检验科血清同型半胱氨酸标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-040版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第1页共5页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林华2011-07-01同型半胱氨酸测定标准操作规程1检验申请单独检验项目申请：同型半胱氨酸测定(缩写:Hcy);组合项目申请：。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存 2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定4天，普通冰箱中（2～8℃）稳定数周。-20℃可保存数月；应避免标本反复冻溶。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素，不可用EDTA抗凝。2.3.3采血前请尽量避免高蛋白饮食，高蛋白饮食可能导致同型半胱氨酸升高。2.3.4使用下列药物治疗的病人,会引起同型半胱氨酸水平偏高:氨甲蝶呤、卡马西平、苯妥英、一氧化二氮、6-氮尿嘧啶苷等。3方法原理本品是基于小分子捕获技术（SMT）的S-腺苷同型半胱氨酸的方法。同型半胱氨酸被转化为游离型后，通过与共价底物反应，循环放大，同时产生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使NADH转化为NAD+，样本中的同型半胱氨酸的浓度与NADH的变化成正比。4试剂及其他用品4.1试剂：同型半胱氨酸（循环酶法）测定试剂盒，由四川迈克生物科技股份有限公司出品。4.2试剂盒保存：未启封试剂盒在2～8℃保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定7天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或空白吸光率>2.0时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.3试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分：R1:S-腺苷甲硫氨酸（SAM）0.1mmol/lNADH0.2mmol/l三（2羧乙基）磷氯化氢（TCEP）0.5mmol/lα-酮戊二酸5.0mmol/lHcy甲基转移酶（HMTase）5.0KU/L谷氨酸脱氢酶（GLDH）10.0KU/LR2:S-腺苷同型半胱氨酶水解酶3.0KU/L腺苷脱氨酶(ADA)5.0KU/L5校准品与校准模式5.1校准品：与试剂盒配套的校准液（3个不同水平）。5.2校准类型和校准点数目：非线性模式，3个校准点。5.3校准周期：校准间隔时间自定。但在：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。5.4校准液重建方法：3个校准品均为液体,即开即用。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用由由四川迈克生物科技股份有限公司提供的一个定值质控血清。6.2质控液重建方法：液态质控品，用前应充分混匀，动作应轻柔，用完后应立即入2-8℃保存；避免高温及反复冻融。6.3质控品测定：在每一天标本中测定质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。7适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。9主要分析参数参见说明书。10结果计算仪器根据非线性校准曲线自动给出每个标本测定结果。11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：3.0—50.0μmol/l，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能12.1精密度：批内CV<4.6％，总CV<5.9％；12.2准确度：不准确度小于15%。12.3空白吸光度：试剂的空白吸光度小于2.0(主波长340nm,光径10mm).12.4线性范围：3.0～50μmol/l。12.5方法的有限性及干扰因素：12.5.1应避免溶血、混浊及严重脂血样本；12.5.2不可用EDTA抗凝。12.5.3样本中Hcy含量超过50μmol/l，则用蒸馏水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。13参考范围及医学决定水平参考范围：5-20μmol/ml14临床意义14.1Hcy与心血管系统疾病高于15μmol/l被认为是高同型半胱氨酸血症（HHcy）。HHcy是冠心病（CHD）的独立危险因素，CHD患者中30%可见HHcy。HHcy患者发生心肌梗塞的危险性明显增高；它也是先天性心脏病的一个独立危险因素，而且冠状动肪病变支数随着血浆Hcy浓度增高而增加。14.2HHcy与神经系统疾病HHcy是脑卒中的一个独立危险因素,随着Hcy浓度的增高,脑中风危险度增加1.87倍。14.3HHcy与糖尿病、肾病的关系研究表明，Ⅱ型糖尿病患者血Hcy浓度高于正常对照，且与空腹血糖和糖尿病病程显著相关；慢性肾病病人因排泄Hcy功能障碍，血中HHcy增加造成动脉粥样硬化和心血管疾病死亡率增加。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：通常无其他相关项目。16无威胁生命的“紧急值”及报告规定17有关引用程序与文件17.1Abbott自动