微生物检测步骤

微生物操作流程1培养基制备：按培养基标签使用量，用滤纸称量培养基至三角瓶中，放置电炉（加石棉网）加热至沸腾取下；加热时用玻璃棒搅拌防止糊底。乳糖胆盐发酵培养基用刻度吸管或移液器取50ml（也可以加10ml培养基，后续加入样品液对应为1ml）加入试管中，加小倒管，小倒管中不能有气泡，盖上管塞。0.9%生理盐水制备：取氯化钠9g加蒸馏水991g，搅拌至氯化钠全部溶解，配制成0.9%生理盐水。实验用水：蒸馏水2灭菌：将盛装培养基和生理盐水的三角瓶口，镊子、剪刀、移液器枪头、乳糖发酵管用报纸包扎，乳糖发酵管放入烧杯，放入高压蒸汽灭菌器灭菌121度30min，灭菌后通过传递窗传入无菌室，用酒精喷壶对表面消毒后放置在不锈钢台上。3传递窗使用规则：使用前后要开启紫外杀菌30min，传递窗两侧门严格执行一开一关，严禁同时打开。4无菌室使用前对无菌室紫外灭菌30min，开启空气净化≥1h，使用时提前30min关掉紫外，洁净台紫外灭菌30min；使用时关掉紫外，开启排风系统。5无菌室进出流程：一更换鞋或者带鞋套，二更更换实验服，缓冲间洗手消毒后进入无菌室，进入无菌室后尽量少走动。7打开洁净台排风系统，用75%酒精擦拭操作台面消毒，将传递窗传递进入物品及一次性培养皿放入洁净台。8样品制备及无菌操作（在洁净台中操作）：样品液制备：用酒精喷壶对手部消毒，从均质袋底部取出均质袋，不要碰触袋子开口，打开袋子放在天平上的大烧杯里，剪刀用酒精棉球消毒后剪取样品10+1g，加入生理盐水200g，将袋子口折叠拍打揉搓样品约60下。如需对样品进行稀释，用移液器吸取1ml制备液，放入9ml无菌生理盐水中，就稀释为10倍，以此类推。(卫材一般不需要再稀释)无菌操作：细菌菌落总数和真菌菌落总数操作，用移液枪取1ml所需浓度样品液加入平皿中，加入时，平皿不能完全打开，仅开启一半小口加入样品即可，倒入15-20ml培养基，平皿在桌面旋转混匀，分别做3个培养皿，凝固后从传递窗传递至培养间，培养皿倒置放入培养箱培养，一摞可放置8-10个培养皿，避开培养箱通风口，放置培养基水分过度流失。大肠菌群操作，取下乳糖发酵管塞，用移液枪取5ml所需浓度样品液加入乳糖发酵管中，盖好管塞。空白对照：另取新的枪头吸取1ml灭菌生理盐水加入平皿中，倒入培养基，分别做细菌菌落总数和真菌菌落总数空白培养皿；吸取1ml灭菌生理盐水加入乳糖发酵管中，做大肠菌群空白对照。9培养条件：检验项目培养温度培养周期观察记录细菌35度2天每天观察菌落大肠杆菌35度1天培养基浑浊，小倒管有气泡（阳性）真菌25度7天在第3、5、7每天观察菌落10菌落计数：平皿生长菌落平均数乘以稀释倍数（20），单位cfu/g11标准产品≤200cfu/g空气落菌≤2500cfu/m3工作台表面≤20cfu/cm2工人手表面≤300cfu/只手无菌室3沉降菌/皿洁净台1沉降菌/皿其他检测1手部检测：用浸在10ml生理盐水中的灭菌棉签，在五指指尖到指端来回涂擦10次，剪去手接触部分棉签，将棉签放入10ml灭菌生理盐水试管中，混匀，取1ml加平皿加培养基，剪刀要灭菌或用酒精棉消毒。菌落计数：平皿生长菌落数乘以10，单位cfu/只手2工作设备台面：用浸在10ml生理盐水中的灭菌棉签，涂抹5cm*5cm面积表面10次，剪去手接触部分棉签，将棉签放入10ml灭菌生理盐水试管中，混匀，取1ml加平皿加培养基，剪刀要灭菌或用酒精面消毒。菌落计数：平皿生长菌落数乘以10除以面积，单位cfu/cm23空气落菌：事先准备细菌菌落总数培养基35度培养24h，检查无污染，在待检处打开平皿盖，放置5min，35度培养48h观察菌落计数：平皿生长菌落数乘以50000除以