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ICS65.020.20CCSICS65.020.20CCSB23内蒙古自治区地方标准DB15/T3699—2024马铃薯种质资源离体培养及保存技术规程Technicalcodeofpracticefortissuecultureandpreservationofpotatogermplasmresources2024-10-252024-10-252024-11-25内蒙古自治区市场监督管理局发布前 言本文按GB/T1.1—2020《准工导则 第部分标化件结和起规》规起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会(SAM/TC20)归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。本文件主要起草人：曹春梅、逯春杏、王晓娇、许飞、韩艺、张翠玲、胡嘉鑫。马铃薯种质资源离体培养及保存技术规程范围本文件适用于马铃薯种质资源离体培养及保存。（NY/T401脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程下列术语和定义适用于本文件。下列术语和定义适用于本文件。茎尖剥离apicalstripping应用茎尖分生组织培养技术，选取马铃薯芽顶端部分（直径0.1mm～0.3mm），带有1～2个叶原基的茎尖分生组织，移植到诱导培养基中培养。离体培养isolatedculture4茎尖剥离（脱毒）材料的选取PSTVd尖作为材料。5脱毒与培养收获脱毒材料，将块茎放置在温室或培养箱内进行催芽处理。待芽萌发2cm时，在温度35℃~37℃进行高温钝化处理15d，光照/黑暗12h，光照强度2000Lx。选用MS+0.5mg/L萘乙酸+0.1mg/L6-MS+0.2mg/L5.8~6.012125min~30min24h取材2cm2cm左清洗30min。消毒753035%105min~10min解剖镜下，用无菌解剖针或手术刀剥取带有1解剖镜下，用无菌解剖针或手术刀剥取带有1~2个叶原基的茎尖分生组织，剥离后的茎尖分生组织直径0.1mm~0.3mm，接种到灭菌的培养基中进行培养，培养瓶或试管外壁写好编号和日期。茎尖培养条件光照培养14h，保持24℃，光照强度1500Lx~2000Lx，暗培养10h，保持18℃。MS3~4（系病毒检测按照NY/T401对扩繁苗进行PVX、PVY、PVS、PVA、PVM、PLRV病毒检测。6试管苗保存MS+20g/L甘露醇，pH值5.8~6.0。22℃~24℃、光照强度2000Lx~3000Lx16h/d2w8℃~1012h/d2000Lx~3000Lx采用紫外线、熏蒸法，每隔10d对培养室进行一次消毒，及时取出污染的试管苗并进行高温灭菌处理。7试管薯诱导诱导培养基配方MS+100g/L蔗糖+4.5g/L琼脂粉+1g/L活性炭，pH值为5.8~6.0。诱导条件将正常培养4w的试管苗置于温度17℃~18℃、光照时间8h/

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