精液检验（临床检验技术课件）

精液一般性状检查01外观正常：刚排出时呈灰色或乳白色，不透明胶冻状；自行液化后为灰白色，半透明液体红色血性：生殖系统炎症、结核、结石或肿瘤黄色脓性：精囊炎或前列腺炎02酸碱度（pH）应在精液液化后，且在60分钟内完成正常精液为弱碱性，pH值7.2～8.0碱性的精囊腺分泌液和酸性前列腺分泌液的平衡pH＜7.0并有精液量减少：输精管道阻塞、射精管和精囊腺缺如或发育不良pH＞8.0：急性前列腺炎、精囊炎或附睾炎03量一次排精量1.5~6ml，与射精频度呈负相关WHO推荐样本容器称重法检测量03液化时间精液液化时间：精液排出后，由胶冻状转变为流动状液体所需的时间精囊腺凝固酶前列腺蛋白水解酶刚排出的精液03液化时间1、测定方法接收标本，观察→37℃孵育→每5min观察（1）肉眼观察法：由胶冻状变为均匀流动状液体，停止计时（2）滴管法：用口径较细的滴管吸取精液，若很容易被吸取且未见精液呈条索状，停止计时03液化时间2、质量保证（1）排精后立即准确记录排精时间，尽快送检（2）观察应保持在37℃恒温环境中，每5min观察1次（3）正常精液可以含有少量不液化的胶冻状颗粒，无临床意义（4）60min仍未液化的，报告液化时间大于60min03液化时间3、方法学评价肉眼观察法操作简单、实用，临床常用，不足之处是结果判断缺乏客观标准，受经验和主观因素影响。滴管法操作简单、实用，临床常用，结果准确性和重复性好于肉眼观察法。03液化时间3、方法学评价正常：精液离体后5~10min开始液化，30min内完全液化。液化时间＜60min04液化时间3、方法学评价正常：精液离体后5~10min开始液化，30min内完全液化。液化时间＜60min05黏稠度精液黏稠度：指精液完全液化后的黏度测定方法：（1）滴管法：用口径约1.5mm的塑料吸管缓慢地将液化精液吸入，观察在重心作用下精液形成黏液丝的长度。（更容易观察结果）（2）玻棒法：用玻璃棒插入液化精液，观察提起后形成黏液丝的长度。05黏稠度正常：拉丝长度＜2cm，呈水样滴管法测定时，形成不连续的小滴显微镜检验取混匀、液化的精液涂片，观察有无精子及是否运动与运动状态等。若未见精子，将标本3000r/min离心15min，取沉淀物重新检查。仍未见精子，则不必继续检查，可报告离心后未发现精子。前言显微镜检查方法01精子活动力指精子运动的能力，反映精子质量WHO将精子活动力分为3级：PR、NP、IM分级特点运动活跃型（PR）精子运动活跃、线性运动或者在较大的范围内运动（不考虑运动的速度）非运动活跃型(NP)精子运动但不活跃，如精子在较小的范围内运动，精子头部轻微移位或尽有鞭毛摆动完全不动型（IM）精子完全不动01精子活动力1、测定方法取混匀液化精液1滴加于载玻片上，覆盖盖玻片→低倍镜观察→高倍镜观察并计数。01精子活动力2、质量保证（1）标本：立即送检，注意保温

液化后立即检查

最好在30min内，不能超过1h（2）器材：采用22mm×22mm盖玻片

推荐使用带有网线和网格的目镜01精子活动力（6）高倍镜计数：建议计数2次至少在5个不同区域计数计数总数≥200个（3）温度：标本37℃条件下孵育

使用预热的载玻片和盖玻片使用带加热37℃载物台的显微镜（4）混匀：充分混匀标本（5）制片：制成厚度约20μm的检查涂片

避免产生气泡01精子活动力3、方法学评价方法评价显微镜检查临床常用，但人为影响因素大，质量控制难度大，误差较大，重复性较差连续摄影法WHO推荐方法，直观、准确度高，但需要高精度设备精子质量分析仪操作简便，但影响因素多，需要专用设备01精子活动力3、方法学评价正常：总活力精子(PR＋NP)≥40%，

前向运动精子(PR)≥32%减低：精索静脉曲张、静脉血回流不畅；

生殖系统非特异性感染、使用某些药物等02精子活动率指在显微镜下直接观察活动精子所占精子总数的百分率正常：排精60min内，为80~90%，至少>60%减低：精索静脉曲张、生殖系统感染、理化因素、免疫因素等精子活动率<60%，可使生育力下降03精子存活率即精子活率，主要用于评估精子膜的完整程度（1）原理：活精子细胞膜完整，加入染料后不着色

死精子细胞膜缺损，染料可进入精子（2）操作步骤：染色→加盖玻片→静置→低倍镜观察→高倍镜观察1、伊红染色法03精子存活率精子头部呈白色或淡粉红色，则为活精子精子头部呈红色或暗粉红色，则为死精子如果染色仅限于颈部区域，剩余的头部未染色，则可认为是“颈部细胞膜不全”如果难以辨识浅染的头部，可使用苯胺黑以增加背景的对比度1、伊红染色法03精子存活率原理：活精子膜完整，将精子加入低渗溶液，水分进入精子，精子尾部肿胀/弯曲操作步骤：取低渗膨胀液1ml，37℃预温5min→加液化精液0.1ml，混匀→37℃孵育30min→取精液涂片、加盖玻片→相差显微镜下观察、计数2、低渗肿胀精子活率试验03精子存活率（1）原理：活精子膜完整，将精子加入低渗溶液，水分进入精子，精子尾部肿胀/弯曲（2）操作步骤：取低渗膨胀液1ml，37℃预温5min→加液化精液0.1ml，混匀→37℃孵育30min→取精液涂片、加盖玻片→相差显微镜下观察、计数2、低渗肿胀精子活率试验03精子存活率（3）结果判断：精子尾部未膨胀为死精子精子尾部膨胀为活精子2、低渗肿胀精子活率试验03精子存活率（1）每个标本至少要计数200个精子，同时检测两次（2）液化后尽快评估，排精后1h内完成3、质量保证03精子存活率4、方法学评价方法评价染色法操作简便、快速，结果准确，重复性较好，但背景对比度不佳，淡染精子分辨不清低渗肿胀精子活率试验设备复杂，试验结果与精子功能试验有良好的相关性03精子存活率4、方法学评价参考区间：精子存活率≥58%（低渗肿胀试验）精子存活率降低是男性不育的重要因素之一，正常有生殖能力的男性活精子率一般≥75%。精子存活率＜50%，即可诊断为死精子症04精子凝集活动精子以不同方式，如头对头、尾对尾或混合型相互粘附在一起的现象等级凝集情况Ⅰ零散凝集，每个凝集<10个精子，有很多自由活动的精子Ⅱ中等凝集，每个凝集10~50个精子，存在自由活动的精子Ⅲ大量凝集，每个凝集>50个精子，仍有一些自由活动的精子Ⅳ全部凝集，所有精子聚集，数个凝集又粘附在一起头对头尾对尾尾端对尾端混合型纠结型04精子凝集参考区间：无凝集~Ⅰ级存在凝集并不能充分证实不育的原因系免疫性，但暗示有抗精子抗体的存在，应进一步检查以明确诊断严重的精子凝集影响精子活力和密度的评估05精子计数精子浓度：单位体积内的精子数量单次排出的精子绝对数量：精子浓度×本次精液量1、显微镜计数法（1）原理：改良牛鲍计数板（2）精液稀释液：NaHCO3（破坏精液粘稠性）、甲醛（杀死和固定精子）（3）操作步骤：精液稀释液0.38ml→加液化精液20μl，混匀→充池，静置→高倍镜计数05精子计数2、质量保证（1）检测标本必须完全液化，吸取精液量必须准确（2）直接涂片未发现精子，离心后两次检测均无精子，则报告“无精子”（3）计数时以头部为基准，应计数完整结构的精子，在10~15min内计数完，每次至少计数200个05精子计数3、方法学评价显微镜计数法：检测简便，成本低，但误差较大计算机辅助精液分析：快速，重复性好，但易受其他物质的干扰精子质量分析仪：简单快速，重复性较好，但易受光电性能的影响05精子计数4、参考区间精子密度≥15X106/ml；精子总数≥39X106精子/1次射精5、临床意义精子总数是衡量睾丸生成精子的能力及男性生殖道是否通畅的指标精子密度持续＜15X106/ml或精子总数＜39X106精子/1次射精为少精子症精液多次检查无精子时为无精子症（连续检查3次，离心后沉淀物中仍无精子）05精子计数精子浓度减低或无精子症的临床意义06精子形态1、正常精子形态06精子形态1、正常精子形态06精子形态2、异常精子形态06精子形态06精子形态3、精子形态检查方法：湿片法：精子高倍计数后，再观察精子形态涂片染色法;WHO推荐使用巴氏染色法

涂片→干燥→固定、染色→油镜下计数200个精子形态06精子形态3、精子形态检查方法：正常男性精液中正常形态精子≥30%；畸形精子＜20%。畸形精子增多见于感染、外伤、高温、放射线、酒精中毒、药物、工业废物、环境污染、激素失调或遗传因素等导致睾丸异常、精索静脉曲张等。07非精子细胞非精子细胞指精液中的上皮细胞、白细胞和不成熟的生精细胞等。检查法：WHO推荐采用正甲苯胺蓝过氧化酶染色法，白细胞呈阳性，生精细胞呈阴性。正常不成熟的生精细胞＜1%，白细胞＜5/HP，偶见红细胞。若睾丸受损，精液中不成熟的生精细胞增多；精液中红细胞与白细胞增多见于生殖系统炎症、结核等，若白细胞＞1.0×109/L称为白细胞精子症。精液化学与免疫学检查01化学检查枸橼酸、锌、谷氨酰转肽酶、酸性磷酸酶→前列腺功能果糖、前列腺素→精囊功能游离左旋肉毒碱、甘油磷酸胆碱、中性α-葡萄糖苷酶→附睾功能01化学检查1、果糖精液中的果糖来自精囊液，由精囊所分泌。它是精子活动的能源。若精液果糖浓度减低将使精子活动力减弱，影响受精率。在先天性精囊缺如、逆行射精等时无果糖；在精囊腺炎和雄激素分泌不足时果糖减低。［参考值］吲哚比色法：≥13μmol/一次射精01化学检查2、酶类（1）酸性磷酸酶（acidphosphatase，ACP）精浆中的酸性磷酸酶几乎全部来自前列腺，属前列腺酸性磷酸酶。前列腺炎时ACP活性减低，可使精子活动减弱，受精率下降；前列腺癌和前列腺肥大时，ACP活性可增高。［参考值］磷酸苯二钠比色法：48.8~208.6U/ml01化学检查2、酶类（2）乳酸脱氢酶-X（LD-X），是存在于精母细胞、精子细胞和精子线粒体中的特异酶，具有组织特异性，对精子生成、代谢、获能、活动能力和受精过程均有重要作用。

LD-X活性与精子浓度特别是活精子浓度呈良好的正相关，活性减低可致生育力下降。［参考值］聚丙烯酰胺电泳法：相对活性≥42.6%01化学检查2、酶类（3）精子顶体酶存在于精子项体内，是一种蛋白水解酶，在受精过程中起重要作用。活性减低将致生育力下降，常作为病人精子受精能力和诊断男性不育症的参考指标。［参考值］BAWW-ADH法（X±s）36.72±21.43U/L01化学检查3、锌精液中含多种微量元素，其中锌能促进生殖器官发育，维持正常生精功能，提高精子浓度和活力。精液锌减低可致生殖器官发育不良、精子生成减少、死精症等。严重缺陷锌可致不育症。精浆锌测定可作为评价男性生育功能和诊治不育症的参考指标之一。［参考值］Zn（X±s）24μmol/一次射精检测项目检测方法及参考区间临床意义酸性磷酸酶（现临床上被PSA代替）磷酸苯二钠比色法：48.8~208.6U/ml减低：见于前列腺炎，可使精子活动减弱，受精率下降增高：见于前列腺癌和前列腺肥大乳酸脱氢酶-X聚丙烯酰胺电泳法：相对活性≥42.6%；绝对活性（1430±940）U/L减低：见于少精液症或无精液症中性α-葡萄糖苷酶比色法：≥20mU/1次射精其活性与精子密度、精子活力呈正相关，有助于鉴别输精管阻塞、睾丸生精障碍所致的无精子症精子顶体精氨酸酰胺酶比色法：48.2~217.7μU/106精子其活性与精子计数、精子顶体完整率呈正相关。活性减低可导致不育枸橼酸紫外比色法：50nmol/1次射精吲哚比色法：≥13μmol/1次射精与睾酮水平相关，可以评价雄激素分泌状态。显著减少见于前列腺炎果糖间苯二酚比色法：9.11~17.67mmol/L吲哚比色法：≥13μm