THBIQA 0009-2024 人体血液中7种多激酶类药物含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法

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T/HBIQAT/HBIQA0009—20247-DeterminationofsevenpolykinasesinhumanbloodbyHPLC-MS/MS2024-08-15发布 2024-10-15实施河北省检验检疫学会 发布T/HBIQA0009—2024前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由河北省检验检疫学会提出并归口。本文件起草单位：河北省药品医疗器械检验研究院、河北医科大学药学院。本文件主要起草人：李挥、梁艳、宋莉、李怡霖、刘亚楠。T/HBIQA0009T/HBIQA0009—2024PAGEPAGE11人体血液中7种多激酶类药物含量的测定高效液相色谱-串联质谱法范围本文件规定了人体血液中7种多激酶类药物含量的高效液相色谱-串联质谱检测方法。规范性引用文件（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。原理样品经甲醇提取、无水硫酸镁盐析、N-丙基乙二胺（PSA）净化后，涡旋混匀、冷冻离心、氮吹复溶，进行液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。试剂和材料试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。甲醇：色谱纯。甲酸：色谱纯。无水硫酸镁。N-丙基乙二胺（PSA）。5.1.5 标准品：索拉菲尼（CAS号：475207-59-1），阿西替尼（CAS号：319460-85-0）（CAS（CAS（CAS64735466AS7966716-3AS9283713-2）98%。混合标准储备溶液的配制：分别称取布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐1mg（0.01mg）10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，分别配制成布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐替尼、埃罗替尼、西地尼布的储备溶液，于-20℃保存至分析。1mg（0.01mg）10mL量瓶中，用甲醇0.1mg/mL的内标储备液，于-20℃保存至分析。500μL标准储备溶液（5.1.6）50mL量瓶中，加甲醇稀释，涡旋混匀，得到1μg/mL的标准中间溶液，于-20℃保存备用。体积分数1.0mL1L仪器设备液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。氮吹浓缩仪。涡旋振荡器。电子分析天平（0.01mg)。高速冷冻离心机（22000rpm）。试样制备4℃3000r/min10储存待测。试验步骤试样预处理取200μL血液试样（7）于5mL离心管中，准确加入1.0mL甲醇、250mg无水MgSO4、35mgPSA进行盐析和净化，涡旋混匀30s后，经12000r/min，4℃冷冻离心10min。上清液全300μL300.22μm微孔滤膜，待测定。标准曲线7步骤进行处理，用得到的空白样品提取液，将混合标准储备溶液5、10、25、50、100、250、400500ng/mL10、20、50、100、200、500、800、1000ng/mL的系列混合标准工作溶液（100ng/mL），浓度由低到高仪器参考条件液相色谱参考条件色谱柱：ZorbaxRRHDStablebondAq（502.1mm，1.8μm），或相当者。流动相：A0.1%甲酸溶液；B相甲醇。柱温：40℃。进样体积：5μL。流速：0.3mL/min1：表1梯度洗脱程序表时间/min流动相A/%流动相B/50100301003.1703057030质谱参考条件电离方式：电喷雾电离，正离子模式。电喷雾电压：3500V。50Arb。辅助气流速：10Arb。离子传输温度：325℃。.雾化温度：350℃。e.碰撞气：氩气。其他质谱条件见附录A。测定测定步骤将试样溶液注入液相色谱-串联质谱仪中，得到7种多激酶抑制剂的质谱响应值，根据标准曲7（定性判定在相同条件测定样品溶液和标准溶液，如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中的某种组分峰的保留时间一致（变化范围在±2.5%），并且所选择的两对子离子的质荷比一致，样品溶液中定性离子相对丰度与浓度相当标准工作溶液中定性离子的相对丰度进行比较时，2规定的范围，则可判断样品中存在该组分。7种多激酶抑制剂标准物质的色谱图参见附录B。表2定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度＞50%＞20%~50%＞10%~20%≤10%允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%数据计算血液样本中各药物浓度含量为：式中:Xi——试样中待测组分含量，单位为纳克每毫升(ng/mL)；ρi——由标准曲线得出的测试液中某种组分的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；V——定容体积，单位为毫升(mL)；K——稀释倍数；V试样——试样体积，单位为毫升(mL)。计算结果保留三位有效数字。空白试验取空白血样，按8.1-8.4测定步骤进行。定量限和重复性定量限本方法索拉菲尼、布立尼布、利尼伐尼、阿西替尼、戈伐替尼的定量限为5ng/mL，西地尼布、埃罗替尼的定量限为10ng/mL。重复性在重复性实验条件下获得两次独立实验结果的绝对差值不得超过算数平均值的15%。附录A（资料性附录）质谱参数表A.1目标物的质谱参数和参考保留时间名称母离子(m/z)子离子(m/z)碎裂电压(V)碰撞电压(V)保留时间(min)索拉菲尼465.1252.0a/270.013633/241.50阿西替尼387.1220.9a/355.97751/201.16多韦替尼393.1334.0a/336.08627/291.11埃罗替尼394.1278.0a/336.010131/241.14西地尼布451.284.0a/112.07345/241.14布立尼布371.2149.0a/331.08733/251.40利尼伐尼376.2207.0a/251.08445/261.34戈伐替尼634.2184.0a/451.07922/291.12a代表定量离子附录B（资料性附录）ⅠⅠ