA分子的“运输车”，需具备下列条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存；②具有一至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入；③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。基因工程常用的载体有：质粒、噬菌体和动、植物病毒等。（二）基因工程的基本过程完整DNA克隆过程包括五大步骤：①目的DNA的分离获取（分）；②载体的选择与准备（选）；③目的DNA与载体的连接（连）；④重组DNA转入受体细胞（转）；⑤重组体的筛选及鉴定(筛）。图12-1以质粒为

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