DB51-T 2966-2022 濒危野生植物及其制品物种鉴定规范

CCSB00DB512022-12-27发布I 2 2 25.2微观形态学指标 2 25.4分子生物学指标 2 2 2 27.2实验室耗材和试剂 3 3 3 3 3 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 5 5 6 6 6 6 6 6 6 7 7 7 7 7 7 7 7 7 8 8 8 8 8 8 8 8 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1濒危野生植物及其制品物种鉴定规范GB/T6682分析实验室用水规格GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化GB/T27025检测和校准实验室能力的通用GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学LY/T2501野生动物及其产品的物种SN/T3689植物检疫性有害生物实验室生物SN/T4626DNA条形码物种3.1濒危野生植物endangeredwi3.2濒危野生植物制品endangeredwildplant3.33.42委托单位（人）提供的、用作物种鉴定的濒危野生植物及其3.54缩略语BOLD：生命条形码数据系统(TheBarcodeofLifeDataSystem)NCBI：美国国立生物技术信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)根据种子、花、等组织的典型或特异性的微观形态学6.3具有物种特异性的微观结构特征的检测样品，采用微观形态学方法进行检验。6.4具有物种特异性生化成分的检测样品，可采用生物化学方法进行检验鉴定。6.6宏观形态学方法中具有物种唯一性的特征指标可以单独使用，如指标特征不具有物种唯一性，则7.1.1实验室应配置与其所应用的检验方法所必需的仪器设备，且应是具有资质的实验仪器设备厂家37.1.2检验方法所必需的关键(核心)设备所产生的数据或结果应7.1.4新购置的仪器设备、或原有仪器设备维修保养后，在使用前应当校准7.2实验室耗材和试剂7.2.1实验室应配置与其所应用的检验方法所必需的实验耗材和试剂，且应是具有资质的厂家生产的7.2.2所有实验耗材和试剂应处于保质期7.2.3商品试剂盒应标明到货日期和有效期。实验室自行配制的试剂应在容器上标明名称、浓度、配7.2.4每一批次购进的耗材和试剂应进行符合性验证等质8.1.2实验室的各功能分区应布局合理，通风良好、光线适度、8.1.3配备生物安全设施，确保环8.2实验室区域设置原则宏观形态学检验、微观形态学检验、生物化学检验和分子生微观形态学检验室和生物化学检验室应分别设检测样品贮存室：主要用于初检室：主要用于案件的登记、检测样品的初检和照相、录相、固定等。试剂贮存和配制室：主要用于试剂的贮存、配制、消耗品的消毒等。数据分析室：主要用于检验结果的分析、比对、鉴定报告的形成等。档案室：主要用于案件资料、实验操作相关资料的存档保存等。9人员要求及管理法规，诚实守信，有良好的职业道德操守，严格遵守行业主49.2技术负责人应具备博士学位或中级以上专业技术职称，相关专业，五年以上相关工作经验，具备过考核后上岗。9.5必要时，技术负责人和鉴定人按照有关要求有配合相关部门履行结果解释和出庭义务。10.1.4检验鉴定如需对检测样品进10.2检验鉴定原则本着由简单到复杂、由无损到有损的原则，确定检验鉴10.3检验鉴定根据检测样品类别，选择适当的检验方法，并确定样品制备方法。显微图片应标注放大倍数。严格设置阳性（巳知的DNA样品）和阴性（不加DNA5PCR扩增产物应双向测序，采用克隆测序时每个PCR产物应测定5个以上。扩增产物经纯化后可直接用于序列测定。PCR产物纯化和测序可分包给已获认可的权威专业技术机构来进行。将平行样本分别送检验鉴定结束后，除留存备份样品以外，剩余变质和超过保留时限的检测样品应及时告知委托单位。携带疫病的检测样品应进行无害化10.4结果分析10.5复检对鉴定结果不明确或其他特殊需要，按有关程序经同意可送相关权威机构进行复核鉴定。10.7鉴定质量控制确保对鉴定质量的有效控制。评审过程和评审发现的问题应形成评审报告，并存档。10.8鉴定报告起草10.9鉴定报告的审核、签发611.2新方法的使用11.3标准方法确认11.3.3如实验室采用的标准方法发生了11.4非标方法确认实验室在没有标准方法或现有标准方法无法完成鉴定的情况下可考虑采用非标方法，但必须经过实验室自行研制的鉴定方法须经同行专家组检验的实验记录，分子生物学的DNA提取记录、12.1.4鉴定文件：包括鉴定意见书12.2操作手册12.3说明书类712.4方法认可记录检验方法等的认可程序、专家会议纪要、认可过程记12.5管理档案物种检验鉴定工作流程图、仪器设备清单、储存试剂的清12.7电子化管理12.8保密13.1.2各样品应标记清楚，防止各样品间的13.2检验人员13.2.3检验操作中应戴一次性手套13.3检验区域13.4检验器材13.5检验过程8在实验室的固定位置应设急救箱和紧急喷淋装置，并有明确标识，所有人员应掌握使用方法。14.2化学药品14.3仪器操作14.3.1仪器操作说明中应注明该仪器操作中发生事故或故障的可能性及原因，并注明预防和处理的14,4检验人员14.5样品处置疫病的传染、传播。取样可按照SN/T3689进行植物检疫性有15.4与技术先进的研究机构和犯罪调查专家合作开展能力建设和培训。916.1对参与鉴定过程的鉴定工作人员进行培训，以不断提高鉴定人员的技术能力。16.3实验室制定计划开展实验室A.1概述对较短的DNA序列来进行物种鉴定的一种分子生物学技术，是传统形态鉴别方法的有效补充。由于不同物种的DNA序列是由腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)四种碱基以不同顺序排成，因此对某一特定DNA片段序列进行分析即能够区分不同物种。DNA条形码分子鉴定通常是选用A.2仪器的一般要求动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段中碱基顺序或大小，以及定量A.3.1检测样品处理psbA-trnH序列扩增正向引物psbAF：5´-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3´;反向引物trnHR：5´-A.3.3.2反应体系A.3.3.3扩增程序采取1%琼脂糖，100V，电泳方法检测PCR产物。电泳后，PCR产物应在相应的DNA条形码序列长度位切取目的条带所在位置的在紫外灯下迅速凝胶,采用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒进行纯化。使用DNA测序仪对目的条带进行双向测序,PCR扩增引物作为测序引物,测序原理同Sanger测序法。有目的条带的序列拼接对双向测序峰图应用有序列拼接功能的专业软件进行序列拼接,去除引物序列质量与方向为确保DNA条形码序列的可靠性,需去除测序结果两端信号弱或重叠峰区域,序列方将获得的序列与NCBI及BOLD中DNA条形码标准小花龙舌兰(姬乱雪)Agaveparviflora皇后龙舌兰Agavevictoriae-reginae#4间型酒瓶兰Nolinainterrata克雷塔罗丝兰YuccaqueretaroensisGalanthusspp.Sternbergiaspp.德氏漆Operculicaryadecaryi织冠漆Operculicaryahyphaenoides象腿漆Operculicaryapachypus安博棒锤树Pachypodiumambongense巴氏棒锤树Pachypodiumbaronii德氏棒锤树PachypodiumdecaryiHoodiaspp.★蛇根木(印度萝芙木)Rauvolfiaserpentina★人参Panaxginseng(仅俄罗西洋参Panaxquinquefolius智利南洋杉AraucariaaraucanaBeaucarneaspp.★桃儿七Podophyllumhexandrum哈氏老人须Tillandsiaharrisii卡氏老人须Tillandsiakammii旱生老人须Tillandsiaxerographica岩牡丹属所有种Ariocarpusspp.星冠Astrophytumasterias花笼Aztekiumritteri精美球Coryphanthawerdermannii林氏鹿角掌Echinocereusferreirianusssp.lindsayorum珠毛柱Echinocereusschmollii小极光球Escobariaminima须弥山Escobariasneedii白斜子Mammillariapectinifera(包括亚种solisioides)圆锥花座球Melocactusconoideus晚刺花座球Melocactusdeinacanthus苍白花座球Melocactusglaucescens疏刺花座球Melocactuspaucispinus帝冠Obregoniadenegrii金毛翁Pachycereusmilitaris布氏月华玉Pediocactusbradyi银河玉Pediocactusknowltonii雏鹭球Pediocactusparadinei斑鸠球Pediocactuspeeblesianus天狼Pediocactussileri斧突球属所有种Pelecyphoraspp.布氏白虹山Sclerocactusblainei麒麟属所有种Pereskiaspp.、Pereskiopsisspp.和顶花掌属所有种Quiabentiaspp.)突氏玄武玉Sclerocactusbrevihamatusssp.tobuschii短刺白虹山Sclerocactusbrevispinus新墨西哥鯱玉Sclerocactuscloverae白琅玉Sclerocactuserectocentrus苍白玉Sclerocactusglaucus藤荣球Sclerocactusmariposensis月想曲Sclerocactusmesae-verdae尼氏鯱玉Sclerocactusnyensis月童Sclerocactuspapyracanthus毛刺球Sclerocactuspubispinus塞氏鯱玉Sclerocactussileri犹他球Sclerocactuswetlandicus怀氏虹山Sclerocactuswrightiae鳞茎玉属所有种Strombocactusspp.姣丽球属所有种Turbinicarpusspp.尤伯球属所有种Uebelmanniaspp.多柱树Caryocarcostaricense云木香Saussureacostus柔毛沙葫芦Zygosicyospubescens沙葫芦Zygosicyostripartitus智利肖柏Fitzroyacupressoides姆兰杰南非柏Widdringtoniawhytei★桫椤属所有种Cyatheaspp.印度苏铁Cycasbeddomei★金毛狗脊Cibotiumbarometzdeltoidea捕蝇草Dionaeamuscipula安波沃本大戟(安波麒麟)Euphorbiaambovombensis开塞恩坦马里大戟Euphorbiacapsaintemariensis克氏大戟Euphorbiacremersii(包括型viridifolia和变种rakotozafyi)筒叶大戟(筒叶麒麟)Euphorbiacylindrifolia(包括亚种tuberifera)德氏大戟(皱叶麒麟)Euphorbiadecaryi(包括变种ampanihyensis、robinsonii和spirosticha)费氏大戟(潘郎麒麟)Euphorbiafrancoisii莫氏大戟Euphorbiamoratii(包括变种antsingiensis、bemarahensis和multiflora)小序大戟Euphorbiaparvicyathophora扁枝大戟Euphorbiaquartziticola图拉大戟EuphorbiatulearensisEuphorbiamisera和被列入附录阁Euphorbiatrigona栽培品种的Euphorbianeriifolia人工培植变异的龟纹箭Euphorbia★蒙古栎Quercusmongolica(俄罗斯)簇生福桂花Fouquieriafasciculata普氏福桂花Fouquieriapurpusii玉)Fouquieriacolumnaris★买麻藤Gnetummontanum(尼泊枫桃Oreomunneapterocarpa玫瑰安妮樟Anibarosaeodora巴西黑黄檀Dalbergianigra德米古夷苏木GuibourtiademeuseiGuibourtiapellegriniana特氏古夷苏木Guibourtiatessmannii巴西苏木Paubrasiliaechinata大美木豆Pericopsiselata多穗阔变豆Platymisciumparviflorum刺猬紫檀Pterocarpuserinaceus檀香紫檀Pterocarpussantalinus染料紫檀Pterocarpustinctorius南方决明Sennameridionalis微白芦荟Aloealbida白花芦荟(雪女王)Aloealbiflora阿氏芦荟Aloealfredii贝氏芦荟(斑蛇龙)Aloebakeri美丽芦荟Aloebellatula喜钙芦荟Aloecalcairophila扁芦荟Aloecompressa(包括变种vars.paucituberculata,rugosquamosa和schistophila)德尔斐芦荟Aloedelphinensis德氏芦荟Aloedescoingsii脆芦荟Aloefragilis十二卷状芦荟(琉璃姬孔雀)Aloehaworthioides(包括变种var.aurantiaca)列入附录的翠叶芦荟Aloevera，亦即Aloebarbadensis)海伦芦荟Aloehelenae艳芦荟Aloelaeta(包括变种var.maniaensis)平列叶芦荟Aloeparallelifolia小芦荟Aloeparvula皮氏芦荟(女王锦)Aloepillansii多叶芦荟Aloepolyphylla劳氏芦荟Aloerauhii索赞芦荟Aloesuzannae变色芦荟Aloeversicolor沃氏芦荟Aloevossii★盖裂木Magnolialiliiferavar.obovata(尼泊格氏猴面包树Adansoniagrandidieri矮桃花心木Swieteniahumilis#4大叶桃花心木Swieteniamacrophylla#6(新热带种群)桃花心木Swieteniamahagoni劈裂洋椿Cedrelafissilis(玻阿根廷洋椿Cedrelaodorata(巴西和玻利维亚、以及卡西猪笼草Nepentheskhasiana拉贾猪笼草NepenthesrajahNepenthesspp.★水曲柳Fraxinusmandshurica(俄罗斯)马达加斯加船形兰Aerangisellisii大花蕾立兰Cattleyajongheana浅裂蕾立兰Cattleyalobata血色石斛Dendrobiumcruentum墨西哥兜兰Mexipediumxerophyticum★兜兰属所有种Paphiopedilumspp.鸽兰Peristeriaelata美洲兜兰属所有种Phragmipediumspp.★云南火焰兰Renantheraimschootiana★肉苁蓉Cistanchedeserticola拟散尾葵Dypsisdecipiens马岛葵Beccariophoenixmadagascariensis三角槟榔(三角椰)Dypsisdecaryihalleuxii子)Marojejyadarianii繁序雷文葵Ravenealouvelii子)Ravenearivularis林扇葵Satranaladecussilvae长苞椰Voanioalagerardii巨籽棕Lodoiceamaldivica(塞舌尔)尼泊尔绿绒蒿Meconopsisregia(尼泊尔)紫红叶蒴莲Adeniafiringalavensis鳄鱼蔓Adeniaolaboensis小叶蒴莲Adeniasubsessilifolia黄花艳桐Uncarinagrandidieri粉花艳桐Uncarinastellulifera危地马拉冷杉Abiesguatemalensis★红松Pinuskoraiensis(俄罗弯叶罗汉松Podocarpusparl