微生物学检验技术 课件 11项目十一：细菌培养技术

项目十一细菌培养技术学习目标项目十一细菌培养技术1、掌握细菌有氧培养、二氧化碳培养的方法。2、了解细菌厌氧培养的方法。3、熟悉全自动血液培养系统的原理及检测方法。思维导图项目十一细菌培养技术一、细菌有氧培养项目十一细菌培养技术一、细菌有氧培养概述有氧培养法是至需养菌或兼性厌氧菌在有氧条件下的培养。本法是临床细菌实验室最常用的培养方法。一、细菌有氧培养

方法将已接种好的平板、斜面、液体培养基等在空气中置于37℃孵育箱内孵育18~24h，无特殊要求的细菌均可以在此条件下生长。少数生长缓慢的细菌需要培养3~7d，甚至1个月才能生长。另外，有的细菌最适生长温度是28~30℃，如鼠疫耶尔森菌，甚至在4℃也能生长，如李斯特菌。为了孵育箱内保持一定的湿度，可在其内放置一杯水。对于培养时间较长的培养基，接种后应将试管口用棉塞或硅胶塞塞好，再用石蜡-凡士林封固，以防培养基干裂。一、细菌有氧培养方法二、细菌二氧化碳培养项目十一细菌培养技术二、细菌二氧化碳培养概述二氧化碳培养是将已经接种的培养基放置于5％~10％co2环境中进行培养的方法。很多细菌在其生理生化代谢过程中需要co2，分解糖类产生的co2已足够其所需，且空气中还有微量co2，不必额外补充。只有少数细菌，如肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌等的培养，特别是在其初次分离时需要在5％~10％co2环境中培养才能生长良好。二、细菌二氧化碳培养方法co2培养箱是一台特制的培养箱，既能调节co2的含量，又能调节所需温度co2从培养箱外的钢瓶通入培养箱内，培养箱能自动调节co2的含量、温度和湿度，培养物置于培养箱内培养一段时间以后直接观察其生长结果，此法适于大型实验室应用。二氧化碳箱培养二、细菌二氧化碳培养方法二氧化碳箱培养二、细菌二氧化碳培养方法烛缸培养取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，将接种好的培养基放入缸内，点燃蜡烛后放入缸内，要将蜡烛放置在稍高于培养物的位置，缸盖或缸口均匀涂抹凡士林，盖严缸盖。蜡烛燃烧消耗氧，因氧减少而使蜡烛自行熄灭，此时容器内因蜡烛燃烧产生的co2约为5％~10％，基本可满足细菌co2培养的要求。最后连同容器一起置于37℃孵育箱内孵育，时间一般在18~24h，少数菌种需培养3~7d，甚至更长。二、细菌二氧化碳培养方法烛缸培养二、细菌二氧化碳培养方法重碳酸盐-盐酸法

每升容积的容器内，重碳酸盐与盐酸按0.4g与0.35mL比例，分别将两种试剂各置一器皿（如平皿）内，连同器皿置于标本缸或干燥器内，盖严盖后将容器倾斜，两种试剂接触后即可产生co2。三、细菌厌氧培养项目十一细菌培养技术三、细菌厌氧培养概述厌氧菌对氧非常敏感，培养过程中需造成低氧化还原电势的厌氧环境。常用的厌氧培养法可分为：物理法、化学法、生物法。具体技术方法有：厌氧罐培养法、气袋法、厌氧手套箱法和需养菌共生厌氧法等。三、细菌厌氧培养概述

厌氧培养箱四、全自动血液培养项目十一细菌培养技术四、全自动血液培养概述

健康人体的血液是无菌的，当人体局部感染向全身播散并出现全身感染时，血液中可出现细菌。菌血症（bactereimia)和脓毒血症(sepsis)等可危及患者生命。准确、快速的培养出血液中的细菌对诊断和治疗具有重要的意义。全自动血液培养检测和分析系统，可检测来自菌血症或真菌血症可疑患者的需氧及厌氧血液标本。目前最常见的检测系统有2种：BacT/ALert全自动血液培养系统和BACTECTM9000系列。需氧血培养瓶四、全自动血液培养概述血培养瓶厌氧血培养瓶成人血培养瓶儿童血培养瓶四、全自动血液培养

BacT/ALert全自动血液培养系统原理BacT/ALert全自动血液培养系统采用非侵入性声色检测原理。利用微生物在培养基中代谢基质时产生co2，进而使瓶底对co2敏感的乳胶感应器发生颜色改变，感应器颜色由蓝绿色不可逆的变浅，转为黄色。仪器培养孔底的光电探测器测量反射光变化，并按相应计算公式计算，及时报告生长信号或在设定时间报告阴性。阳性生长判读公式主要有：起始阈值公式、加速度公式和速率公式。四、全自动血液培养

BacT/ALert全自动血液培养系统仪器基本结构

恒温孵育及检测系统:仪器设有恒温及振荡装置，在培养瓶进行培养的同时不断进行振荡（结核分枝杆菌培养不用振荡）和检测分析。检测系统设在每个仪器孔位的底部。四、全自动血液培养

BacT/ALert全自动血液培养系统

计算机及外围设备：计算机接受感应器信号，判断检测结果。通过条码识别标本编号，记录、储存和分析数据，打印报告。四、全自动血液培养

BacT/ALert全自动血液培养系统主要机型BacT/ALert240、120、3D及MB/BacT。acT/ALert3D为抽屉式设计，每抽屉设计60个培养瓶检测位。通过对单个抽屉的不同设置，可以在同一台孵育系统中同时进行普通细菌培养和结核分枝杆菌培养；MB/BacT是专用于培养分枝杆菌的系统。二、细菌二氧化碳培养

BacT/ALert全自动血液培养系统四、全自动血液培养

原理BACTECTM9000

微生物在生长过程中消耗培养瓶中的营养物质，代谢引起co2浓度变化，而co2浓度的改变可直接激活培养瓶底部包埋的对co2浓度变化敏感的荧光物质，在二极管的激发下荧光物质释放荧光，荧光强度变化可直接反应培养瓶内co2浓度变化。系统每10min自动测定并记录荧光强度。连续检测获得足够数据后，由计算机处理系统进行综合分析并即刻报告培养结果。四、全自动血液培养

仪器基本结构恒温孵育及检测系统：仪器设有恒温及振荡装置，在培养瓶进行培养的同时不断进行振荡和检测分析。检测系统设在仪器每个孔位的底部。每15min检测一次荧光强度，检测数据传送至系统软件及时处理。BACTECTM9000四、全自动血液培养计算机及外围设备：计算机