TESL 32004-2024 混合型饲料添加剂甘露寡糖

CCSB46T/ESLMixedfeedadditive—Mannanoligosa湖北省饲料工业协会发布T/ESL32004—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖北省饲料工业协会饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本文件起草单位：湖北邦之德牧业科技有限公司、湖北华扬科技发展有限公司、山川生物科技(武汉)有限公司、荆州市农业综合执法支队。本文件主要起草人：吴晓峰、陶敏、熊娟、张涛、李洪波、张茜茜、杨红军、陈战英、颜盼、王启军、徐丽、廖媛媛、何佳。1T/ESL32004—2024混合型饲料添加剂甘露寡糖本文件规定了混合型饲料添加剂甘露寡糖的术语和定义、技术要求、取样、检验规则及标签、包装、运输、贮存和保质期，描述了相应的试验方法。本文件适用于以棕榈仁粕等为原料，经酶解提取、浓缩、干燥等工艺制成的饲料添加剂甘露寡糖为主要原料，与载体混匀后得到的混合型饲料添加剂甘露寡糖。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T5918饲料产品混合均匀度的测定GB/T6435饲料中水分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB10648饲料标签GB13078饲料卫生标准GB/T13079饲料中总砷的测定GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T13091饲料中沙门氏菌的测定GB/T14699饲料采样GB/T28716饲料中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T30956饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T36858饲料中黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱法NY/T2071饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱-串联质谱法NY/T2550饲料中黄曲霉毒素B1的测定胶体金法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4技术要求4.1载体载体的使用见《饲料原料目录》或《饲料添加剂品种目录》的规定，并应符合GB13078及相关标准的要求。4.2外观与性状色泽均匀一致，无结块，无异味，无杂物，呈粉末状。4.3理化指标应符合表1的规定。2T/ESL32004—2024表1理化指标a也可按供需双方约定的甘露寡糖要求执行。4.4卫生指标应符合表2的规定。表2卫生指标5取样按GB/T14699的规定执行。6试验方法6.1外观与性状取适量试样置于洁净的白色盘（瓷盘或同类容器）中，在自然光状态下，观察其色泽、状态，闻其气味。6.2水分按GB/T6435的规定执行。6.3粒度按GB/T5917.1的规定执行。6.4混合均匀度按GB/T5918的规定执行。6.5甘露寡糖按附录A或附录B的规定执行，其中附录A为仲裁法。6.6总砷按GB/T13079的规定执行。3T/ESL32004—20246.7铅按GB/T13080的规定执行。6.8黄曲霉毒素B1按GB/T36858或NY/T2550或NY/T2071的规定执行，其中NY/T2071为仲裁法。6.9玉米赤霉烯酮按GB/T28716或NY/T2071的规定执行，其中NY/T2071为仲裁法。6.10脱氧雪腐镰刀菌烯醇按GB/T30956的规定执行。6.11沙门氏菌按GB/T13091的规定执行。7检验规则7.1组批以相同的原料、相同的生产工艺、连续生产或同一班次生产的同一规格的产品为一批，每批产品不得超过60t。7.2出厂检验出厂检验项目为外观与性状、水分、甘露寡糖。出厂检验合格并附合格证方可出厂。7.3型式检验型式检验项目为本文件第4章规定的所有项目，在正常生产情况下，每年至少进行1次型式检验。有下列情况之一时，亦应进行型式检验：a）产品定型投产时；b）生产工艺或主要原料来源有较大改变，可能影响产品质量时；c）停产3个月以上，重新恢复生产时；d）出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；e）产品质量管理部门提出检验要求时。7.4规则判定7.4.1所验项目全部合格，判定为该批次产品合格。7.4.2检验结果中有任何指标不符合本文件规定时，可自同批产品中重新加倍取样进行复检。复检结果即使有一项指标不符合本文件规定，则判定该批产品不合格。微生物指标不复检。7.4.3各项目指标的极限数值判定按GB/T8170修约值比较法执行。8标签、包装、运输、贮存和保质期8.1标签应符合GB10648的规定。8.2包装本品采用具有防潮、密封等功能的包装材料，其净含量允差见国家市场监督管理总局[2023]第70号令的规定。8.3运输4T/ESL32004—2024运输中防止包装破损、日晒、高温、雨淋，禁止与有毒有害物质混运。8.4贮存避免高温贮存。储存环境应通风、干燥，防曝晒、防雨淋、防虫、防鼠，不得与有毒有害的物质混贮。8.5保质期未开启包装的产品，在上述规定的运输、贮存条件下，产品保质期不低于12个月，具体期限应在产品标签中注明。5T/ESL32004—2024甘露寡糖含量的测定高效液相色谱法A.1原理同一时刻进入色谱柱的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱两相之间进行反复多次的分配，由于各组分在色谱柱中的移动速度不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开，按顺序流出色谱柱，进入信号检测器，在记录仪上或数据装置上显示出各组分的谱峰数值，根据保留时间对照定性，依据峰面积以甘露寡糖标准品为参考计算各种糖组分的含量。本文件定量限为0.25%。A.2试剂和材料A.2.1水：符合GB/T6682中一级水的规格。A.2.2甘露二糖标准储备溶液（1mg/mL称取甘露二糖0.050g，于50mL容量瓶中，用水溶解定容，得到甘露二糖标准储备溶液。甘露二糖标准品使用MegazymeO-MBI1，纯度＞95%。A.2.3甘露三糖标准储备溶液（1mg/mL称取甘露三糖0.050g，于50mL容量瓶中，用水溶解定容，得到甘露三糖标准储备溶液。甘露三糖标准品使用源叶生物B250892，纯度≥98%。A.2.4甘露四糖标准储备溶液（1mg/mL称取甘露四糖0.050g，于50mL容量瓶中，用水溶解定容，得到甘露四糖标准储备溶液。甘露四糖标准品使用MegazymeO-MTE3，纯度＞95%。A.2.5甘露五糖标准储备溶液（1mg/mL称取甘露五糖0.050g，于50mL容量瓶中，用水溶解定容，得到甘露五糖标准储备溶液。甘露五糖标准品使用MegazymeO-MPE4，纯度＞98%。A.3仪器设备A.3.1高效液相色谱仪：带示差检测器和柱温箱。A.3.2分析天平：精度0.0001g。A.3.3过滤膜：0.22μm微孔水相滤膜。A.4试验步骤A.4.1色谱条件色谱柱：糖柱（6.5mm×300mm，waterssugarpak-1或7.7mm×300mm，Hi-Plex或同等效果糖柱）。流动相：纯水。柱温：65℃。示差检测器温度：50℃。流速：0.8mL/min。进样量：20μL。A.4.2试样溶液的制备1MegazymeO-MBI是商品名，2源叶生物B25089是商品名，给出这一信息3MegazymeO-MTE是4MegazymeO-MPE是商品名，给出这一信息是为了给6T/ESL32004—2024称取样品0.5g～2g（精确至0.001g加水定容至50mL，水浴摇床提取30min。取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后备用。A.4.3标准曲线绘制分别取A.2.2～A.2.5中制备的标准储备溶液（甘露二糖、甘露三糖、甘露四糖、甘露五糖）用水配制成不同浓度的标准溶液，按照A.4.1中色谱条件进行分析。以色谱峰面积为横坐标，标准溶液浓度为纵坐标，分别绘制标准曲线。甘露二糖～甘露五糖标准溶液推荐浓度均为：0.01mg/mL、0.025mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL。A.4.4测定取试样溶液（A.4.2）按照A.4.1中的色谱条件进行分析，记录各色谱峰的保留时间和峰面积。用标准溶液的色谱峰的保留时间定性，以外标法计算甘露二糖～甘露五糖各组分的含量。A.5试验数据处理试样中甘露寡糖的含量以质量分数2−5表示，单位为百分比（%），按式（A.1）计算：2−5=×100.....................(A.1)式中：X2-5——试样中甘露寡糖（甘露二糖～甘露五糖）的含量，单位为百分比（%）；c2——根据试样溶液的峰面积，在标准曲线上查得试样溶液的甘露二糖的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；c3——根据试样溶液的峰面积，在标准曲线上查得试样溶液的甘露三糖的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；c4——根据试样溶液的峰面积，在标准曲线上查得试样溶液的甘露四糖的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；c5——根据试样溶液的峰面积，在标准曲线上查得试样溶液的甘露五糖的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；m——称取样品的质量（以干基计），单位为克（g）；V——溶解样品的体积，单位为毫升（mLn——样品的稀释倍数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留到小数点后1位。A.6精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝B对差值，应不超过其算术平均值的5%。T/ESL32004—2024甘露寡糖的测定方法分光光度法B.1原理经乙醇沉淀，将样品中聚糖进行分离，剩余甘露寡糖与蒽酮溶液生成蓝绿色化合物，在波长550nm处测定试样溶液吸光度，根据标准曲线计算甘露寡糖含量。B.2试剂或材料B.2.1水：GB/T6682，三级。B.2.2甘露糖标准品：CAS：3458-28-4，含量≥98％。B.2.3蒽酮溶液：称取0.600g蒽酮（CAS：90-44-8，分析纯）于烧杯中，缓缓加入200mL浓硫酸（98%的浓硫酸）边加边搅拌，完全溶解呈透明溶液后，将其贮存于棕色瓶中，当日配制使用，避光保存。B.2.4乙醇溶液：4份无水乙醇（纯度99.5%）与1份水混合制备。B.3仪器设备B.3.1分析天平：精度0.0001g。B.3.2分光光度计。B.3.3恒温水浴锅。B.3.4旋涡混合器。B.3.5离心机。B.3.62000W电炉。B.3.7数控超声波清洗器。B.4试验步骤B.4.1标准曲线绘制B.4.1.1甘露糖标准贮备溶液（2mg/mL）称取甘露糖标准品（B.2.2）0.2g（精确至0.001g）用水溶解，转移至100mL容量瓶中，用水定容，混匀。B.4.1.2甘露糖标准使用液分别准确移取甘露糖标准贮备液（B.4.1.1）1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL于50mL容量瓶中，用水稀释、定容、混匀。配制成浓度分别为40μg/mL、80μg/mL、120μg/mL、160μg/mL、200μg/mL、240μg/mL标准系列溶液。B.4.1.3制作标准曲线依次移取1.0mL甘露糖标准使用液于6个具塞比色管中，并以1.0mL水作为空白对照，分别准确加入7mL蒽酮溶液（B.2.3），摇匀后将7支具塞比色管放在沸水浴中加热9min后，取出立即用流水迅速冷却。用1cm比色皿在550nm处测其吸光度。以空白对照管溶液调零点，记录吸光度。以甘露寡糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出标准曲线。B.4.2试样测定B.4.2.1试样溶液制备称取试样1.0g（精确至0.001g加乙醇溶液（B.2.4）定容至50mL，震荡提取30min，用中性定量滤纸过滤。准确移取10mL滤液置于比色管中，烘干。加10mL蒸馏水，于超声波复溶，完全溶解后8T/ESL32004—2024定容至100mL，作为待测溶液。待测溶液中甘露寡糖浓度控制在0.08～0.18mg/mL，对应净吸光值0.2~0.5。B.4.2.2测定移取1mL待测溶液于具塞比色管中，准确加入7mL蒽酮溶液（B.2.3），摇匀，放入沸水浴中加热9min，取出立即用流