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DB51DB51/T2404—2017大熊猫种群遗传档案建立技术规程2017-09-19发布2017-10-01实施四川省质量技术监督局发布I 1 1 1 1 2 2 3 4 5 61DB51/T2288-2016野生大熊猫微卫星序列microsatellite是指基因组中由1-6个核苷酸为基本重复单元组成的DNA串联重复序列,例如(AC)n、(A大熊猫线粒体控制区PCR扩增引物(ZhangGTr,5’-ACTCTCCACAATGTCTACGGT-3’2ZX1-F:5’-CTACATAGCCCCAACCCCTTTTC-3’ZX1-R:5’-GGTTCTGGCCGCTGTCTCTACTAT-3’ZFX-F:5’-ATAATCACATGGAGAGCCACAAGCT-3’ZFX-R:5’-CTCCTTTTTCCTTATGCACC-3’号为基本标记,16-30号为备选标记,可根据工作目标选用合适数量的微卫星标记。只有当基本标使用4.1规定的线粒体标记引物对每个DNA样品进行PCR扩增,各取PCR产物2-5μL,用浓度为1.5%的琼脂糖凝胶电泳来检测是否扩增成功,只有当PCR扩增成功的样品才进入后续分析。若如有多份DNA样品来自同一个体,选一份或多份参加后续分析,但必须注明样品编号,3℃退火45s,72℃延伸50s;最后在72℃延伸10分钟。PCR产物在4℃中保存。PCR产物经1.2%琼脂糖凝4到135bp和354bp两个片段。因此,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,出现两条带的是雄性,出现一当同时扩增锌指蛋白基因和SRY基因时,PCR扩增所得产物片段长度为130bp和130bp的片段来自X染色体,长度为210bp的片段来自Y染色体,即雌性样品扩增得到一个130bp的片段,而雄性样品扩增得到130bp和210bp两个片段。因此,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,出现两条当PCR扩增完成后,取PCR产物5μL,经1.5%-2%琼脂糖凝胶电泳检5当两个样品的微卫星标记分型结果中只有一个标记差异时,对出现9.1分子标记的使用6F:GGAAGCATTAAGGAAAF:AAGCAGTTGTTTTTGC7F:AGGCAGATTTCCCACAR:GTGTCTTGACCACCAGTGATGF:CCTACCTATTTACCTACTTAF:AGGCAGATTTCCCACAF:ACGGGAAGCCTGCTTCTR:AGACACCCAACCGACTF:AACATCCTGGGTATTCTR:TGCAGAGTGAGGACCT
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